花粉生活力萌发试验

1、实验2花粉生活力的测定悬浮培养法一、实验目的：掌握了解花粉生活力测定的意义和方法。二、实验材料：二月兰花粉三、实验仪器及药品：凹玻璃片、玻璃罩片、解剖针、镊子、纱布、标签、铅笔、显微镜、恒温槽、蔗糖、蒸馏水、硼酸、凡士林。四、实验原理：花粉是植物自然授粉与人工杂交的主要物质基础，花粉生活力的大小是保证杂交成功的关键。 在有性杂交育种中，由于亲本花期的不同，作为亲本的花粉必须在亲本株开花之前储藏并用于受粉(花粉在低温02、干燥、黑暗等条件下代谢强度降低。 花粉贮藏的原理是创造代谢强度低的环境，延长花粉的寿命，或者父母不在同一个地方的，必须从国外邮寄花粉供给。 储藏和外地邮寄的花粉是否失去了生活力

2、，需要经过测定确定。鉴定花粉生活力的方法主要有四种。 一是直接授粉要测定的花粉，修订结果率和结子数。 该方法的缺点是所需时间长，实验结果易受气候条件的影响。 二是将测得的花粉付与柱头，每隔一定时间剪去柱头，在显微镜下检查花粉的发芽情况。 从发芽率的高低来鉴定花粉的生活力。 三是在培养基上进行花粉人工发芽，检测应测定的花粉发芽率的高低。 后两种方法均根据花粉发芽率反映生活力的高低，具有一定的参考价值。 但是，发芽的未必能受精，特别是人工发芽受到许多条件的限制，因此只有相对可靠性。 四是用染色法鉴定花粉的生活力。 其原理是活花粉内存在过氧化氢酶，促进H2O2等过氧化物的氧释放分解。 这些刚释放出来

3、的活性氧容易使还原剂氧化，使用无色联苯胺、-萘酚等还原剂作为指示剂，这些还原剂被氧化，显示红色和玫瑰红色。 花粉活着的话，马上就会染上红色或玫瑰的红色，花粉死了的话，这个反应会延迟，花粉保持原色。 此方法的优点在于相对快速但相对间接。 本试验采用悬浮培养法鉴定花粉的生活力。五、实验程序：1 .培养液配方：蒸馏水和蔗糖分别配方5%、10%、15%的蔗糖溶液，各培养液中加入少量硼酸。2 .取掉开着的粉落在地上的二月兰花。3 .传播花粉：在凹玻璃片的凹处逐滴滴水。 在玻璃罩的中央滴下培养液，用镊子轻轻夹住二月兰的花药，轻轻沾在培养液的中央，使花粉均匀地分散在培养液的球面上。 在玻璃罩的四角涂抹少量凡

4、士林，用镊子夹住玻璃罩举起过程中迅速翻转，小心地放置在凹玻璃上，将培养液放入玻璃罩和凹点形成的小密室中。 各凹玻璃片分别制成蔗糖溶液3种浓度，以蒸馏水作对照。4 .培养：在制作的玻璃罩上贴上标签，标明花粉种类、培养液浓度及时间，慎重放入铺有湿润滤纸的培养皿中，放入22-24的恒温槽中培养5h。5 .观察：从恒温槽中取出凹玻璃片，在低倍镜下随机观察3个视野，计算花粉发芽率。 花粉管的长度达到花粉粒径的2倍以上视为发芽。六、结果分析1 .分析花粉发芽率高还是低的原因。2 .本实验重要步骤的总结和实验存在的问题的探讨。七、工作1 .绘制花粉粒发芽形态图。2 .花粉生活力测定在杂交育种中的重要意义？

5、测定花粉生活力的方法是什么？一般二核花粉粒高于三核花粉粒，不适合环境(温度、湿度、放射化学处理)抵抗力强。原因： 1、营养消费2、代谢旺盛3、外墙薄等花粉生活力的研究对农业林业具有重要的理论和生产实践意义。 为植物育种、培育、栽培进行人工授粉和杂交授粉提供理论依据。一般花粉生活力的长短取决于植物的遗传性，受环境因素的影响。一般来说，花粉生活力的长短因种类而异，大多数植物的花粉只能活几个小时、几天或几周。一般来说木本植物草本植物2胞花粉3胞花粉影响花粉生活力的主要环境因素是温度、湿度、空气。目前增加花粉生活力的措施主要采用极低温(-192的液态空气，-196的液态氮)、真空、降低氧分压、快速冻干

6、等方法储藏。影响花粉粒生活的主要因素一般为低温(150c )、低湿(相对湿度20/100-50/100 )低氧。 在正常情况下，液氮进行超低温保存，例如水稻10 0C、85/100的湿度为24小时玉米50C 90/100的湿度为89天。 但是禾本科要求高湿。 研究花粉贮藏对于解决花期不遇问题非常重要。(1)在植物盛期采集发育良好的花粉；(2)将花粉干燥至适合贮藏的含水量，封入耐低温容器内；(3)预冷处理或直接放置在低温、极低温条件下贮藏；(4)根据需要，随时取出装有花粉的容器慢慢或迅速升温解冻，使花粉复苏实验17花粉活力的测定在作物杂交育种、作物结实机理和花粉生理的研究中，多参与花粉活力的鉴定

7、。 掌握花粉活力的快速测定方法，是雄性不育株选育、杂交技术改良以及明确内外因素对花粉育性和结实率影响的基础。一、花粉发芽测定法【原理】正常成熟花粉有很强的活力，在适宜的培养条件下可以发芽和生长，可以在显微镜下直接观察校正其发芽率，确定其活力。【器材和用具】载玻片显微镜鲍伯恒温槽； 培养皿； 滤纸。【试剂】培养基(10%蔗糖、10Mg/L硼酸、05%琼脂):将10g蔗糖、1Mg硼酸、05g琼脂和90Ml琼脂的水放入烧杯中，在100水浴中溶解，冷却后加入100Ml水准备。【方法】1 .将培养基溶解后，稍微浸泡在玻璃棒上，涂抹在载玻片上，放入铺有湿润试验纸的培养皿中进行保湿。2 .采集丝瓜、南瓜以及

8、其他葫芦科植物刚开始开放的成熟花，将花粉洒到涂有培养基的载玻片上后，将载玻片放入铺有湿滤纸的培养皿中，在25左右的恒温槽(或室温20)中孵化，510分钟后【注意事项】1、不同种类植物花粉萌发所需温度、蔗糖和硼酸浓度不同，应根据植物种类改变培养条件。2、该方法也可用于观察花粉管在培养基上的生长速度以及不同蔗糖浓度、离体时间、环境条件等因素对花粉活力的影响。3 .并非所有植物花粉都能在该培养基上发芽，本法适用于容易发芽的葫芦岛科等植物花粉活力的测定。二、碘-碘化钾染色测定法【原理】大多数植物的正常成熟花粉粒呈球形，积累了大量淀粉，I2-KI溶液染成蓝色。 发育不良的花粉多呈畸形，不含淀粉或蓄积淀粉

9、少，I2-KI溶液染色多呈黄褐色。 因此，可用I2-KI溶液染色测定花粉活力。【器材和用具】显微镜载玻片和玻璃罩镊子茶色试剂瓶烧杯量筒天平。【试剂】I2-KI溶液：将2gKI溶解于510Ml蒸馏水中，加入1g I2，等到完全溶解后，加入300Ml蒸馏水。 先存在茶色的瓶子里。【方法】采集水稻、小麦或玉米的培育和不育株的成熟花药，取花药于载玻片上，加入1滴蒸馏水，用镊子压碎花药，放出花粉粒，加入I2-KI溶液12滴，盖上玻璃罩，在显微镜下观察。 染成蓝色的是含淀粉活力强的花粉粒，呈黄褐色的是发育不良的花粉粒。 观察23张电影，每张取5个视野，收集花粉的染色率，用染色率表示花粉的育成性。【注意事项

10、】该方法不能准确表达花粉活力，也不适合研究某些处理对花粉活力的影响。 在三核期退化的花粉由于已经积累了淀粉，遇到碘就会呈现蓝色反应。 另外，含淀粉被杀的花粉粒遭遇I2-KI也呈蓝色。三、氯化三苯基四唑(TTC )法【原理】有活力的花粉呼吸作用强，其产生的NADH2或NADPH2可以将无色的TTC (2，3，5 -氯化三苯四唑)还原成红色的TTF (三苯甲基)使其本身着色，没有活力的花粉呼吸作用弱，TTC的颜色变化眼睛【器材和用具】显微镜载玻片和玻璃罩镊子恒温槽； 茶色试剂瓶烧杯量筒天平。【试剂】05 % TTC溶液：将05gttc放入烧杯中，加入少许95%酒精使其溶解后，用蒸馏水稀释为100Ml。 溶液