微生物学实验试题及答案

微生物学实验试题及答案一、单项选择题（本大题共30小题，每小题1.5分，共45分。在每小题给出的四个选项中，只有一项是符合题目要求的）1.在微生物实验室中，为了防止微生物气溶胶扩散，接种环在使用前后的处理方式正确的是（）。A.直接在酒精灯火焰上灼烧至红热B.先在内焰中灭菌，再在外焰中灭菌C.灼烧前先蘸取酒精D.浸泡在消毒液中即可2.革兰氏染色法中，作为媒染剂，能增强染料与细胞结合力的是（）。A.结晶紫B.碘液C.95%乙醇D.番红3.测定细菌大小时，常用的单位是（）。A.mmB.μmC.nmD.cm4.在显微镜使用油镜观察细菌标本时，镜头与载玻片之间应滴加的介质是（）。A.蒸馏水B.生理盐水C.香柏油D.二甲苯5.下列哪种培养基属于鉴别培养基？（）A.肉汤蛋白胨培养基B.伊红美蓝培养基（EMB）C.土豆培养基D.高氏一号培养基6.进行高压蒸汽灭菌时，通常设定的标准条件是（）。A.100℃，10分钟B.121℃，15-20分钟C.121℃，30分钟D.115℃，30分钟7.活菌计数法中，进行平板划线或涂布接种时，通常要求培养皿的温度冷却至（）左右。A.100℃B.60℃C.50℃D.40℃8.在实验室分离纯化微生物时，平板划线接种法的主要目的是（）。A.扩大培养B.获得单菌落C.观察菌体形态D.鉴定菌种代谢类型9.下列关于芽孢染色法的描述，错误的是（）。A.芽孢具有致密的壁，透性低，着色困难B.需要使用着色力强的染料C.需要加热促进染色D.芽孢染色后呈红色，菌体呈绿色10.测定微生物生长曲线时，通过比浊法测定光密度（OD值），通常选用的波长是（）。A.450nmB.500nmC.600nmD.660nm11.抗生素敏感性试验中，纸片扩散法（Kirby-Bauer法）测量抑菌圈直径的单位是（）。A.cmB.mmC.μmD.inch12.下列哪种试剂常用于测定微生物的糖发酵产酸产气能力？（）A.溴甲酚紫B.酚红C.甲基红D.以上均可以13.在进行酵母菌的死活染色鉴别时，常用的染料是（）。A.革兰氏染色液B.美蓝（亚甲基蓝）C.苏丹黑D.刚果红14.放线菌在固体培养基上的菌落特征通常是（）。A.光滑、湿润、易挑起B.粗糙、干燥、难挑起C.半透明、露珠状D.色素分泌少15.微生物实验室常用的干热灭菌器（烘箱）通常设定的温度和时间为（）。A.121℃，15分钟B.160-170℃，2小时C.100℃，30分钟D.180℃，4小时16.VP试验用于检测细菌产生乙酰甲基甲醇的能力，阳性结果呈现的颜色是（）。A.红色B.蓝色C.黄色D.绿色17.进行细菌计数时，血球计数板的使用中，下列操作正确的是（）。A.盖玻片直接放在计数室上方B.盖玻片先放好，再将菌液从边缘滴入C.充满菌液后立即计数D.可以使用高倍镜直接观察未染色的细菌18.下列哪种微生物实验操作必须严格在生物安全柜中进行？（）A.大肠杆菌的革兰氏染色B.酵母菌的计数C.未知病原菌的分离培养D.枯草芽孢杆菌的平板划线19.硫化氢试验中，如果细菌产生硫化氢，会与培养基中的柠檬酸铁铵或硫酸亚铁反应生成（）。A.黑色沉淀B.红色沉淀C.黄色沉淀D.蓝色沉淀20.紫外线杀菌的最佳波长范围是（）。A.200-300nm，主要集中在265nmB.300-400nm，主要集中在365nmC.400-500nmD.600-700nm21.在做显微摄影时，为了提高反差，观察未染色的活体微生物常用的技术是（）。A.暗视野显微镜B.荧光显微镜C.相差显微镜D.电子显微镜22.下列关于固体培养基制备的叙述，正确的是（）。A.琼脂是微生物的碳源B.琼脂在液体培养基中浓度通常为1.5%-2.0%C.琼脂必须在灭菌后加入D.琼脂是微生物的氮源23.甲基红试验（MR试验）阳性结果是指培养基颜色变（）。A.红B.黄C.绿D.蓝24.检测细菌能否利用柠檬酸盐作为唯一碳源的试验是（）。A.吲哚试验B.柠檬酸盐利用试验C.硝酸盐还原试验D.尿素酶试验25.下列哪种情况会导致高压蒸汽灭菌失败？（）A.灭菌锅内冷空气未排尽B.灭菌物品包裹过紧C.灭菌物品放置过多D.以上都是26.进行微生物菌种保藏时，最常用的短期保藏方法是（）。A.液氮超低温保藏B.冷冻干燥保藏C.琼脂斜面4℃冰箱保藏D.矿物油保藏27.酪蛋白水解试验中，如果在平板上出现透明圈，说明该菌（）。A.不能分解酪蛋白B.产生酪蛋白酶C.产生淀粉酶D.产生脂肪酶28.淀粉水解试验中，向菌落周围滴加碘液，若出现透明圈，说明（）。A.细菌分解了淀粉B.细菌合成了淀粉C.碘液与淀粉反应D.细菌死亡29.诱导子囊菌产生子囊孢子的培养基通常是（）。A.营养丰富的肉汤培养基B.含有醋酸钠的培养基C.麦芽汁培养基D.马铃薯培养基30.在质粒DNA提取实验中，为了裂解细菌细胞并去除蛋白质，常用的试剂是（）。A.NaOH和SDSB.苯酚和氯仿C.乙醇D.异丙醇二、填空题（本大题共30空，每空1分，共30分。请将正确答案填在题中横线上）31.微生物实验室常用的玻璃器皿灭菌前必须清洗干净，灭菌后应处于________状态。32.革兰氏染色结果的阳性菌呈________色，阴性菌呈________色。33.微生物接种环和接种针通常由________或________制成，以便于火焰灼烧灭菌。34.培养基按物理状态可分为液体培养基、固体培养基和________培养基。35.测定细菌生长曲线时，通常采用________法，通过测定培养液的________来间接反映细菌的生物量。36.高压蒸汽灭菌的原理是利用________提高水蒸气的温度，从而达到灭菌的目的。37.实验室常用的75%乙醇主要用于________，其浓度过高或过低都会影响杀菌效果。38.IMViC试验包括吲哚试验、________试验、VP试验和________试验。39.平板划线法分离纯化微生物时，每次划线结束后，接种环都需要通过________灭菌。40.观察微生物细胞形态时，为了保证玻片上的菌体不干燥，通常采用________技术或________技术进行封片。41.放线菌的菌丝体分为基内菌丝、________和________。42.紫外线杀菌主要是通过损伤微生物的________，从而阻止其正常复制。43.在做稀释涂布平板法计数时，通常选取菌落数在________之间的平板进行计数，以保证准确性。44.微生物实验室的空气消毒常用________灯照射。45.测定微生物数量的方法可分为直接计数法（如血球计数板法）和________计数法（如平板菌落计数法）。46.某细菌在糖发酵培养基中不仅产酸还产气，则在杜氏小管中会观察到________。47.显微镜的分辨率与物镜的________成正比，与光波的波长成反比。48.检测细菌是否产生尿素酶，常用________培养基，阳性反应表现为________色。49.为了观察细菌的动力（有无鞭毛），常采用________法或________法。50.质粒提取过程中，加入溶液III（酸性乙酸钾）的目的是________，使染色体DNA沉淀。三、判断题（本大题共20小题，每小题1分，共20分。正确的打“√”，错误的打“×”）51.所有细菌都能通过革兰氏染色法分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。（）52.使用显微镜油镜时，可以通过调节粗准焦螺旋来寻找物像。（）53.高压蒸汽灭菌适用于所有培养基的灭菌，包括含有不耐高温成分的培养基。（）54.平板划线分离法不仅可以在固体培养基表面获得单菌落，还可以用于计数。（）55.显微镜观察时，为了提高分辨率，应使用波长较长的光源。（）56.芽孢是细菌的休眠体，对热、干燥、辐射等不良环境具有极强的抵抗力。（）57.在进行微生物实验时，废弃的菌液必须经高压灭菌处理后才能排放。（）58.伊红美蓝培养基（EMB）既可以抑制革兰氏阳性菌生长，又可以鉴别乳糖发酵菌。（）59.测定微生物生长曲线时，延滞期细菌生长缓慢，是因为细菌已经衰老死亡。（）60.活菌计数法统计的是样品中所有的细菌总数，包括死菌和活菌。（）61.酵母菌的出芽生殖方式属于无性繁殖。（）62.抗生素抑菌圈的大小只与抗生素的浓度有关，与细菌的敏感性无关。（）63.实验室开启培养箱观察菌落生长情况时，应尽量缩短开门时间，以保持温度恒定。（）64.干热灭菌法适用于玻璃器皿、金属器具的灭菌，不适用于橡胶或塑料制品。（）65.所有的微生物都是单细胞生物。（）66.使用血球计数板计数酵母菌时，如果压在中格边线上的酵母菌，四条边线上的都应计数。（）67.硝酸盐还原试验阳性，说明细菌将硝酸盐还原为亚硝酸盐或氮气。（）68.液体培养基接种后，若在液面出现菌膜，说明该菌是好氧菌；若混浊生长，说明该菌是厌氧菌。（）69.荧光显微镜主要用于观察发荧光的标本或经荧光染料染色的标本。（）70.微生物的移种、培养等操作必须在无菌室或超净工作台中进行，以防止杂菌污染。（）四、名词解释（本大题共10小题，每小题3分，共30分）71.无菌技术72.菌落73.纯培养物74.培养基75.选择培养基76.鉴别培养基77.灭菌78.消毒79.世代时间80.生物膜五、简答题（本大题共8小题，每小题6分，共48分）81.简述革兰氏染色的主要步骤及其原理。82.为什么大肠杆菌在伊红美蓝（EMB）平板上的菌落呈现深紫色并带有金属光泽？83.简述高压蒸汽灭菌的操作注意事项及灭菌失败的可能原因。84.在进行微生物平板计数时，如何选择合适的稀释度进行计数？请写出计算公式。85.简述显微镜油镜使用的原理及操作要点。86.比较平板划线分离法与稀释涂布平板法的优缺点。87.简述IMViC试验在鉴定肠道细菌中的应用及结果判断标准。88.设计一个实验，从土壤中分离筛选出产淀粉酶的细菌，并简要说明步骤。六、综合论述与计算题（本大题共5小题，共77分）89.(15分)某学生在进行微生物实验时，对一株未知细菌进行了革兰氏染色，显微镜下观察到细菌被染成红色，形态为球状。请分析：(1)该细菌可能的革兰氏反应和形态是什么？(2)造成该细菌被染成红色的可能原因有哪些？（至少列举三点）(3)如果要进一步确认该细菌是否为葡萄球菌，还需做哪些生化鉴定试验？90.(15分)某实验室需要对一批受到细菌污染的玻璃器皿进行处理，同时要对含有热敏性维生素的液体培养基进行除菌。(1)分别说明这两种物品应采用的灭菌或除菌方法，并简述原理。(2)如果该液体培养基除菌后发现长菌，可能的原因是什么？91.(17分)某研究小组测定了一株细菌在液体培养基中的生长曲线，数据如下：时间：0h,2h,4h,6h,8h,10h,12h,14h,16h,18h,20hOD600：0.05,0.06,0.08,0.15,0.30,0.60,1.20,1.80,1.85,1.82,1.80(1)请根据数据判断各生长期的大致起止时间。(2)计算对数生长期的比生长速率（μ）。(提示：μ=(3)如果要在工业发酵中获取最大次级代谢产物，应在哪个时期接种或补料？为什么？92.(15分)请设计一套完整的实验方案，检测实验室新购进的一瓶青霉素钾粉剂对金黄色葡萄球菌的抑菌效果。要求包括：实验原理、材料准备、操作步骤、结果观察与判断。93.(15分)某学生进行土壤稀释分离实验，取10g土壤加入90mL无菌水制成稀释液，然后依次稀释至、、。分别取0.1mL这三个稀释度的菌液涂布平板。培养后计数结果如下：：3个平板，菌落数分别为285、290、295（不可计）：3个平板，菌落数分别为45、48、52：3个平板，菌落数分别为5、6、4请计算每克土壤中的含菌量（CFU/g）。写出计算过程。参考答案与详细解析一、单项选择题1.A2.B3.B4.C5.B6.B7.C8.B9.D10.C11.B12.D13.B14.B15.B16.A17.B18.C19.A20.A21.C22.B23.A24.B25.D26.C27.B28.A29.B30.A二、填空题31.无菌32.紫；红33.镍铬合金；铂（或铂铱合金）34.半固体35.比浊；光密度（OD值）36.增加压力37.皮肤表面消毒38.甲基红（MR）；柠檬酸盐利用（C）39.灼烧40.压滴；悬滴41.气生菌丝；孢子丝42.DNA（或脱氧核糖核酸）43.30-30044.紫外45.间接46.气泡47.数值孔径（NA）48.尿素酶；红（或粉红）49.半固体穿刺；悬滴50.中和并沉淀蛋白质三、判断题51.52.53.54.55.56.57.58.59.60.61.62.63.64.65.66.67.68.69.70.四、名词解释71.无菌技术：指在微生物实验操作中，防止外界微生物污染实验材料，同时也防止实验材料中的微生物散布到外界环境的一系列操作规范和技术。72.菌落：指单个微生物细胞（或一堆同种细胞）在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度，形成的肉眼可见的、具有一定形态结构的子细胞群体。73.纯培养物：指由单一微生物细胞繁殖而来的，只含有一种微生物的培养物。74.培养基：指人工配制的、适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。75.选择培养基：根据某种微生物的特殊营养要求或对某种物理化学因素的抗性而设计的培养基，它允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他微生物生长。76.鉴别培养基：在培养基中加入某种试剂或化学药品，通过培养后微生物的代谢产物与试剂发生显色反应，从而将不同种类的微生物区分开来的培养基。77.灭菌：指利用强烈的物理或化学方法杀灭物体上所有微生物（包括病原菌、非病原菌、细菌芽孢、真菌孢子等）的措施。78.消毒：指利用较温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部病原微生物的营养体，但不能杀死芽孢等抗性强的微生物的方法。79.世代时间：指在分批培养条件下，微生物细胞群体增加一倍所需的时间。80.生物膜：指微生物吸附在生物材料或非生物材料表面，分泌胞外多糖基质，将自身包裹其中而形成的结构性微生物群落。五、简答题81.简述革兰氏染色的主要步骤及其原理。步骤：(1)初染：用结晶紫染色1-2分钟，水洗；(2)媒染：用碘液媒染1-2分钟，水洗；(3)脱色：用95%乙醇脱色约20-30秒，水洗；(4)复染：用番红复染1-2分钟，水洗，吸干镜检。原理：革兰氏阳性菌（G+）细胞壁肽聚糖层厚且交联度高，脂质含量低，乙醇脱色时细胞壁脱水收缩，通透性降低，结晶紫-碘复合物保留在细胞内，呈紫色。革兰氏阴性菌（G-）细胞壁肽聚糖层薄，外膜含有大量脂质，乙醇能溶解脂质并增加壁孔径，结晶紫-碘复合物易被洗出，最后被番红复染成红色。82.为什么大肠杆菌在伊红美蓝（EMB）平板上的菌落呈现深紫色并带有金属光泽？EMB培养基含有伊红和美蓝两种染料，它们在低pH下结合形成黑色沉淀。大肠杆菌能强烈发酵乳糖产生大量混合酸（乳酸、乙酸、甲酸等），导致培养基pH显著下降。酸性环境使伊红与美蓝结合，同时大肠杆菌还能吸收部分染料，因此菌落呈现深紫色。由于代谢产物中乙醛等物质的存在，使得菌落表面具有独特的金属光泽。83.简述高压蒸汽灭菌的操作注意事项及灭菌失败的可能原因。注意事项：(1)灭菌前需加水至水位线；(2)灭菌物品不宜过挤，留有空隙；(3)必须排尽冷空气；(4)灭菌完毕后，待压力降至“0”方可打开锅盖。失败原因：(1)冷空气未排尽，导致温度达不到121℃；(2)灭菌时间不足；(3)物品排放过密，蒸汽流通不畅；(4)温度计或压力表失灵。84.在进行微生物平板计数时，如何选择合适的稀释度进行计数？请写出计算公式。选择标准：通常选取菌落数在30-300之间的平板进行计数。若多个稀释度符合要求，取两者平均数；若只有一个稀释度符合，则直接计算；若所有稀释度都大于300，取稀释度最高的；若都小于30，取稀释度最低的。计算公式：C85.简述显微镜油镜使用的原理及操作要点。原理：香柏油的折射率（n=1.515）与玻璃折射率（n=1.52）相近，光线通过载玻片进入油镜镜头时，几乎不发生折射，从而减少了光线的散射，增加了进入镜头的光量，提高了分辨率和数值孔径。操作要点：(1)先用低倍镜和高倍镜找到物像，将目标移至视野中央；(2)旋开高倍镜，在玻片标本中央滴一滴香柏油；(3)转换油镜，眼睛从侧面注视，缓慢下降镜筒至油镜浸入油中（几乎接触玻片）；(4)左眼看目镜，缓慢上升粗准焦螺旋至看到模糊物像，再用细准焦螺旋调至清晰；(5)观察完毕，用擦镜纸蘸取二甲苯擦去镜头和玻片上的油，再用干擦镜纸擦净。86.比较平板划线分离法与稀释涂布平板法的优缺点。平板划线法：优点：操作简单，省时省料，分离效果好，适合纯化菌种。缺点：不易进行活菌计数，对操作技术要求较高（划线手法）。稀释涂布平板法：优点：可以计数，分离出的菌落较均匀分散，易于挑取单菌落，适用于菌数较多的样品。缺点：操作步骤繁琐（需系列稀释），需要无菌涂布棒，容易因涂布不均导致菌落连片。87.简述IMViC试验在鉴定肠道细菌中的应用及结果判断标准。IMViC试验是用于鉴定大肠杆菌和产气肠杆菌等肠道细菌的生化试验组合。I：吲哚试验，阳性（红色）表示分解色氨酸产生吲哚。M：甲基红试验，阳性（红色）表示分解葡萄糖产酸量大，pH降至4.5以下。V：VP试验，阳性（红色）表示产生乙酰甲基甲醇。C：柠檬酸盐利用试验，阳性（蓝色）表示利用柠檬酸盐作为唯一碳源。典型结果：大肠杆菌为++--，产气肠杆菌为--++。88.设计一个实验，从土壤中分离筛选出产淀粉酶的细菌，并简要说明步骤。步骤：(1)采样：采集富含淀粉的土壤（如面粉厂、淀粉厂附近土壤）。(2)制备土壤悬液：取1g土样加入99mL无菌水中，振荡混匀，制成稀释液，并进一步系列稀释。(3)选择性培养：取各稀释度涂布接种于淀粉培养基平板。(4)培养与初筛：倒置恒温培养，培养后观察菌落形态。(5)刚果红或碘液鉴定：向平板上滴加碘液（或覆盖刚果红溶液），产淀粉酶的菌落周围会出现透明圈（水解圈）。(6)测定水解圈直径与菌落直径比值：比值越大，说明产酶能力越强。(7)纯化与保存：挑取透明圈大的单菌落，进一步划线纯化，斜面保存。六、综合论述与计算题89.(1)该细菌为革兰氏阴性菌（G-），形态为球菌。(2)可能原因：a.该细菌本身就是革兰氏阴性菌，经复染后被番红染成红色。b.该细菌是革兰氏阳性菌，但菌龄过老（死亡），细胞壁通透性增加，导致脱色过度被染成红色。c.操作失误：脱色时间过长（乙醇作用时间过久），导致G+菌体内的染料复合物流失。d.涂片过厚或受热不均导致染色不均。(3)鉴定试验：a.触酶试验：葡萄球菌通常为触酶阳性（区别于链球菌）。b.甘露醇发酵试验：金黄色葡萄球菌阳性，表皮葡萄球菌阴性。c.血浆凝固酶试验：金黄色葡萄球菌通常为阳性，是致病性的重要指标。d.耐热核酸酶试验：金黄色葡萄球菌阳性。e.必要时进行革兰氏染色修正观察及API生化鉴定条或16SrRNA测序。90.(1)玻璃器皿：采用干热灭菌法。原理：利用高温干热（160-170℃）使微生物细胞内的蛋白质氧化、变性，导致微生物死亡。适用于耐高温、不耐湿的物品。含热敏性维生素的液体培养基：采用过滤除菌法。原理：利用细菌不能穿过微孔滤膜（孔径0.22μm）的特性，通过物理拦截将菌体除去，滤液保持无菌且不破坏热敏成分。(2)长菌的可能原因：a.滤膜破损或孔径不符合标准。b.过滤装置组装不严密，导致漏气，细菌通过缝隙进入滤液。c.接收滤液的容器未预先灭菌或灭菌不彻底。d.操作环境并非无菌环境，操作过程中造成污染。e.滤膜堵塞导致压力过大破裂。91.(1)生长曲线分期：0-4h：延滞期（OD值增长缓慢，0.05-0.08）4-12h：对数生长期（OD值呈指数增长，0.08-1.20）12-20h：稳定期（OD值达到最大并保持稳定，1.20-1.85，随后波动）（注：衰亡期在数据中未明显体现，但20h后OD值开始微降，暗示即将进入衰亡期）(2)计算对数生长期比生长速率：取对数生长期两点：t1=4h,OD1=0.08;t2=12h,OD2=1.20μ(3)在工业发酵中获取最大次级代谢产物，通常在稳定期接种二级发酵罐或进行补料。因为次级代谢产物（如抗生素）通常是在菌体生长停止、进入稳定期后才开始大量合成并积累的。在稳定期维持适当的营养条件可以延长次级代谢产物的合成时间。92.实验方案：青霉素钾对金黄色葡萄球菌的抑菌效果检测（纸片扩散法）实验原理：将含有定量抗生素的滤纸片贴在已接种金黄色葡萄球菌的固体培养基表面，抗生素在培养基中扩散