MEIS1对单核-内皮细胞粘附的调控作用

中文摘要单核-内皮细胞粘附是动脉粥样硬化等炎症性疾病的核心病理环节，但其调控机制尚未完全阐明。骨髓嗜病毒整合位点1（Myeloidecotypevirusinsertionsite1，MEIS1）是HOX基因共调控转录因子，在白血病及肿瘤发生进展中发挥重要作用，但其在单核-内皮细胞粘附中的作用尚不明确。因此，本研究旨在探讨内皮细胞MEIS1对单核细胞与内皮细胞粘附过程的调控作用。·采用氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）构建内皮细胞炎症模型，通过qRT-PCR、Westernblot和免疫荧光检测MEIS1在ox-LDL刺激的HUVECs中的表达变化。采用siRNA敲减MEIS1，或转染质粒过表达MEIS1，通过qRT-PCR、Westernblot检测过表达或敲减MEIS1对ox-LDL诱导的HUVECs中粘附分子及促炎细胞因子表达的影响，采用单核-内皮细胞粘附实验检测过表达或敲减MEIS1后HUVECs对人单核细胞白血病细胞（THP-1）的粘附能力。本研究结果显示，ox-LDL可显著下调HUVECs中MEIS1mRNA及蛋白表达水平。特异性敲低MEIS1表达显著增加ox-LDL诱导下HUVEC中粘附分子（VCAM-1、ICAM-1）的mRNA及蛋白表达，并增加HUVEC与单核细胞的粘附；而过表达MEIS1则显著抑制ox-LDL诱导的HUVEC中粘附分子（VCAM-1、ICAM-1）的mRNA及蛋白表达，并抑制HUVEC与单核细胞的粘附。结论:（1）MEIS1在ox-LDL刺激的血管内皮细胞中表达下调。（2）MEIS1可抑制ox-LDL诱导的内皮细胞中粘附分子表达，抑制单核-内皮细胞粘附。关键词：MEIS1；单核-内皮细胞粘附；动脉粥样硬化；炎症因子TheregulatoryeffectofMEIS1onmonocyteendothelialcelladhesionAbstractMonocyteendothelialcelladhesionisthecorepathologicallinkofinflammatorydiseasessuchasatherosclerosis,butitsregulatorymechanismhasnotbeenfullyclarified.Myeloidecologicalvirusinsertionsite1(MEIS1)isatranscriptionfactorcoregulatedbytheHOXgene,whichplaysanimportantroleinthedevelopmentandprogressionofleukemiaandtumors.However,itsroleinmonocyteendothelialcelladhesionisnotyetclear.Therefore,thisstudyaimstoexploretheregulatoryeffectofendothelialcellMEIS1ontheadhesionprocessbetweenmonocytesandendothelialcells.Anendothelialcellinflammationmodelwasconstructedbyinducinghumanumbilicalveinendothelialcells(HUVECs)withoxidizedlow-densitylipoprotein(ox-LDL).TheexpressionchangesofMEIS1inox-LDLstimulatedHUVECsweredetectedbyqRT-PCR,Westernblot,andimmunofluorescence.UsingsiRNAtoknockdownMEIS1ortransfectionplasmidtooverexpressMEIS1,theeffectsofoverexpressionorknockdownofMEIS1ontheexpressionofadhesionmoleculesandpro-inflammatorycytokinesinoxLDLinducedHUVECsweredetectedbyqRT-PCRandWesternblot.TheadhesionabilityofHUVECstohumanmonocyticleukemiacells(THP-1)afteroverexpressionorknockdownofMEIS1wasdetectedbymonocyteendothelialcelladhesionassay.Theresultsofthisstudyshowedthatox-LDLcansignificantlydownregulatetheexpressionlevelsofMEIS1mRNAandproteininHUVECs.SpecificknockdownofMEIS1expressionsignificantlyincreasesmRNAandproteinexpressionofadhesionmolecules(VCAM-1,ICAM-1)inHUVECinducedbyox-LDL,andenhancesadhesionbetweenHUVECandmonocytes;OverexpressionofMEIS1significantlyinhibitsthemRNAandproteinexpressionofadhesionmolecules(VCAM-1,ICAM-1)inducedbyox-LDLinHUVEC,andsuppressestheadhesionbetweenHUVECandmonocytes.Conclusion:(1)MEIS1isdownregulatedinendothelialcellsstimulatedbyox-LDL.(2)MEIS1caninhibittheexpressionofadhesionmoleculesinendothelialcellsinducedbyox-LDLandsuppressmonocyteendothelialcelladhesion.Keywords:MEIS1;Monocyteendothelialcelladhesion;Atherosclerosis;inflammatoryfactors1、文献综述1.1单核-内皮细胞粘附的概述单核细胞与内皮细胞的粘附是一个多步骤的动态过程，包括滚动、稳定粘附和跨内皮迁移。这一过程需要粘附分子和趋化因子的协同作用。促炎细胞因子（如白细胞介素-6，IL-6）和氧化型低密度脂蛋白（oxidizedlowdensitylipoprotein,ox-LDL）可激活内皮细胞，诱导其表达多种粘附分子，如E-选择素（E-selectin）、P-选择素（P-selectin）、细胞间粘附分子-1（intercellularadhesionmolecule-1,ICAM-1）和血管细胞粘附分子-1（vascularcelladhesionmolecule-1,VCAM-1），从而促进单核细胞的粘附并迁移至内皮细胞下ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Libby</Author><Year>2002</Year><RecNum>3</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[1]</style></DisplayText><record><rec-number>3</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="ra5vfra26p2afcepx0rp2weetep00e2t5x9s"timestamp="1745404547">3</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Libby,P.</author><author>Ridker,P.M.</author><author>Maseri,A.</author></authors></contributors><auth-address>LeducqCenterforCardiovascularResearch,DepartmentofMedicine,BrighamandWomen'sHospital,HarvardMedicalSchool,Boston,MA02115,USA.plibby@</auth-address><titles><title>Inflammationandatherosclerosis</title><secondary-title>Circulation</secondary-title></titles><periodical><full-title>Circulation</full-title></periodical><pages>1135-43</pages><volume>105</volume><number>9</number><keywords><keyword>Aged</keyword><keyword>Arteriosclerosis/diagnosis/*immunology/metabolism</keyword><keyword>Biomarkers/blood</keyword><keyword>DiseaseProgression</keyword><keyword>Female</keyword><keyword>Humans</keyword><keyword>Inflammation/*immunology</keyword><keyword>InflammationMediators/immunology/metabolism</keyword><keyword>Male</keyword><keyword>MiddleAged</keyword><keyword>MyocardialIschemia/immunology</keyword><keyword>RiskFactors</keyword></keywords><dates><year>2002</year><pub-dates><date>Mar5</date></pub-dates></dates><isbn>0009-7322</isbn><accession-num>11877368</accession-num><urls></urls><electronic-resource-num>10.1161/hc0902.104353</electronic-resource-num><remote-database-provider>NLM</remote-database-provider><language>eng</language></record></Cite></EndNote>[1]。其中，E-selectin和P-selectin在单核细胞的滚动中起重要作用，而ICAM-1和VCAM-1则介导单核细胞与内皮细胞之间的牢固粘附ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[2,3]。单核-内皮细胞参与多种炎症相关疾病病理进程，如糖尿病伤口愈合、动脉粥样硬化等。在动脉粥样硬化病理进程中，内皮细胞功能障碍可显著上调粘附分子（如VCAM-1和ICAM-1）的表达水平，驱动单核细胞与血管内膜的粘附及跨内皮迁移。粘附的单核细胞在微环境指导下分化为巨噬细胞，并吞噬ox-LDL形成泡沫细胞。泡沫细胞的聚集构成动脉粥样硬化斑块的核心病理结构。同时，泡沫细胞可分泌促炎因子如IL-6和基质金属蛋白酶（MatrixMetalloproteinases,MMPs）等，进一步加剧局部炎症微环境，并通过降解细胞外基质破坏斑块稳定性，最终导致斑块破裂和血栓形成等严重并发症ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[4,5]。1.2单核-内皮细胞粘附研究进展单核细胞与内皮细胞间的粘附过程涉及复杂的信号转导网络，其中核因子κB（nuclearfactor-kappaB,NF-κB）信号通路具有核心调控作用。在静息状态下，NF-κB与其抑制因子IκB结合以非活性形式存在于细胞质中。当受到肿瘤坏死因子-α（tumornecrosisfactor-α,TNF-α）等刺激时，IκB激酶（IκBkinase,IKK）复合体被激活，IκB被磷酸化及泛素化降解，促使NF-κB转移到细胞核，通过与靶基因启动子区κB位点结合，驱动促炎细胞因子及粘附分子（如VCAM-1和ICAM-1）的转录表达，从而增强内皮细胞粘附能力及单核细胞的粘附和迁移ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>姜梅</Author><Year>2024</Year><RecNum>38</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[6]</style></DisplayText><record><rec-number>38</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="ra5vfra26p2afcepx0rp2weetep00e2t5x9s"timestamp="1745416031">38</key></foreign-keys><ref-typename="Thesis">32</ref-type><contributors><authors><author>姜梅</author></authors><tertiary-authors><author>余丹青,</author></tertiary-authors></contributors><titles><title>DRP1介导的线粒体分裂通过IκB-α/NF-κB促进单核细胞-内皮细胞粘附和动脉粥样硬化</title></titles><keywords><keyword>DRP1</keyword><keyword>线粒体分裂</keyword><keyword>IκB-α/NF-κB通路</keyword><keyword>单核细胞-内皮细胞粘附</keyword><keyword>动脉粥样硬化</keyword></keywords><dates><year>2024</year></dates><work-type>博士</work-type><urls><related-urls><url>/doi/10.27003/ki.gojyu.2024.000039</url></related-urls></urls><electronic-resource-num>10.27003/ki.gojyu.2024.000039</electronic-resource-num><remote-database-provider>Cnki</remote-database-provider></record></Cite></EndNote>[6]。磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（phosphatidylinositol3-kinase/proteinkinaseB,PI3K/Akt）信号通路在单核细胞与内皮细胞粘附过程中同样发挥重要作用。AKT磷酸化激活粘着斑激酶（focaladhesionkinase,FAK）及桩蛋白（paxillin）等衔接蛋白，介导细胞骨架的重组和粘附分子的调节ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[7]。此外，该通路还可通过哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mammaliantargetofrapamycin,mTOR）和NF-κB等下游效应分子，形成正反馈环路持续放大炎症信号，导致粘附分子表达水平异常升高ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[8,9]。单核-内皮细胞粘附过程受到多类生物活性分子的动态调控，包括炎症因子、脂质代谢产物和活性化合物等。例如，TNF-α和白细胞介素-1β（（interleukin-1β，IL-1β）可通过激活内皮细胞中NF-κB信号通路，显著上调粘附分子的表达水平ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[10,11]。此外，脂质代谢产物如ox-LDL也可通过结合其特异性受体，触发内皮细胞释放促炎细胞因子IL-6和趋化因子单核细胞趋化蛋白-1（monocytechemoattractantprotein-1，MCP-1），从而增强单核细胞的粘附能力ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Zeng</Author><Year>2023</Year><RecNum>28</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[12]</style></DisplayText><record><rec-number>28</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="ra5vfra26p2afcepx0rp2weetep00e2t5x9s"timestamp="1745411379">28</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Zeng,Q.</author><author>Xie,J.</author><author>Li,F.</author></authors></contributors><auth-address>GeneralPractice,FifthClinicalMedicalCollege,XinjiangMedicalUniversity,Urumqi,China. DepartmentofCardiovascularMedicine,FifthClinicalMedicalCollege,XinjiangMedicalUniversity,Urumqi,China. LeshanPeople'sHospitalICU,Leshan,China.</auth-address><titles><title>TRIM59attenuatesox-LDL-inducedendothelialcellinflammation,apoptosis,andmonocyteadhesionthroughAnxA2</title><secondary-title>AnnTranslMed</secondary-title></titles><periodical><full-title>AnnTranslMed</full-title></periodical><pages>42</pages><volume>11</volume><number>2</number><edition>20230111</edition><keywords><keyword>AnxA2</keyword><keyword>Atherosclerosis(AS)</keyword><keyword>Trim59</keyword><keyword>inflammation</keyword><keyword>monocyteadhesion</keyword></keywords><dates><year>2023</year><pub-dates><date>Jan31</date></pub-dates></dates><isbn>2305-5839(Print) 2305-5839</isbn><accession-num>36819529</accession-num><urls></urls><custom1>ConflictsofInterest:AllauthorshavecompletedtheICMJEuniformdisclosureform(availableat/article/view/10.21037/atm-22-6044/coif).Theauthorshavenoconflictsofinteresttodeclare.</custom1><custom2>PMC9929822</custom2><electronic-resource-num>10.21037/atm-22-6044</electronic-resource-num><remote-database-provider>NLM</remote-database-provider><language>eng</language></record></Cite></EndNote>[12]。ChenZ等研究进一步揭示，脂质代谢产物氨甲酰化高密度脂蛋白（carbamylatedhigh-densitylipoprotein,C-HDL）可通过激活内皮细胞中的NF-κB信号通路，促进单核细胞与内皮细胞的粘附ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[13]。1.3骨髓噬病毒整合位点1研究进展骨髓噬病毒整合位点1（Meishomobox1,MEIS1）最初于1995年在病毒诱导的小鼠白血病模型中被鉴定为致癌性转录因子。随后，其人类同源基因在肝脏、小脑组织中被克隆，并被发现在髓系白血病细胞中高表达ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[14]。MEIS1属于三氨基酸环延伸（threeaminoacidloopextension,TALE）同源结构域转录因子家族，该家族还包括MEIS2和MEIS3等重要成员ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Jiang</Author><Year>2021</Year><RecNum>31</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[15]</style></DisplayText><record><rec-number>31</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="ra5vfra26p2afcepx0rp2weetep00e2t5x9s"timestamp="1745411634">31</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Jiang,M.</author><author>Xu,S.</author><author>Bai,M.</author><author>Zhang,A.</author></authors></contributors><auth-address>DepartmentofNephrology,StateKeyLaboratoryofReproductiveMedicine,Children'sHospitalofNanjingMedicalUniversity,Nanjing,People'sRepublicofChina. JiangsuKeyLaboratoryofPediatrics,NanjingMedicalUniversity,Nanjing,People'sRepublicofChina. NanjingKeyLabofPediatrics,Children'sHospitalofNanjingMedicalUniversity,Nanjing,People'sRepublicofChina.</auth-address><titles><title>TheemergingroleofMEIS1incellproliferationanddifferentiation</title><secondary-title>AmJPhysiolCellPhysiol</secondary-title></titles><periodical><full-title>AmJPhysiolCellPhysiol</full-title></periodical><pages>C264-c269</pages><volume>320</volume><number>3</number><edition>20201209</edition><keywords><keyword>Animals</keyword><keyword>Carcinogenesis/genetics</keyword><keyword>CellDifferentiation/*genetics</keyword><keyword>CellProliferation/*genetics</keyword><keyword>Humans</keyword><keyword>MyeloidEcotropicViralIntegrationSite1Protein/*genetics</keyword><keyword>Myocytes,Cardiac/pathology</keyword><keyword>Meis1</keyword><keyword>cellproliferation</keyword><keyword>differentiation</keyword><keyword>glycolysis</keyword></keywords><dates><year>2021</year><pub-dates><date>Mar1</date></pub-dates></dates><isbn>0363-6143</isbn><accession-num>33296285</accession-num><urls></urls><electronic-resource-num>10.1152/ajpcell.00422.2020</electronic-resource-num><remote-database-provider>NLM</remote-database-provider><language>eng</language></record></Cite></EndNote>[15]。MEIS1在不同实体肿瘤中呈现显著表达异质性：在血液系统恶性肿瘤中，MEIS1通过调节细胞周期蛋白和凋亡相关基因的表达，促进白血病细胞的增殖和存活并抑制其凋亡，其高表达与疾病进展和预后不良相关ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[14]；在结直肠癌、非小细胞肺癌等癌症中表达上调；而在肾透明细胞癌、前列腺癌等癌症中呈现低表达特征ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[14,16]。近年研究表明，MEIS1在心血管系统中具有重要生物学功能。通过调控细胞周期抑制因子（如p21）和促增殖信号通路（如Wnt/β-catenin），MEIS1可动态调节心肌细胞再生与内皮细胞增殖：在心肌梗死急性期抑制心肌细胞过度增殖以维持组织稳态，同时激活血管内皮细胞促进侧支循环重建，这种双重调控机制为心血管再生治疗提供了新思路ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[17]。2、前言单核-内皮细胞粘附是指血管内皮细胞在病理性刺激（如高脂血症、氧化应激或炎症因子）作用下激活，引起促炎细胞因子（TNF-α、IL-1β等）、粘附分子（VCAM-1、ICAM-1）及趋化因子（MCP-1）表达显著上调，招募单核细胞诱导趋化-粘附级联反应，最终导致炎性细胞向血管壁的异常浸润，诱导血管内皮细胞功能失调、脂质异常沉积和持续炎症反应，是动脉粥样硬化等慢性血管疾病发生和发展的关键步骤之一。氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）能激活内皮细胞，诱导内皮细胞表达粘附分子，促进单核细胞与内皮细胞产生粘附作用，然而介导这一过程的机制尚未明确。MEIS1作为HOX转录因子家族的重要成员，其生物学功能已涉及造血细胞发育、肿瘤发生及心血管稳态维持等多个领域。现有研究表明，MEIS1不仅参与白血病干细胞的自我更新调控，还在心肌细胞增殖抑制和内皮细胞周期调控网络中发挥关键作用。然而，关于MEIS1在血管炎症反应中，特别是单核-内皮细胞粘附过程中的调控机制，尚未见系统性研究报道。本研究通过构建ox-LDL诱导的内皮细胞炎症模型，结合基因沉默/过表达技术，初步探究MEIS1对内皮细胞中粘附分子表达的调控作用，为血管炎症及相关疾病的干预策略提供了理论依据和潜在靶点。4、结果4.1MEIS1在ox-LDL处理的HUVECs中表达下调ox-LDL是内皮细胞炎症反应和细胞粘附的重要刺激物ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[18]，因此，本研究采用ox-LDL处理HUVEC以诱导内皮细胞激活及粘附表型。将HUVECs分为Control组及ox-LDL（50μg/mL，24、36、48小时）组，qRT-PCR结果显示，与Control组相比，ox-LDL处理的HUVECs中MEIS1mRNA表达水平显著降低（图-1A）；Westernblot结果显示，ox-LDL处理的HUVECs中MEIS1蛋白水平也显著降低，并且MEIS1蛋白水平随ox-LDL处理时间的延长而进一步降低（图-1B）；免疫荧光结果显示，MEIS1在HUVECs中定位于细胞核，且ox-LDL处理24h后，MEIS1荧光强度减弱，信号分布弥散，细胞核形态异常（图-1C)。以上结果表明，ox-LDL可诱导内皮细胞MEIS1表达下调。图1MEIS1在ox-LDL处理的HUVEC中下调Figure-1.MEIS1isdownregulatedinox-LDL-treatedHUVECs.(A)qRT-PCRofMEIS1inControlandox-LDL-treatedHUVECs;n=6.(B)RepresentativeimagesandstatisticsofMEIS1proteinexpressionattheindicatedtimepointsstimulatedwithox-LDL(50μg/mL);n=6.(C)RepresentativeimagesandstatisticsofimmunofluorescencestainingofMEIS1stimulatedwithox-LDL(50μg/mL)for24hours,scarbarrepresents20μm;n=6.4.2内皮细胞敲减MEIS1对ox-LDL刺激下粘附分子和炎症因子表达的影响本研究采用siRNA敲减HUVECs中MEIS1表达，并验证敲减MEIS1对血管内皮细胞粘附分子及促炎细胞因子表达的影响。MEIS1敲减效率验证的qRT-PCR结果显示，与si-NC组相比，si-MEIS1组HUVECs中MEIS1的mRNA表达水平显著降低；Westernblot结果显示，与si-NC组相比，si-MEIS1组的MEIS1蛋白表达也显著降低（图-2）。这表明siRNA转染成功实现了MEIS1在HUVECs中转录水平及蛋白水平的稳定降低。接下来，我们探究在血管内皮细胞中，敲减MEIS1对粘附分子、促炎细胞因子表达的影响。qRT-PCR结果显示，ox-LDL刺激下，相对于对照组，敲减MEIS1使ICAM1、VCAM1、CD62E、MCP-1、IL-1β的mRNA水平显著升高（图-3A）。Westernblot结果显示，在ox-LDL刺激下，敲减MEIS1使ICAM1、VCAM1、CD62E的蛋白水平也显著升高（图-3B）。综上结果表明，血管内皮细胞中敲减MEIS1增加了粘附分子、促炎细胞因子对ox-LDL的反应性，引起粘附分子、促炎细胞因子表达上调。图2在人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中MEIS1的敲减效率Figure-2.KnockdownefficiencyofMEIS1inHUVECs.(A)DeterminationofMEIS1knockdownefficiencybyqRT-PCR;n=6.(B)DeterminationofMEIS1knockdownefficiencybyWesternblot;n=3.图3HUVECs中MEIS1的敲低增加粘附分子和炎症因子对ox-LDL的反应Figure-3.KnockdownofMEIS1inHUVECsincreasesadhesionmolecules,inflammatoryfactorsinresponsetoox-LDL.(A)Alterationofadhesionmolecules,inflammatoryfactorsmRNAafterknockdownofMEIS1inHUVECsunderox-LDL(50μg/mL)treatmentfor24hours.N=5-6.(B)RepresentativeimagesofalteredproteinlevelsofrelatedadhesionmoleculesafterknockdownofMEIS1inHUVECsunderox-LDL(50μg/mL)treatmentfor24hours,andstatisticalimages.n=4.4.3内皮细胞敲减MEIS1对单核-内皮细胞粘附的影响本研究通过单核-内皮细胞粘附实验探究血管内皮细胞敲减MEIS1对其粘附能力的影响。THP-1细胞与HUVECs共培养的荧光显微镜图像显示，在未以ox-LDL处理的HUVEC中，与si-NC组相比，si-MEIS1未明显增加HUVECs对THP-1细胞的粘附；而在ox-LDL处理后，与si-NC组相比，si-MEIS1后HUVECs对THP-1细胞的粘附数量明显增多（图-4）。以上结果表明，敲除MEIS1可显著增加ox-LDL刺激下单核细胞与内皮细胞的粘附。图4HUVECs中MEIS1的敲低增加单核细胞与内皮细胞的粘附Figure-4.KnockdownofMEIS1inHUVECsincreasesmonocyte-endothelialcelladhesion.(A)NumberofTHP-1cells(green)adheringtoHUVECsinsi-NCorsi-MEIS1GroupsunderadministrationofPBSorox-LDL(50μg/mL)for24hours,scarbarrepresents200μm.(B)ThestatisticalimageofthenumberofTHP-1cellsineachfieldofviewinFigureA.n=6.4.4内皮细胞过表达MEIS1对ox-LDL刺激下粘附分子和炎症因子表达的影响本研究采用转染过表达质粒使HUVECs过表达MEIS1，并验证过表达MEIS1对血管内皮细胞粘附分子及促炎细胞因子表达的影响。MEIS1过表达效率验证的qRT-PCR结果显示，与oe-NC组相比，oe-MES1组HUVECs中MEIS1的mRNA表达水平显著升高。Westernblot结果显示，与oe-NC组相比，oe-MES1组中的MEIS1蛋白表达的显著增加，这表明过表达质粒转染成功实现了MEIS1在HUVECs中转录水平及蛋白质的水平稳定增加（图-5）。接下来我们探究了在血管内皮细胞中，过表达MEIS1对粘附分子、促炎细胞因子表达的影响。qRT-PCR结果显示，ox-LDL刺激下，相对于对照，过表达MEIS1使ICAM1、VCAM1、CD62E、MCP-1、IL-1β的mRNA水平显著降低（图-6A）。Westernblot结果显示，在ox-LDL刺激下，过表达MEIS1使ICAM1、VCAM1、CD62E的蛋白水平也显著降低（图-6B）。综上结果表明，血管内皮细胞中过表达MEIS1降低了粘附分子、促炎细胞因子对ox-LDL的反应性，引起粘附分子、促炎细胞因子表达降低。图5MEIS1在HUVECs中的过表达效率Figure-5.OverexpressionefficiencyofMEIS1inHUVECs.(A)DeterminationofMEIS1overexpressionefficiencybyqRT-PCR;n=5.(B)DeterminationofMEIS1overexpressionefficiencybyWesternblot;n=4.图6HUVECs中MEIS1的过表达减少了粘附分子和炎症因子对ox-LDL的反应Figure-6.OverexpressionofMEIS1inHUVECsreducesadhesionmolecules,inflammatoryfactorsinresponsetoox-LDL(A)Alterationofadhesionmolecules,inflammatoryfactorsmRNAafteroverexpressionofMEIS1inHUVECsunderox-LDL(50μg/mL)treatmentfor24hours.n=6.(B)RepresentativeimagesofalteredproteinlevelsofrelatedadhesionmoleculesafteroverexpressionofMEIS1inHUVECsunderox-LDL(50μg/mL)treatmentfor24hours,andstatisticalimages.n=4.4.5内皮细胞过表达MEIS1对内皮细胞粘附能力的影响本研究通过单核-内皮细胞粘附实验探究血管内皮细胞过表达MEIS1对其粘附能力的影响。THP-1细胞与HUVECs共培养的荧光显微镜图像显示。在未以ox-LDL处理的HUVECs中，与oe-NC组相比，过表达MEIS1不影响HUVECs对THP-1细胞的粘附；在ox-LDL处理后，与NC组相比，过表达MEIS1显著减少HUVECs对THP-1细胞的粘附数量（图-5）。以上结果表明，过表达MEIS1可显著减少ox-LDL刺激下单核细胞与内皮细胞的粘附。图7在人脐静脉内皮细胞（HUVECs）中过表达MEIS1减少单核细胞-内皮细胞粘附Figure-7.OverexpressionofMEIS1inHUVECsreducesmonocyte-endothelialcelladhesion.(A)NumberofTHP-1cells(green)adheringtoHUVECsinoe-NCoroe-MEIS1GroupsunderadministrationofPBSorox-LDL(50μg/mL)for24hours,scarbarrepresents200μm.(B)ThestatisticalimageofthenumberofTHP-1cellsineachfieldofviewinFigureA.n=6.5、讨论单核细胞与内皮细胞的粘附是指在病理刺激下，受损的血管内皮细胞通过表达促炎因子和粘附分子，诱导循环血液中的单核细胞迁移至血管壁并引发血管壁炎症反应的过程。血管内皮细胞是覆盖于血管内壁的一层扁平细胞，具有屏障、调节血管张力、抗炎等功能。在生理状态下，内皮细胞通过分泌一氧化氮（NitricOxide，NO）、前列环素等活性分子，调节血管张力，抑制血小板聚集，并维持白细胞与内皮细胞间的低粘附状态ADDINEN.CITEADDINEN.CITE.DATA[19]。然而，在病理刺激（如高脂血症、氧化应激或炎症因子）下，内皮细胞发生功能紊乱，促炎细胞因子、粘附分子、趋化因子表达上调，从而驱动单核细胞向血管壁的募集与浸润，加剧局部炎症反应ADDINEN.CITE<EndNote><Cite><Author>Libby</Author><Year>2002</Year><RecNum>36</RecNum><DisplayText><styleface="superscript">[20]</style></DisplayText><record><rec-number>36</rec-number><foreign-keys><keyapp="EN"db-id="ra5vfra26p2afcepx0rp2weetep00e2t5x9s"timestamp="1745415606">36</key></foreign-keys><ref-typename="JournalArticle">17</ref-type><contributors><authors><author>Libby,P.</author></authors></contributors><auth-address>DepartmentofMedicine,BrighamandWomen'sHospital,HarvardMedicalSchool,Boston,Massachusetts02115,USA.plibby@</auth-address><titles><title>Inflammationinatherosclerosis</title><secondary-title>Nature</secon