DB5304T 001-2019 草莓脱毒瓶苗生产技术规范

DB5304玉溪市市场监督管理局发布I本标准按照GB/T1.1—2009《标准化工作导则第1草莓脱毒瓶苗生产技术规范培养基的配制、消毒灭菌操作、接种操作、培养室操作、组培苗生产流程和脱毒瓶苗出苗标准基上，在一定的光照和温度条件下，使之生长、根据植物病毒在植物体内分布的不均性，越接近茎尖生长点（约0稀或接近无病毒的原理，采用草莓茎尖处较小的生长点通过离体植物组织培养达到脱除植物病毒的技指用于植物组织培养的植物体或一部分器官、组织、细胞2将灭菌后的外植体或培养材料在无菌条件下接入培养容器内培养基中的指将灭菌后的外植体接种在无菌培养基中获得无菌材料和无性繁殖系前的最初几将灭菌后的外植体或培养材料接种到培养基中进行培养使其生长发育的过程。3一个培养周期内不定芽增殖倍数，即培养一个周期后增殖的不定芽数/接种把不定芽转移到生根诱导培养基中诱导生根，形成完整植株的洗涤各种玻璃器皿、培养瓶和各种用具以及进行植物材料预处理的场配制化学试剂、培养基母液、培养基以及分装培养基和蒸馏水等的3组培工厂的设计要求、所需仪器设备），3.1.2组培工厂设计包括组培车间：洗涤室、培养基配制室、灭菌室、接种室、培养室、办公室4基配制室、灭菌室宜安排在楼下，接种室、培养室应防潮、隔热保温，宜安排在二楼、三楼。3.1.4利用办公室、仓库等旧房进行改造的组培工厂，应合理安排，做到杜绝污染，方便工作，3.1.5组培工厂各分区要布局合理，应根据生产工艺流程，把各部分安排成一条连续、有序和通工厂化生产可选用自动或半自动洗瓶机或人工洗涤，配洗涤室水槽、塑料盆、塑料桶培养容器（三角瓶、罐头瓶、专制塑料瓶、试管等）、培组培中常用的无机盐类、有机物类、植物生长物质、消4培养基的配制编号512O22O32O2O2O45物564.2植物激素的母液配制生长素NAA：先用少量0.1mol/L的KOH或NaOH溶解，然后加蒸馏水定容，配成浓度为0.014.3培养基配制4.3.1按配制培养基的量，称取所需要量的蔗糖、琼脂，量取所需量的基本培养基母液和植物激素母64.3.5封口：盖好瓶盖，瓶盖外封一层报纸或白布5消毒灭菌操作5.1高压蒸汽灭菌锅使用5.1.1组培中主要采用高压蒸汽灭菌器进行湿热灭菌，高压灭菌器适用于培养基（不耐高温的成分除5.2培养基灭菌5.2.1将封好口的培养基整齐放入高压灭菌锅内，盖紧盖，打开放气阀，加热排尽冷空气，关上放气5.2.3已灭菌的培养基不得与未灭菌培养基混放；灭菌后的培养基应注明培养基编号及配制日期。按5.3其它材料灭菌5.4灼烧灭菌5.4.2用于超净工作台操作的镊子、手术刀、解剖刀等器械采用灼烧灭菌。5.5擦拭、喷雾灭菌5.5.1物体表面可用一些药剂涂擦、喷雾灭菌。如超净工作台台面、墙面、双手、植物材料表面等。5.6紫外线、臭氧灭菌5.6.1在接种室、培养室等房间定期用紫外灯、臭氧灭菌。5.7熏蒸灭菌76.1.1接种操作前应将接种室的空调、超净工作台、接种用电热灭菌器、操作间及缓冲间的紫外6.1.2接种人员洗手后，用75%酒精擦手），6.1.3接种人员在接种之前先准备酒精灯或电热灭菌器、酒精、无菌脱脂棉或纱布以及接种器械6.1.4接种前用75%酒精仔细擦超净工作6.1.5将接种用镊子、手术刀、解剖刀等器械从布包里取出，先用75%酒精擦拭，再插入接种用灭菌器中进行灭菌，150℃~250℃灭菌30秒以上，冷却备用。6.2.1母瓶预处理：按生产计划提取母瓶，表面喷75%的酒精后，用无菌纱布擦净，放于操作台6.2.2母瓶检查：提取母瓶时要仔细检查母瓶打开，漏出牛皮纸，应注意手不能接触报纸和牛皮纸6.4.1在接种之前，工作人员的手部，包括手腕，6.4.2先打开培养瓶盖，瓶口不要斜向外，用镊子小心将丛生芽取出整齐放于无菌的牛皮纸上；接种操作过程中，手术刀和镊子都要在无菌牛皮纸6.4.4接苗：打开培养瓶盖，瓶盖内接种5个小丛芽，生根培养接种数量为10株/度以丛芽或无根苗不倒为准，接种完后盖紧瓶盖。接苗时，镊子不应碰到培养瓶外壁或瓶口。6.4.5切苗过程中产生的废弃物可堆放在无菌6.4.6切割和接种后，将接种器械在盛有75%酒精的瓶中漂洗其全部接种操作完后统一将瓶盖边缘用酒精浸泡过的保鲜膜8接种完毕，把瓶苗送到培养室，宜整齐摆放在指定的组培架6.9.17.9.1操作人员应注意个人整洁，勤剪指甲，操作时头、胳膊等不应进入超净工作台6.9.37.9.3工作人员出入），7.3.1接种材料污染采取培养室管7.3.3所有污染材料（包括真菌和细菌污染）应在发现当天经高压消毒灭菌后，送到洗7.3.4对处理情况进行数据记录和简要分析原因，并反馈给操7.4.1进入培养室应穿工作服，包括更换拖鞋、7.4.5工作过程中所产生的垃圾应7.4.6培养室内出苗、进苗后，应及时整理，保持室内清洁，每天用自来水拖1次～27.4.7设备维护：维护各种生产设备的正常使用，不正常应及时报告进97.5.3每隔一周用紫外灯或臭氧发生器消毒7.5.6定期检查培养室墙壁长霉情况，发现有霉菌时应及时清理，并用防菌涂料粉刷无病毒理增殖培养培养基配制、分装、灭菌0.20%HgCl2消毒4～5分钟并在双筒解剖镜（8～40倍）下由外向内逐层剥去茎尖的幼叶,切取0.2～0.5达到脱毒效果（无病毒）的继续进行培养，否则及时淘个培养基交替使用，最后两代的增殖培养基为MS+6-BA0.4mg/L+NAA0.01mg/L，蔗糖为3.0%、5.8～6.0，增殖培养基的硬度稍微软点。前期增殖时），9脱毒瓶苗出苗标准经过25～35天的生根培养，可以形成以下三个级别的 AR瓶AR瓶AR瓶AR瓶AR瓶AR瓶AR瓶AR瓶AR瓶AR瓶AR瓶AR瓶瓶AR瓶AR瓶AR瓶AR瓶A