高效液相色谱实验

1、 化学与材料工程学院环境监测分析实验报告实验名称： 高效液相色谱分析苯-甲苯混合物 专业班级： 应化13 学 号： 150313135 姓 名： 朱建南 指导教师： 翟春 实验地点： 敬行楼A210 实验日期： 2016年 11月 28日 高效液相色谱实验一、 实验目的1 了解HPLC仪器的基本构造和工作原理，掌握HPLC的基本操作；2 学习苯-甲苯混合物的定性分析方法；3 评价色谱柱柱效；4 了解色谱定量操作的主要方法以及各自特点；5 学习未知样品的定量分析方法。二、 实验原理不同组分因在互不相溶的流动相与固定相中的分配比不同，当两相做相对运动时，组分在两相之间反复进行多次分配，最终实现不同

2、组分的分离。色谱仪器的构成：包括高压输液系统、进样系统、分离系统，检测系统等1色谱定性分析方法a保留时间定性 b 峰高增量定性 2色谱定量分析方法a 归一化法,要求所有组分必须全部出峰。b 标准曲线法（外标法）。简单、方便, 结果受到操作技术因素以及具体色谱条件影响较大。三、 仪器与试剂LC-1602A型高效液相色谱仪、甲醇(色谱纯) 、苯、甲苯、苯甲苯四、 高效液相色谱仪操作步骤1. 流动相的预处理甲醇溶液，用0.45m 有机滤膜过滤，超声波清洗器脱气1020 min，装入流动相贮液瓶。2. 准备苯-甲苯混合试样和苯、甲苯标样3. 高效液相色谱仪操作a 依次高压输液泵和检测器电源开关；b 打

3、开色谱工作站，在仪器控制面板中，设置波长，并开灯；c打开三通阀，在仪器控制面板中，设置流速为5ml/min, 启动高压泵，排除流路中的气泡。排气结束后，点击停止按钮，停止高压泵。d 关闭三通阀，设置最小压力(0.1)和最大压力(20)，并设置实验需要的流速(0.5ml/min)，启动高压泵。e用平头微量注射器洗涤进样口后，取试液30 L，将进样阀柄置于“Load”位置时注入样品，转动阀柄至“Inject”位置，此时软件自动进入“采集数据”模式。注意！平头微量注射器用甲醇清洗3次后，再用试液清洗3次，避免气泡。f 待所有色谱峰流出完毕后，按“停止采集”键，保存数据。g 点击谱图处理中的定量结果，

4、记录组分的保留时间以及峰面积、峰高等色谱信息。注意！注射器进不同样品前，使用专用清洗注射器在进样阀的“Load”和“Inject”位置，用流动相清洗几次。注意！注射器进不同样品前，使用专用清洗注射器在进样阀的“Load”和“Inject”位置，用流动相清洗几次。4结束工作 所有样品分析完毕后，流动相继续流动1020 min，至基线稳定。关闭检测器，按“Stop”停泵。关闭泵电源。五、 实验内容1. 分别进样苯、甲苯标样和苯-甲苯混合试样，保留时间定性，记录苯-甲苯混合试样色谱谱，计算分离度。2. a. 分别采集系列甲苯溶液以及未知试样的色谱图，根据保留时间定性，确定甲苯组分峰的位置，并测定各自

5、的峰面积。b. 根据实验数据，利用外标法绘制标准工作曲线，并计算待测溶液中甲苯的含量。六、实验图谱与数据处理1、0.001%序号保留时间（min）峰面积（mAu*s）峰高（mAu）分离度13.4387.1802.1321.12923.8131.4850.6343.49733.972 9.435 2.2811.047图1：含量0.001%的液相色谱图2、0.01%序号保留时间（min）峰面积（mAu*s）峰高（mAu）分离度13.41573.63512.4455.37123.79886.3391.9861.57433.94891.255 10.7980.872图2：含量0.01%的液相色谱图3、

6、0.1%序号保留时间（min）峰面积（mAu*s）峰高（mAu）分离度13.437639.561132.655-23.820578.25622.3671.55433.963 618.367 121.7750.642 图3：含量0. 1%的液相色谱图4、苯增0.1%序号保留时间（min）峰面积（mAu*s）峰高（mAu）分离度13.428721.86274.169-23.8131436.47726.7761.58733.962 709.341 122.9550.652 图4：苯增0.1%的液相色谱图5、1%序号保留时间（min）峰面积（mAu*s）峰高（mAu）分离度13.43814229.73

7、71685.4641.54623.80013768.5731386.9011.33733.967 17818.787 1690.9340.457 图5：含量0.001%的液相色谱图序号浓度%苯 峰面积（mAu*s）甲苯 峰面积（mAu*s）10.0011.4859.43520.0186.33991.25530.1578.256618.3674113768.57317818.7875待测1436.477709.341图6：含量与峰面积的标准曲线图已知待测样中加入了0.1%的标样，其苯的峰面积为1436.477（AU*s），甲苯的峰面积为709.341（AU*s）。从图6中找出对应的苯含量为0.1

8、23（%），甲苯为0.0623（%）。七、 思考题：（1）若进样之后，没有样品峰出现，有哪些可能的原因？答：仪器漏液；分析时间过短；进样量少、样品浓度低等（2）与气相色谱柱相比，为何液相色谱柱一般都很短？答：高效液相色谱柱采用的填料粒径很小，常规5-20um，填料还有涂层、键合物等，这样物质在经过色谱柱的时候分配的次数就相当多了。气相色谱柱的填料粒径较大，或是无填料，与液相色谱柱比较起来的话，气相的色谱柱单位长度的理论塔板数要远远低于液相，为了达到比较理想的分离效果，要求理论塔板数要达到一定的数量，因此气相的色谱柱一般都比高效液相的色谱柱长得多。（3）为了提高液相色谱的分离效果，可采取哪些有效措施