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文档简介

1、第三节抗原和抗体反应免疫检测方法在抗原与抗体结合后,可以出现凝集、溶血、沉淀实验等显着反应,或用荧光素、酶、放射性同位素等标记方法提高检测可能性,便于免疫检测。 可见性反应的出现,对抗原抗体分子的适配比例的要求远远高于相互的绝对量方面。 也就是说,一方面在进行免疫检查时要注意抗原抗体的使用量。 另一方面,只要提高可见性和测定可能性,就能大幅度提高免疫检查方法的灵敏度。 一、凝集反应、凝集反应是指颗粒抗原与对应的抗体的结合反应中出现的可见性现象。 颗粒抗原,如完整的细菌、红血球等与相应的抗体混合,在一定的条件下凝集。 凝聚反应中的抗原称为凝聚原,抗体称为凝集素。 二、沉淀反应、抗原为可溶性分子时

2、,与抗体结合形成沉淀。 1 .棉状沉淀反应在一系列试管中加入等量的抗体和增加量的抗原,在中性条件下保温37度1-2h,即可看到棉状蛋白质沉淀。 可用于寻找抗原抗体反应的合适比例,检测抗原抗体的分子比。 2 .环状沉淀反应试管中加入抗体后,慎重加入对应的抗原,使抗原抗体步骤混合,保温37度10-20min,两者界面出现环状沉淀。 不能用于定量测量。 3、双向扩散:又称琼脂扩散,是以琼脂凝胶为介质的沉淀反应。 琼脂是一种多孔网状结构,能够让大分子物质通过,分子的扩散作用分别与2个部位的抗原抗体相遇,在比例适当的时候形成沉淀。 可以观测到沉淀弧。 沉淀弧的特征和位置取决于抗原分子的大小、结构、扩散系

3、数和浓度等。 抗原、抗体存在于多个体系时,出现多个沉淀弧。 双向扩散法的操作:用生理盐水调制琼脂1%-5%,在显微镜用的载玻片上浇4mL,凝固后打孔,在中心孔中滴加抗原,在外周孔中滴加抗体测定抗体价,在中心孔中滴加抗体,在外周孔中滴加抗原,检测抗原的存在和定性抗原。 抗原抗体为单一系时,抗原浓度不同,沉淀弧特征不同:抗原抗体为多系时,出现的沉淀弧有多条,互不干扰。 4、单向免疫扩散:又称单向琼脂扩散,是定量抗原的一种检测方法。 与双向扩散不同,琼脂含有一定量的抗体,孔内含有未知量的对应抗原。 在37度保温过程中,孔内抗原向周围扩散,与抗体形成沉淀圈。 沉淀圈的大小决定着抗原的含量,还有很多其他

4、免疫检测技术和手段,其机制是利用抗原抗体的沉淀反应。 例如微量免疫电泳、对流免疫电泳、火箭电泳等。 但是,其检查的对象和检查的目的各不相同。 三、补体结合试验,是由抗体与细菌、红细胞等颗粒抗原结合形成抗原抗体复合物后,再与补体结合,可以引起溶菌、溶血效果。 补体结合试验可以测量患者血清中补体的总量,也可以测量未知抗原和抗体的量。 测定人血清补体总量的方法指示绵羊红细胞溶血。 绵羊红细胞与抗绵羊红细胞结合后,加入患者血清,观察溶血程度。 为了测定未知抗原/抗体,采用了测定抗原抗体系统和含有绵羊红血球和抗绵羊红血球的抗体的指示系统这两个系统。 测定对象系统中有无测定对象抗原/抗体是根据指示系统中是

5、否发生溶血来判断的。 反应的过程是,首先加入待测定的抗原/抗体,反应一段时间后加入补体,反应一段时间后加入指示系。 测定抗原抗体结合时,必然会结合补体,不出现溶血,没有测定对象物质时会出现溶血。四、荧光抗体技术、免疫荧光法与荧光素及特异性血清抗体化学结合,将该荧光标记的抗体作为一种试剂在特定条件下浸泡于标本中,使标本中对应抗原发生结合反应,荧光显微镜下用紫外光源进行观察。 荧光出现时,存在表示的标记抗体,也存在对应抗原。 免疫荧光法有直接法和间接法两种。 第四节免疫亲和色谱、生物高分子具有可与某些对应的特异性分子可逆结合的特性,如酶的活性中心或其他结构中心能与特异性基质、抑制剂、辅助因子效应剂通过某些二次结合结合,可在某些条件下离解。 抗体和抗原、激素及其受体、核糖核酸及其互补脱氧核糖核酸等体系,都具有相似的特性。 在高分子与配体之间形成特异性解离性复合物的能力称为亲和力。 根据这种具有亲和性的生物分子间的可逆结合和解原理而发展的色谱被称为亲和色谱。 亲和层析的基本过程: 1、偶联:将欲分离的高分子物质配体与其生物功能无影响地与水不溶性载体结合,将其作为亲和吸附剂或免疫吸附剂。 2 .柱:柱内固相化的配体3,仿射色谱:含有高分子物质的混合液,在有利于配体与高分子之间形成复合体的条件下,放入加入了仿射吸附剂的柱

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