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文档简介

中国兽医协会发布I请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件主要起草人：牛冬、马翔、宋厚辉、杨永春、邱国强、石坚、费群伟、白洪青、姚1朱鹮性别鉴定的PCR检测方法本文件规定了朱鹮（Crestedibis）性别鉴定的鉴定流程及要4缩略语DNA：脱氧核糖核酸（DeoxyribonucleicAcid）PCR：聚合酶链式反应（Polymerasechainreaction）dNTP：脱氧核糖核苷三磷酸（Deoxy-ribonucleosideTriphosph冷冻离心机（最大离心力10000g以上）、PCR仪、微量分光光度计、掌上离心机、电泳仪、凝胶成像去离子水、DNAMarker、2×GreenTaqMix无水乙醇或异丙醇，已鉴定的雄性朱鹮和雌性朱鹮样品。电泳缓冲液和3M醋酸钠配C将合成的引物溶于适量去离子水中，使引物终浓度2采用苯酚-氯仿法抽提朱鹮羽毛样本DNA，具体步骤取5μL的PCR扩增产物，进行1.5%琼脂糖凝胶电泳（电压200V，电泳20min~30m若扩增条带为156bp和420bp两个条带，则判定为雌性；若3溶液配制A.150×TAE缓冲液Na2EDTA2O242.0g50×TAE缓冲液10mL去离子水A.35×TBE缓冲液Na2EDTA·2H2O3.72g硼酸27.5gA.41×TBE使用液5×TBE缓冲液100mL去离子水拌溶解，然后用冰醋酸（CH3COOH）调pH值至5.2，最后定容至1004B.1朱鹮W染色体特异序列片段参考序列（GenBankATTAACTGAAATCCAGTTCAGGTCAGATTC-3,B.212SrRNA基因位点片段参考序列（GenBankAc5,-AACACCTTGACAAGGTGCGAGGAGCGGGTATCAGGC56D.2按照组织裂解商品试剂盒说明书的操作流程，裂解离心管中的羽毛碎片，56℃水浴消化过夜（1D.4用移液器吸取上层水相至新离心管中in助溶。短暂离心后取DNA溶液，使用微量分光光度计7PCR反应表E.1PCR反应体系2×GreenTaqMix0.5µL0.

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