生化技术.ppt

1、广州中医药大学 生物化学教研室 吴映雅,生化技术,1定义 生化技术在生物化学及其相关学科应用的各种技术，主要指生物体内物质及其代谢产物，特别是生物大分子的分离、检测、制备与改造技术。,2发展过程,1923 Svedberg设计超速离心机 1925 Warberg发明微量检压仪 1930 放射性同位素技术在生物化学过程中应用 1931 Kuhn柱层析分离、-胡萝卜素 1940 电泳、层析技术 50-52 气相色谱（GC） 1956 Sanger x射线衍射技术确定蛋白质一级结构 1953 Watson、Crick x射线衍射技术 DNA双螺旋结构 1960 操纵子学说 1964 人工合成胰岛素

2、1969 固定化酶、细胞技术 1973 基因工程 1975 细胞工程（杂交瘤技术） 1990 启动人类基因组计划,生化与分子生物学技术在解决生命医学问题中的基本任务,在某种生物表型、生理状态或病理状态下，是否特异性地产生基因（或蛋白）X ？或者，基因（蛋白）X的生成量是否发生特异性的改变？ 将基因（蛋白）X从研究对象（细胞、组织、器官、实验动物、人体）中剔除，该生物表型、生理状态、病理状态能否得到逆转（或加重）？ 将基因（蛋白）X重新导入研究对象，或增加其生成量，能否重现（或减轻）该生物表型、生理状态、病理状态？,生物大分子的分离、纯化与制备 离心技术 电泳技术 层析技术 透析技术 超滤技术

3、外源基因表达（原核或真核） 生物大分子的定性研究 PCR与RT-PCR DNA测序 蛋白质组学技术,生物大分子的定量与半定量研究 紫外分光 定量PCR 免疫印迹分析（Western blot） 定量电泳 Southern blot 与Northern blot 基因与蛋白的功能确认 基因转导 基因剔除 转基因 RNAi技术 蛋白质组学技术,一、电泳技术,电泳的概念：带电物质在电场中向相反电极移动的现象称为电泳（electrophoresis）。 电泳现象早在十九世纪初就已发现（1808年俄国物理学家Ress进行了世界上第一次电泳实验）。但电泳技术的广泛应用，则是在1937年以后.,1937年，

4、瑞典科学家Tiselius设计了世界上第一台电泳仪，建立了移界电泳法，并于1948年荣获诺贝尔奖。70年以来，电泳技术围绕制胶、电泳、染色三个技术环节，不断改进，以实现下列目标： 1、提高分辨率及灵敏度。 2、简化操作，缩短电泳时间。 3、扩大应用范围。 近几十年以来，电泳技术发展很快，各种类型的电泳技术相继诞生，在生物化学、医学、免疫学等领域得到了广泛应用。,电泳的分类,原则上按电泳的原理来分，可分为二类： 自由界面电泳：又称移动界面电泳，是指在没有支持介质的溶液中进行的电泳。其装置复杂，价格昂贵，费时费力，不便于推广应用。 区带电泳：是指有支持介质的电泳，待分离物质在支持介质上分离成若干区

5、带。支持介质的作用主要是防止电泳过程中的对流和扩散，以使被分离的成分得到最大分辨率的分离。区带电泳由于采用的介质不同以及技术上的差异，又可分为不同的类型。,按采用介质的不同分类,淀粉凝胶电泳：多用于同工酶分析，凝胶铺厚些，可一层一层剥层分析（一板多测）。天然淀粉经加工处理即可使用，但孔径度可调性差，并且由于其批号之间的质量相差很大，很难得到重复的电泳结果，加之电泳时间长，操作麻烦，分辨率低，实验室中已很少使用。 琼脂糖凝胶电泳：一般用于核酸的分离分析。琼脂糖凝胶孔径度较大，对大部分蛋白质只有很小的分子筛效应。 聚丙烯酰胺凝胶电泳：可用于核酸和蛋白质的分离、纯化及检测。其分辨率较高。 聚丙烯酰胺

6、和琼脂糖是目前实验室最常用的支持介质,另外根据支持介质形状不同，区带电泳可分为：薄层电泳、 板电泳、柱电泳。 据用途不同，可分为：分析电泳、制备电泳、定量、免疫电泳。,电泳的基本原理,电泳是在电场的作用下而产生的物质运动，不同的物质在一定的电场强度下，由于所带电荷不同，因此受到的引力不同，向相反电极泳动速度不同进而达到分离目的。,电泳的基本原理,在一定pH条件下，每一种分子都具有特定的电荷（种类和数量）、大小和形状，在一定时间内它们在相同电场中泳动速度不同，各自集中到特定的位置上而形成紧密的泳动带。这就是带电粒子可以用电泳技术进行分离、分析和鉴定的基本原理。,+,-,V:泳动速度cm/秒or分

7、 d:泳动距离cm t:电泳时间 (秒/分) E:电场强度 伏特/cm,u:泳动率or泳动度(cm/伏秒or分) U:电压 常压(100500v) 高压(50010000v)仅需几分钟 l:支持场的长度 (有效长度),泳动率,带电粒子在电场中的移动与: 粒子大小有关，颗粒直径愈小愈快 粒子的电荷有关，电荷愈多愈快 粒子的形状有关，愈接近球形愈快,影响电泳速度的外界因素,迁移率还和下列因素有关: 1.电场强度 电场强度是指每厘米的电位降 凝胶两端距离20厘米，电压降200伏特，电场强度为10伏特/厘米 电场强度越高电泳速度越快 2.溶液的PH值 PH值决定带电颗粒的解离程度，决定物质所带净电荷的

8、多少,电泳液中的离子增加会使电泳迁移率降低，原因是带电的离子会吸引相反符号的离子聚集在其周围，相成一个与运动粒子符号相反的离子氛（ionic atmosphere），它使该离子向相反的方向运动，从而降低了该粒子的迁移率。,离子的这种阻碍效应是与其浓度和价数相关的。用离子强度来表示，它的数值如下式： 式中s表示共有s种离子，Ci和Zi分别代表每种离子的浓度（mol/L）和价数。,4.电渗现象,一个U形管的底部装上一块素烧瓷板（密封）管中装入液体，并在两端加入电极通电，就会看到负极的液面上升。因为瓷板带有负电荷，液体相对地带有正电荷，因而向负极移动。这种液体在电场中对于一个固体支持物的相对移动，称

9、为电渗现象。,5.温度的影响,电泳过程中由于通电产生焦耳热，热对电泳有很大的影响。 温度每升高1，迁移率约增加2.4%。为降低热效应对电泳的影响，可控制电压或电流，或在电泳系统中安装冷却散热装置,6.支持物的影响,对支持物的要求一般是均匀和吸附力小，否则电场强度不均匀，影响区带的分离，实验结果及扫描图谱无法重复。,聚丙烯酰胺凝胶电泳,聚丙烯酰胺凝胶电泳（polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE）是以聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质的一种电泳方法。,醋酸纤维素薄膜电泳,以醋酸纤维素薄膜为支持物 特点： 电泳后区带界限清晰； 通电时间较短； 它对各种蛋白质几乎完全不

10、吸附，因此无拖尾 现象 灵敏度高，样品用量少。 对染料也没有吸附。 它的电渗作用虽高但很均一，不影响样品的分离 效果。,琼脂糖凝胶电泳,琼脂糖是一种直连多糖，在水浴中加热溶解，冷凝后靠糖链间的氢键作用形成凝胶。,特点,1.具有大量微孔 孔径大小取决于浓度：浓度大，孔径小 0.075%浓度孔径800nm 0.16%浓度孔径500nm 1%浓度孔径150nm 2.具有较高的机械强度 可以在1%或更低浓度下使用 3.无毒，不需要催化剂 4.具有热可逆性，低熔点琼脂糖回收样品容易 5.生物中性，与别的生物材料结合性低 6.具有高灵敏度放射自显影 7.胶凝温度34-43 熔化温度75-90 低熔点琼脂糖

11、胶凝温度低于30 (融化温度高于30 ),琼脂糖凝胶分离范围 琼脂糖浓度% 线状DNA分子分离范围Kb 0.3 5-60 0.6 1-20 0.7 0.8-10 0.9 0.5-7 1.2 0.4-6 1.5 0.2-3 2.0 0.1-2,核酸构型与琼脂糖凝胶电泳分离的关系,共价闭环cccDNA直线DNA开环的双链环状DNA,微型水平电泳槽,用于对DNA、蛋白的鉴定、分离、制备及分子量测定,核酸電泳溴化乙錠染色,聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(acrylamide，简称Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺(N,N-methylene-bisacylamide,简称Bis)在加速剂 N,N,

12、N,N-四甲基乙二胺(N,N,N,N-tetram-ethyl ethylenedia mine，简称TEMED)和催化剂过硫酸铵(ammonium persulfate (NH4)2S2O3，简称AP)或核黄素(ribofavin即vita min B2,C17H2O6N4)的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶。,CH2=CH,C=O,NH2,CH2=CH,C=O NH CH2 NH C=O CH2=CH,-CH2-CH-CH2-CH-nCH2-CH- C=O C=O NH2 NH CH2 NH C=O -CH2-CH-CH2-CH-nCH2-CH- C=O C=O NH NH2,丙烯酰胺,

13、N,N-甲叉双丙烯酰胺,聚丙烯酰胺,聚丙烯酰胺凝胶的性能,制作良好的聚丙烯酰胺凝胶与其他凝胶相比有如下优点： 1、聚丙烯酰胺凝胶是人工合成三维网状结构的凝胶，具有分子筛作用，其筛孔的大小可人为控制和调节，并且制备重复性好。 2、聚丙烯酰胺凝胶是碳-碳结构，没有或很少带有极性基团，因而吸附少，电荷作用小，不易和样品相互作用，化学性质比较稳定。 3、凝胶无色透明，适宜用光密度扫描记录结果，且需要样量较少。 4、用途广泛，具有弹性，便于操作，易于保存。 由于其具有上述特点，特别适合做区带电泳的支持物，用于蛋白质带的分离以及进行分子量的测定。,琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳的区别,、分离范围不同

14、琼脂糖凝胶电泳分离分子量比较大的物质，尤其是核酸； 聚丙烯酰胺凝胶分离分子量较小的物质，如蛋白质，氨基酸 等。 、凝胶配置程序不同 琼脂糖凝胶 在缓冲液中加热融化，在凝固前到入槽中即可； 聚丙烯酰胺凝胶 在配置时还要加多种成分，并且对聚合温度 也有一定的要求，否则会影响凝胶孔径的大小。 、凝胶的厚度不同 琼脂糖凝胶最薄只能达到； 聚丙烯酰胺凝胶可以制成.，分辨率高。 、成本不同 琼脂糖价格便宜；聚丙烯酰胺凝胶价格较高 、安全性不同 琼脂糖没有毒性；丙烯酰胺凝胶有毒性,二、聚丙烯酰胺凝胶的制备,聚丙烯酰胺凝胶聚合的催化体系有两种： 1.化学聚合 化学聚合的催化剂通常采用过硫酸铵（ammonium

15、 persulfate，Ap），此外还需要加速剂TEMED（N，N，N，N-四甲基乙二胺），它能以自由基的形式存在。微量TEMED的加入，可使过硫酸铵形成自由基： S2O82- 2SO4- 这些自由基的产生可引发丙烯酰胺与甲叉双丙烯酰胺的聚合、交联反应，形成有一定平均孔径的聚丙烯酰胺。,.,在浓度为7.5% 的凝胶中，大多数生物体内的蛋白质能得到满意的分离效果。因此，把浓度为7.5% 凝胶称为标准胶。对于一个未知样品，常用7.5%的标准胶或4%-10% 的凝胶梯度来测试，而后选出适宜的凝胶浓度。 用于研究大分子核酸的凝胶多为2.4%的大孔凝胶，此时凝胶太软，不易操作，可加入0.5%琼脂糖，或在

16、3%凝胶中加入20%蔗糖以增加机械强度而又不影响凝胶孔径大小。,光聚合通常用核黄素为催化剂，核黄素经光照形成无色基，再被痕量氧氧化形成自由基，引发聚合反应。TEMED的存在，可以加速聚合。 上述聚合反应受许多因素的影响： （1）大气氧能淬灭自由基，阻止多聚体链长的增加。在进行化学聚合前，一般用减压抽气的办法除去溶液中溶解的空气。在胶液表面，往往覆盖一层水或溶液，隔绝空气，可加速聚合。 （2）低温、低pH都会减慢聚合反应速度。 （3）有些材料如聚丙烯酸甲酯有机玻璃，一些金属等可抑制聚合反应。,2.光聚合,凝胶组成成分的化学、物理性质,凝胶的孔径可调性及其他性质,每100亳升凝胶溶液中含有单体和交

17、联剂的总克数称凝胶浓度，用T%表达； T% = (a+b)/m a：丙烯酰胺克数；b：N,N-甲叉双丙烯酰胺克数；m：缓冲液体积（毫升）。,凝胶溶液中交联剂占单体和交联体总量的百分数称为交联度，常用C%表示。 C% = b/（a+b） 交联度过高，胶不透明并缺乏弹性；交联度过低，凝胶呈糊状。,聚丙烯酰胺凝胶电泳的应用,聚丙烯酰胺凝胶电泳根据其有无浓缩效应，可分为连续的和不连续的两类 。 前者指整个电泳系统中所用缓冲液，pH值和凝胶网孔都是相同的；后者是指在电泳系统中采用了两种或两种以上的缓冲液、pH值和孔径，不连续电泳能使稀的样品在电泳过程中浓缩成层，从而提高分辨能力。,在不连续PAGE系统里

18、，存在三种物理效应,，即电荷效应、分子筛效应和浓缩效应。 、电荷效应：各种蛋白质按其所带电荷的种类及数量，在电场向一定电极，以一定速度泳动。 、分子筛效应：区别不同大小分子种类的能力是凝胶所具有的一种筛分大小的能力即分子筛效应。,不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳,系统的不连续性表现在以下几个方面： 1.凝胶由上、下两层凝胶组成，两层凝胶的孔径不同，上层为大孔径的浓缩胶，下层为小孔径的分离胶。 2.缓冲液离子组成及各层凝胶的pH不同。电极缓冲液为pH8.3的Tris-甘氨酸缓冲液，浓缩胶为pH6.7的Tris-HCl缓冲液，而分离胶为pH8.9的Tris-HCl缓冲液。 3.在电场中形成不连续的电位梯度

19、。 在这样一个不连续的系统里，存在三种物理效应，即样品的浓缩效应，凝胶的分子筛效应和电荷效应，由于这三种物理效应，使样品分离效果好，分辨率高。,8.3,8.3,8.9,6.7,6.7,8.9,浓缩胶,分离胶,缓冲液离子成份的不连续性 大孔胶 pH=6.7 先行离子：Cl-存在于凝胶层中任何PH值下 随后离子：Gly-存在于电极缓冲液中 pI=6.0 pK1=2.34 pK2=9.70 在pH=6.7时，只有少数解离为Gly-，多数为Gly+-。 Pr分子在pH6.7时以Pr-形式存在,pH的不连续性 pH 大孔(浓缩)胶 6.7 小孔(分离)胶 8.9 缓冲液 8.3,样品浓缩效应（不连续性）

20、 不连续性可控制Gly的解离度，从而控制有效迁移率。 迁移率:Cl- Pr- Gly- (Pr被压成薄层) 在大孔胶中：要求Gly的有效迁移率低于所有Pr，经计算pH=6.7。 在小孔胶中：要求Gly超过所有Pr，Pr留在后面进行普通的电泳与分子筛分离分成多个区带。(此PH实测为9.5),甘氨酸,氯离子,蛋白样本,浓缩胶体,分离胶体,分子筛效应 当被浓缩的蛋白质样品从浓缩胶进入分离胶时，pH值和凝胶孔径突然改变，选择分离胶的pH值8.9接近甘氨酸的Pka值（9.79.8），这样慢离子的解离度增大，因而它的有效泳动率也增加。此时慢离子的有效泳动率超过了所有蛋白质的有效泳动率。这样，高电势梯度不存

21、在了，各种蛋白质仅会由于其分子量或构型的不同，在一个均一的电势梯度和pH条件下通过一定孔径的分离胶时所受阻滞的程度不同，表现的泳动率的不同而被分开。,操作步骤,1、凝胶的制备 2、样品的准备 3、加样 4、电泳 5、剥胶 6、固定 7、染色 8、脱色 9、结果记录,不连续的聚丙烯酰胺凝胶电泳 储备液： 丙烯酰胺（30%） 14.55克丙烯酰胺，0.45克甲叉丙烯酰胺，双蒸水溶解，稀释到50ml,棕色瓶储存。 浓缩胶缓冲液 0.5M/L Tris-HCl, pH6.8 分离胶缓冲液 1.5M/L Tris-HCl, pH8.8,凝胶配方 储存液 凝胶终浓度T(C=3%) 4% 7.5% 10%

22、15% 20% 单体储液ml 0.65 3.8 5.0 7.5 10. 浓缩胶缓冲液 0.10 分离胶缓冲液 0.3 0.3 0.3 0.3 双蒸水 4.25 10.9 9.7 7.2 4.7 10%过硫酸铵ul 5 15 15 15 15 TEMED ul 2.5 7 7 7 7,不同浓度分离胶分离蛋白质范围： 15% 15-45Kd 12.5% 15-60Kd 10% 18-75Kd 7.5% 30-120Kd 5% 60-210Kd,染色 电泳后蛋白质区带的检测，对于不同的目的，应采用不同的检测方法，最常用的方法是用染料和生物大分子结合形成有色的复合物，选用染料通常应考虑以下要求： 、必

23、须与大分子结合以形成一个不溶性的，有色的，紧密的复合物，但不结合到凝胶中和支持膜上，以便从凝胶中除去，否则背景会影响蛋白带的辨别和定量扫描； 、染料必须容易溶解在对大分子没有影响的溶剂中，以利于背景的脱色； 、选用高吸光系数的染料有利于提高定量测定的灵敏度； 、选用能与大分子有专一性结合的染料，并在结合后能产生不同的颜色，可以提高检测的选择性。,用于蛋白质区带染色的试剂常用的有氨基黑10B、考马斯亮蓝，1-苯胺基-8-萘磺酸等，其性能及染色原理如下： 氨基黑10B (amino black 10B) C22H13O12N6S3Na3 MW715 max620630nm 氨基黑是酸性染料，其磺酸

24、基与蛋白质反应构成复合盐。是最常用的蛋白质染料。但用氨基黑染SDS-蛋白质时效果不好。另外氨基黑染不同蛋白质时的着色度不等，色调不一(有蓝、黑、棕等)，作同一凝胶柱的扫描时误差较大，需要对各种蛋白质作出本身的蛋白质-染料量(吸收值)的标准曲线。,考马斯亮兰R250(Coomassie brilliant blne R250) 即三苯基甲烷(triphenylmethane) C46H44O7H3S2Na MW824 max560590nm 染色的灵敏度比氨基黑高5倍。尤其适用于SDS电泳微量蛋白质染色，但蛋白质浓度超出一定范围时，对高浓度蛋白的染色不合乎Beer定律，用作定量分析时要注意这点。

25、,考马斯亮兰G250(Coomassie brilliant blne G250)，即二甲花青亮蓝(Xylene Cyanine brilliant Blue)，MW854，max590610nm，染色灵敏度不如R250，但比氨基黑高3倍。优点在于它在三氯乙酸中不溶而成胶体，能选择地染色蛋白而几乎无本底色。所以常用于需要重复性好和稳定的染色，适于作定量分析。,氨基黑与考马斯亮兰两种染料的共同点是：都带有负电荷的磺酸基，能与蛋白分子上带正电荷的侧链相结合。但是，氨基黑分子含有较多的亲水基团，和蛋白质亲水微区以及亲水的凝胶基质有很大的亲和力。而考马斯亮兰却相反，含有较多的疏水基团，和蛋白质的疏水区

26、有较大的亲和力，而和凝胶基质的亲和力不如氨基黑。因此，用考马斯亮兰染色的漂洗要容易得多。另外，考马斯亮兰的灵敏度要比氨基黑高。,、1-苯胺基-8-萘磺酸(1-animo-naphthal sulfonic acid简称ANS)，MW241，本身无荧光，但与蛋白质结合后则产生荧光。电泳后，凝胶在此染料溶液浸13分钟，用长波紫外灯照射时产生黄色荧光，可显示蛋白质100mg，如果不明显，可将凝胶取出暴露于空气或盐酸气中，或浸没在3mol/L盐酸中几秒至2分钟，使表面蛋白质稍变性,然后再用 ANS染色，这样可显示蛋白质20g。这种染色优点是可保留凝胶内中的酶和抗体的活性。可将该区带切下来进行酶活力测定

27、，也可直接把凝胶捣碎研细，用作抗原来注射动物，聚丙烯酰胺不影响抗体的产生。,（硝酸）银染色法,银染色蛋白最低检出量2ng 银染主要在胶表面，薄胶效果好。,蛋白質電泳 Coomasssie Blue dyes,SDS-PAGE,一、原理 SDS(sodium dodecyl sulfate)，H25C12NaSO4 M288.38g/mol，是一种很强的阴离子表面活性剂。SDS能破坏蛋白质分子间的结构(尤其是在强还原剂如巯基乙醇存在下，使蛋白质分子内的二硫键还原打开)，并以其疏水基和蛋白质分子的疏水区相结合，形成牢固的带负电荷的蛋白质-SDS复合物。,在一定条件下，SDS与大多数蛋白质的结合比为

28、1.4gSDS/1g蛋白质。所引入的净电荷大约为蛋白质本身的净电荷的10倍，使得其所带电荷远超过蛋白质原有的净电荷，从而清除不同蛋白质之间所带的净电荷不同对电泳迁移率的影响。,SDS与蛋白质结合后，还引起了蛋白质构象的改变，由蛋白质-SDS复合物的流体力学和光学性质表明，它们在水溶液中的形状，近似于雪茄烟形的长椭圆棒，不同蛋白质的SDS复合物的短轴长度都一样，约为10A，而长轴则随蛋白质的分子量成正比地变化。,这样的蛋白质-SDS复合物，在凝胶电泳中迁移率，不再受蛋白质原有电荷和形状的影响，迁移率只是椭圆棒的长度也就是蛋白质分子量的函数,测定时，通常选用已知分子量的标准蛋白质作为“标记物”(m

29、aker)，与分子量未知的待测蛋白质样品在同一条件下进行SDS-聚丙烯酰胺凝焦电泳，作出已知分子量的标准蛋白质的相对迁移率标准曲线，从标准曲线上根据迁移率找出待测蛋白质样品的分子量。,四、应用 1、蛋白质纯度的分析 2、蛋白质分子量的测定 3、蛋白质水解的分析 4、免疫沉淀蛋白的鉴定 5、免疫印迹的第一步 6、蛋白质修饰的鉴定,凝胶配方 储存液 凝胶终浓度T(C=3%) 3% 5% 10% 15% 20% 单体储液ml 3.4 5 10 15 20 浓缩胶缓冲液 2.4 分离胶缓冲液 7.5 7.5 7.5 7.5 10%SDS 0.2 0.3 0.3 0.3 0.3 双蒸水 14 17.2

30、12.2 7.2 2.2 10%过硫酸铵ul 10 10 10 10 10 TEMED ul 10 10 10 10 10,等点聚焦 1.用两性电解质建立电场中连续线性pH梯度 2.只适用于两性解离的物质电泳,pH,10,1,8,6,4,2,pI,双向凝胶电泳,返回,2-D電泳的限制只能在一個時間跑一個樣品，無法使用可供比對的標準樣品，再現性也不好,免疫电泳,把电泳技术与免疫扩散结合起来，叫做免疫电泳。 免疫电泳技术是基于抗原的电泳迁移以及与抗体的专一性免疫沉淀反应。 在大部分电泳中，样品中的抗原通过含有相应抗体的pH8.6的薄层琼脂糖凝胶，抗原在pH8.6时通常带强负电，而抗体在此pH不带电

31、，不能迁移动。抗原在含有抗体的凝胶中电泳时发生免疫反应。最初，抗原过量，所以仅产生可溶性的免疫混合物，与抗原一起向阳极移动，当抗体与抗原比例合适时就形成大的、不溶性的免疫沉淀。,特点： 以琼脂糖为支持物 样品用量少，免疫识别具有专一性，分辨率高。目前已经在琼脂糖双扩散的基础上发展了多种免疫电泳，如微量免疫免疫电泳、对流免疫电泳、单向定量免疫电泳（火箭电泳）、放射免疫电泳及双向定量电泳等等。 可用于检查蛋白质制剂的纯度，研究抗血清制剂中是否具有抗某种已知抗原的抗体，检验两种抗原是否相同等。,单细胞凝胶电泳,单细胞凝胶电泳分析（single cell gel eletrophoresis，SCGE

32、）是由Ostling等（1984）首创，后经Singh等（1988）进一步完善并逐渐发展起来的一种快速检测单细胞 DNA损伤的实验方法，适用于多种细胞，能够灵敏地检测DNA断裂，在检测诱变剂、射线等对DNA的损伤、监测环境污染物对机体的遗传损害、研究毒物致癌机制等方面有广泛的应用价值。因其细胞电泳形态颇似彗星，又称彗星实验（comet assay）。,原理：,有核细胞的DNA分子量很大，DNA超螺旋结构附着在核基质中。 用琼脂糖凝胶将细胞包埋在载波片上，在细胞裂解液作用下，细胞膜、核膜及其它生物膜遭到破坏，使细胞内的RNA、蛋白质及其它成分进入凝胶，继而扩散到裂解液中，但核DNA仍保持缠绕的环区附着在剩余的核骨架上，并留在原位。,如果细胞未受损伤，电泳