体外培育牛黄技术幻灯3.ppt

1、中药的一种新药体外培育牛黄技术研究报告，武汉大鹏药业有限公司，牛黄是百草精华，世界神物，不及诸药。 神农本草经、体外培育牛黄的概述、自主知识产权的国家中药类新药体外培育牛黄，是我国科学家应用现代生物和仿生技术首次生产医药原料药的技术。 体外培育牛黄经过处方、工艺、成分、结构、超微结构、质量标准、稳定性等一系列药学研究和药效学、毒理学、特殊毒性等临床前18个项目100多个指标的研究，进行多中心临床试验研究，体外培育牛黄在技术质量标准上是中华人民共和国药典(2000版) 表明完全符合其疗效和性能与优质天然牛黄非常接近，且有效成分可控，比天然牛黄稳定，工业上可大规模生产，体外培育牛黄可正式载入200

2、5版中华人民共和国药典，与天然牛黄的标准完全一致。 国家食品药品监督管理局文件、国食药监注200421号规定体外培育使用牛黄代替天然牛黄等量。 体外培育牛黄的机制、结石机制牛黄(胆红素钙结石)的形成原因：细菌性葡萄糖苷酶和大量水解耦合型胆红素为游离胆红素和葡萄糖酸。 游离胆红素与钙等金属离子结合，形成胆红素钙盐粒子和胆红素高分子粒子，因此胆汁理化改变，称为造石胆汁。 这是成石的物质基础。 成石胆汁在一定条件下产生静电效应，通过高分子有机物质的交联作用形成胆石。 体外培育牛黄的机制、工艺(处方)新鲜牛胆汁-生物牛胆汁-成石牛胆汁-胆汁核-产品生物反应生化过程应用生物化学过程牛黄机(摇摆)分层培育

3、干燥调节pH体外牛黄技术应用胆红素钙结石生物核生成触发，引起生物化学反应， 使石胆汁内蛋白形成氢键，使一部分蛋白凝固变性，形成核，其活动中心吸引母液中的胆红素钙盐粒子等，使其沉淀在中心。 高分子有机物质对沉淀粒子的交联作用，即线状聚合物的功能对粒子的吸附作用，层沉积，逐渐增大、脱水、干燥。牛胆石，即牛黄成品、天然牛黄分析研究、不同产地天然牛黄成分及含量的分析研究参照国内外有关学者天然牛黄成分含量的分析方法和结果，对国内外5个不同产地的优质牛黄进行分析研究。 结果表明： (成分含量(% )产地澳大利亚牛黄1西藏牛黄2京牛黄3进口牛黄2水分6.96.87.06.77.16.8胆固醇36.700.6

4、7 * 39.621.39 * 29.290.72 * * 40.9 15.001.13*14.900.88*15.35牛磺酸6.420.49 *5. 920.73 *6. 250.78 *4. 660.74 * *6. 460.55 * *胆固醇4.801.900.38 *1. 300 无机盐3.36 3.58 3.45 3.73 2.96氨基酸0.655 0.633 0.748 0.565 0.688糖蛋白1.74 2.05 2.59 1.99 2.06合订95.70 92.35 90.19 92.62 97.37，体外培养牛黄成分分析研究， 体外培养牛黄成分含量的分析研究体外培养牛黄配方

5、、制备工艺及其原理研究生产的产品成分含量的研究分析为： (成分含量(% ) 批号901102 901128 901220 910220 920418水分7.16.97.97.0灰分7.3 7.2 7.2 7.0 7.1红35.580.62 37.370.90 36.870.67 * * 37.960.82胆甾酸1 牛磺酸6.480.66 *6. 700.44 *6. 720.46 *6. 830.48 * *6. 700.44 * *胆固醇5.950 1.880.36* 1.750.15* 无机盐3.68 3.40 3.35 3.43 3.28氨基酸0.788 0.695 0.698 0.67

6、0 0.762糖蛋白2.57 2.26 2.43 2.49 1.98合订92.4794.4695.16.6295.26 * n=12 * * n=。 相关仪器检验可比性研究、体外培养牛黄、天然牛黄相关仪器检验可比性研究红外光谱分析结果：天然牛黄和体外培养牛黄在1730-1350cm-1区间内具有胆红素盐和胆红素高分子质特征峰。 傅里叶变换红外分光光度修正的分析结果：体外培育牛黄和天然牛黄均可见1690cm-1为羧酸类，1629-1565cm-1为酰胺类； 1404cm-1是羟基类。 高效液相色谱分析结果表明，胆酸、脱氧胆酸对照品的图像与体外培育牛黄、天然牛黄中的胆酸、脱氧胆酸一致。 薄层色谱分

7、析结果：体外培育牛黄、天然牛黄色谱中与胆酸、脱氧胆酸对照品对应的位置出现相同颜色的荧光点。 微量元素含量的测定结果：体外培育牛黄与天然牛黄的微量元素及其含量也是一致的。 氨基酸含量的测定结果：体外培育牛黄与天然牛黄相同，含有17种氨基酸。 体外培育牛黄、天然牛黄、人工牛黄比较表、3种牛黄比较表、游离胆红素含量比较性研究体外培育牛黄， 天然牛黄游离胆红素含量比较性研究游离胆红素含量比较表批号123456791011平均天然牛黄4.4203.2382.0263.7034.3004.503.36.7561.2941.27.82.153体外培养牛黄0.500.500.500 . 5260.480.46

8、0.532.544、HPLC指纹的比较研究、体外培育牛黄与天然牛黄HPLC指纹的比较研究内容：基于牛黄中含有的化学成分，我们分别研究了氨基酸、肽类(。微量元素使用酸水检测氨基酸、肽类成分，使用酸水检测氨基酸、肽类成分，使用酸水/醇检测胆汁酸类成分，使用二甲亚砜检测胆红素类成分，1 )、 10批体外培养牛黄酸水提取液HPLC-MS TIC光谱、10批体外培养牛黄酸水提取液HPLC-MS TIC光谱具有良好的一致性，光谱、HPLC指纹光谱的比较研究，2， 4批天然牛黄和1批体外培育产地天然牛酸水提取液HPLC-MS TIC图谱各主要胆汁酸的比例有一定差异，图谱、HPLC指纹图谱对比研究，3 )，1

9、0批体外培养牛酸醇提取液中有紫外吸收成分的HPLC重叠图谱， 比较研究了10批体外培养牛黄醇提取液中有紫外吸收成分的HPLC指纹；4 ) 4批天然牛黄和1批体外培养牛黄醇提取液中有紫外吸收成分的HPLC重叠图像(2天然牛黄、13西牛黄、14巴西牛黄、牛黄天然牛黄与体外培养牛黄相比，紫外吸收成分的种类基本一致，但有相对含量5 )，10批体外培养牛黄二甲亚砜提取液HPLC重叠图像显着，10批体外培养牛黄二甲亚砜提取液HPLC图像比较研究，6 )、 4批天然牛黄和1批体外培养牛黄二甲亚砜提取液HPLC重叠图像(6天然牛黄、110、天然牛黄与体外培养牛黄相比，二甲亚砜提取液中的成分种类基本一致，但相对

10、含量略有不同，图谱、HPLC指纹图谱比较研究、HPLC指纹图谱比较研究、 结论： 1、体外培育牛黄和天然牛黄三个提取部位(包括酸、酸醇和二甲基亚砜提取液)种类2，10批体外培育牛黄三个提取部位(包括酸、酸醇和二甲基亚砜提取液)的HPLC指纹图谱有较好的一致性，体外使牛黄天然牛黄和体外培育牛黄的质量标准对比分析，天然牛黄和体外培育牛黄的质量标准对比分析(1)，质量标准对比分析(2)天然牛黄和体外培育牛黄的质量标准对比分析(2005版药典)天然牛黄和体外培育牛黄的质量标准：完全一致，主要药效学对照研究，体外ICCB抗炎作用强度接近天然牛黄。 退热作用： ICCB酵母对大鼠发热和伤寒副伤寒三联疫苗对

11、兔发热有显着抑制作用，其作用强度与天然牛黄类似。 中枢抑制作用： ICCB对安钠咖啡店致小鼠痉挛、吗啡致小鼠纵尾反应有明显的对抗作用，以上作用强度均接近天然牛黄。 人工牛黄粉无上述中枢抑制作用的抗菌作用： ICCB可显着降低感染金黄色葡萄球菌的少数死亡率。一般药理对照研究、体外培育牛黄、天然牛黄的一般药理对照研究对中枢神经系统的影响： ICCB具有镇静、抗痉挛作用，无镇痛作用。 TPN对中枢神经系统的作用与天然牛黄相同。 对心血管系统的影响： ICCB能明显降低大鼠血压，但不影响心率心电图。 这种作用与天然牛黄一致。 对呼吸系统的影响： ICCB和天然牛黄对大鼠呼吸频率和宽度无明显影响。 体外

12、培养牛黄的耐酸、中枢神经作用研究体外培养牛黄的主要药效集中反映在中枢作用上：上述抗痉挛、镇静、解热作用，除此之外还有耐酸、清除自由基、脑细胞保护、心功能保护作用。(1)体外培养牛对小鼠密闭缺氧耐受性的影响；*:p0.001、体外培养牛黄缺氧中枢神经作用的研究；*: p0.005 *: p0.01 (3)体外培养牛对缺氧小鼠的脑* 3360 p0. 05 * * 3360 p0. 01 * * * 3330 (2)体外育牛对缺氧小鼠血清和脑、心、肝组织匀浆SOD活性的影响，体外育牛黄缺氧、中枢神经作用的研究；(4)体外育牛黄急性、长期毒性试验，体外育牛黄急性毒性试验根据急性毒性试验的结果，体外育

13、牛黄给予小鼠和大鼠后小鼠经口TPN的LD50为9.0(8.0-10.1)g/kg，是人口服用量(0.3g或5mg/kg )的1800倍。 大鼠口服TPN的LD50大于10g/kg，是人口服用量的2000倍以上。 在体外培育牛黄的长期毒性试验长期毒性试验中，大鼠耐TPN1500mg/kg达到35天，狗耐TPN500mg/kg达到33天。 结果表明，TPN不影响长期口服大鼠和犬各系统的形态、结构和功能，且用药组动物体重增加均高于对照组。 在体外培育牛黄的突变、染色体突变试验、体外培育牛黄的突变试验体外培育牛黄的本试验条件下，从定性标准和皿中收集试验的观测结果，各试验株的恢复菌落数不超过对照组自发突

14、变菌落数的2倍，试验结果为阴性，这表示组氨酸缺陷型培养细胞染色体变异试验体外培养牛黄的剂量分别为1.0、10.0和100ug/ml的试验条件下，人外周血淋巴细胞诱发染色体细胞变异率的增加与溶剂对照组相比无统一学上的显着差异，试验结果为阴性，试验条件下人外周血淋巴细胞染色体无明显变异作用。 体外培育牛黄的小鼠微核、生殖毒性试验、体外培育牛黄的小鼠微核试验体外培育牛黄的量在50、150、500mg/kg体重的试验条件下，小鼠骨髓嗜多染红细胞的微核率不显着增加，体外培育牛黄无明显的致突变作用生殖毒性试验在本试验条件下，体外培育牛黄对大鼠的生殖行为和能力、着床数以及着床后胚胎存活数、存活胎儿的生长发育等无不良影响的存活胎儿也未见明显畸形作用。 体外培育牛黄食品的安全性评价、体外培育牛黄食品的安全性评价：根据食品安全性毒理学评价程序和方法对