（正式版）DB32∕T 2791-2015 《水稻品种 南粳9108》

DB32AjaponicaRiceVarietyNanjing9108江苏省质量技术监督局发布I本标准主要起草人：姚姝、陈涛、赵春芳、赵庆勇、周丽慧、赵凌、朱镇、张亚东、王才1水稻品种南粳9108本标准适用于江苏省苏中及宁镇扬丘陵地区中上等肥力条件下种植的机插稻每亩有效穗（21～22）万，每穗总粒数（130～140）粒，结实率>90%，千粒重（25～2手栽秧(149～154)d，机插秧（145~21234（40.1~50.0）cm5（1.5~2.0）cm6直立15°78（25.1~35.0）cm9（1.5~2.0）cm直立15°（0.7~1.0）cm），1234无5678931>85%2>75%3>70%4567891234感56抗稻谷的暗胚乳基因和香米基因的分子检测方法(资料性附录)暗胚乳突变基因和香米基因的分子检测方法南粳9108是含有暗胚乳突变基因Wx-mq和香米基因fgr的水稻品种，可针对这两个基因进行分子标记检测，辅助辨别品种的真伪。A.1Wx-mq基因四引物PCR分子标记检测A.1.1引物PCR分子标记序列稻谷出苗后在三叶期按单株提取基因组DNA,利用四引物PCR标记进行分子检测。正向外引物(Wx-mq-O-F)序列为5'-ATGTTGTGTTCTTGTGTTCTTTGCAGGC-3',反向外引物(Wx-mq-O-R)序列为5'-GTAGATCTTCTCACCGGTCTTTCCCCAA-3',正向内引物(Wx-mq-I-F)序列为5-GGGTGAGGTTTTTCCATTGCTACAATCG-3',反向内引物(Wx-mq-I-R)序列为5'-GTCGATGAACACACGGTCGACTCAAT-3'。A.1.2PCR反应体系。MgCl₂)2.0μL,dNTP(2.5mmol/L)0.4μL,TaqResearchPTC-200热循环仪上进行，反应程序如下：94℃下预变性5min,每个循环94℃下变性30s,65℃下退火30s,72℃下延伸1min,共35个循环，最后72℃下延伸10min,4℃下保存待用。A.1.3产物分析反应产物在质量比浓度为1.5%的琼脂糖凝胶上电泳，经溴化乙锭染色并于凝胶成像系统下观察分析。利用Wx-mq基因四引物分子标记扩增水稻品种的基因组DNA,南粳9108标准稻谷能同时扩增出439bp和292bp的DNA条带，而非南粳9108标准稻谷则同时扩增出439bp和200bp或同时存在439bp、292bp和200bp的DNA条带。(M:分子量标准；2、4、5、6、7、8、9、10为南粳9108稻谷标准带型，1、3为非标准带型。)A.2香米基因fgr的分子标记检测A.2.1fgr标记序列5将稻谷进行幼苗DNA提取，利用InDel标记进行分子检测。正向引物(InDel-E2-F)序列为5'-GGGAGGCGCTG反向引物序列(InDel-E2-R)序列为5'-GGGTAGTCACCACCCTACCTTG-3'。20μLPCR反应体系包括：DNA(10ng/μL)2.0μL,Primer(4pmol/μL)2.0μL,10×PCRBuffer(含MgCl₂)2.0μL,dNTP(2.5mmol/L)0.4μL,Taq酶(5U/μL)0.5μL和ddH₂O13.1μL。PCR反应在MJResearchPTC-200热循环仪上进行，反应程序如下：94℃下预变性5min,每个循环94℃下变性30s,55℃下退火30s,72℃下延伸1min,共35个循环，最后72℃下延伸10min,4℃下保存待反应产物在8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶上电泳，经硝酸银染色并于凝胶成像系统下观察分析。利