WS∕T 684-2020 消毒剂与抗抑菌剂中抗菌药物检测方法与评价要求

1、ICS 11.080 C 50 WS中华人民共和国卫生行业标准WS/T 6842020消毒剂和抗菌剂中抗菌药物的检测方法和评价要求消毒剂和抗菌剂中抗菌药物的分析方法和评价要求由中华人民共和国国家卫生委员会于2020年7月20日颁布，于2021年2月1日实施。本标准根据国标1.12009的规定起草。本标准起草单位：江苏省疾病预防控制中心、中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全研究所、北京市疾病预防控制中心、江苏省食品药品检验所、中国药科大学、国家食品安全风险评估中心、山东省疾病预防控制中心、徐州市疾病预防控制中心、东南大学附属仲达医院。本标准主要起草人：吴、朱峰、胡、王伟、季、张六波、丁小静

2、、李格元、崔淑玉、陈、李燕、赵云峰、陈大伟、苏冠民、常桂秋、褚红亮、谭智、范晶晶消毒剂和抗菌剂中抗菌药物的检测方法和评价要求1范围本标准规定了消毒剂和抗菌剂中抗菌药物的检测方法和评价要求。本标准适用于四环素类(四环素、土霉素、金霉素、米诺环素、强力霉素)、大环内酯类(红霉素)、-内酰胺类(头孢拉定)、磺胺类(磺胺嘧啶)、喹诺酮类(氧氟沙星、诺氟沙星)、林可酰胺类(克林霉素)、氯霉素(氯霉素)等抗菌药物。2标准参考文件下列文件是本文件应用的必要条件。对于所有注明日期的参考文件，只有注明日期的版本适用于本文件。对于未注明日期的参考文件，最新版本(包括所有修订订单)适用于本文件。GB/T 6682分

3、析实验室用水规范和试验方法。3中华人民共和国药典中的术语和定义。以下术语和定义适用于本文件。3.1抗菌药物具有抗菌和/或杀菌活性，用于预防和治疗细菌感染，包括根据处方药管理的抗生素和化学合成药物。4检测方法4.1原理样品中的抗菌药物用甲醇或乙腈超声提取，过滤，与水混合，超高效液相色谱-串联质谱法测定，内标法定量。4.2除非另有规定，所用试剂和材料均为色谱纯，实验用水为国标6682规定的一级水。4.2.1试剂4.2.1.1乙腈(CH3CN)。4.2.1.2甲酸。4.2.1.3甲醇(CH3OH)。4.2.1.4氯化钠：分析纯。配制4.2.2.1 0.1%甲酸水溶液的试剂：取1.0毫升甲酸，用水调至

4、1000毫升，混匀。4.2.2.2甲醇水溶液：取800毫升甲醇，加入200毫升水，混合均匀。4.2.3标准物质四环素、土霉素、金霉素、米诺环素、多西环素、红霉素、头孢拉定、磺胺嘧啶、氧氟沙星、诺氟沙星、克林霉素、氯霉素、四环素-D6、土霉素-13C22-15N2、米诺环素-D6、多西环素-D3、磺胺嘧啶-D6、头孢氨苄氯霉素-D5，纯度大于98.5%或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质，其他相关信息见附录A。4.2.4用标准溶液制备4.2.4.1标准储备溶液(约1.0毫克/毫升):在10毫升容量瓶中准确称量约10.0毫克四环素、土霉素、金霉素、米诺环素、多西环素、红霉素、头孢拉定、磺胺嘧啶

5、、氧氟沙星、诺氟沙星、克林霉素和氯霉素，用甲醇溶解并调节至刻度，使浓度约为1.0毫克。4.2.4.2混合标准中间体溶液(10克/毫升):在25毫升容量瓶中准确吸收每种单一标准储备溶液的适量，用甲醇稀释，并按比例调节体积，以制备浓度为10克/毫升的混合标准中间体溶液，并将其储存在避光的冷库中。有效期为一个月。4.2.4.3内标化合物标准储备溶液(约1.0毫克/毫升):将四环素-D6、土霉素-13C22-15N2、米诺环素-D6、多西环素-D3、磺胺嘧啶-D6、头孢氨苄-D5、左氧氟沙星-D8、红霉素-13C-D3、噻苯咪唑-D4、氯霉素-D5(约10.0毫克)溶于10毫升容量瓶中的甲醇中，制备浓

6、度约为1.0毫克/毫升的内标储备溶液，将其冷冻并储存在-20下4.2.4.4混合内标化合物标准中间体溶液：取适量单一内标储备溶液于10毫升容量瓶中，用甲醇稀释，调节体积至刻度，配制1克/毫升混合内标中间体溶液，冷藏避光保存。有效期为3个月。4.2.4.5混合标准溶液：将抗菌药物的标准中间体溶液制成混合标准系列溶液，如1克/升、2克/升、5克/升、10克/升、20克/升、50克/升和100克/升，每个系列溶液中混合内标化合物的浓度为10克/升，用超高效液相色谱-串联质谱法测定即可使用。4.2.5材料有机过滤膜：孔径为0.22米.4.3仪器和设备4.3.1超高效液相色谱-串联质谱法：带电喷雾离子源

7、。4.3.2分析天平：灵敏度为0.1毫克。4.3.3离心机：转速为9000转/分钟。4.3.4涡流混合器。4.3.5超声波清洗机。4.4分析步骤4.4.1样品预处理4.4.1.1液体制剂WS/T 6842020 3称取0.2克(精确至1毫克)均匀混合的样品，将其放入15毫升离心管中，加入10.0升混合内标化合物标准中间体液体，然后加入3.0毫升甲醇，旋转1分钟以分散样品，并用超声波提取10分钟。加入0.15克氯化钠，涡旋混合均匀，以9000转/分钟离心5分钟，吸取上清液，用滤膜过滤，取0.8毫升滤液放入注射瓶中，加入0.2毫升水，混合均匀，用超高效液相色谱-串联质谱法测定。4 . 4 . 1

8、. 2 . 1 4.4.1.2其他剂型凝胶剂型称取0.2克(精确至1毫克)均匀混合的样品，将其放入15毫升离心管中，先加入10.0升混合内标化合物校准中间体溶液，然后加入3.0毫升乙腈，涡旋1分钟以分散样品，超声提取10分钟，以9000转/分钟离心5分钟，并吸取上清液。用滤膜过滤，取0.8毫升滤液放入注射瓶中，加入0.2毫升水，混匀，用超高效液相色谱-串联质谱法测定。4.4.1.2.2称取0.2克(精确至1毫克)均匀混合的乳膏剂型样品，将其放入15毫升离心管中，先加入10.0升混合内标化合物校准中间体溶液，然后加入3.0毫升甲醇，涡旋1分钟以分散样品，超声提取10分钟，以9000转/分钟离心5

9、分钟，吸收上清液，用滤膜过滤， 取0 4 . 4 . 2 4.4.2.1超高效液相色谱样品测定的参考条件如下：a)色谱柱：C18柱(长：100毫米，内径：2.1毫米，粒径：1.8米)，或同等品； b)流动相：a相为0.1%甲酸水溶液，b相为乙腈；c)流量：0.3毫升/分钟；柱温：40；e)注射量：5升；f)梯度洗脱程序：见附录b。4.4.2.2质谱的参考条件如下：a)电离模式：电喷雾电离，电喷雾电离-同时扫描；b)离子源温度：550；c)毛细管电压：电喷雾指数：5.5千伏；电潜指数：-4.5千伏；气幕气体：2.1 105帕；e)雾化气体：4.5-105帕；f)辅助气体：4.5 105帕；g)监

10、控模式：物料需求管理模式；h)其他质谱参数：见附录c。制作4.4.2.3 WS/T 6842020-4标准曲线将混合标准系列溶液从低浓度到高浓度注入超高效液相色谱-串联质谱仪中，测量相应的峰面积，以被测组分的定量离子峰面积与内标化合物的定量离子峰面积之比作为标准曲线，用电离对进行定性分析，u4.4.2.4的定性测定在相同的试验条件下，样品中目标化合物色谱峰的保留时间与相应标准色谱峰的保留时间相比应在2.5%以内，检测到的相对离子丰度应与相同浓度标准溶液中的相对离子丰度一致，其相对丰度比偏差应符合表1的要求。表1相对离子丰度的最大允许偏差相对离子丰度/% 50 2050 1020 10允许相对偏

11、差/25 30 50 4.4.2.5定量测定本方法采用内标法定量。纵坐标是被测组分的定量离子峰面积与内标化合物的定量离子峰面积之比(四环素-D6作为四环素和金霉素的内标，土霉素-13C22-15N2作为内标，米诺环素-D6作为内标，多西环素-D3作为内标，红霉素-13C-D3作为内标，头孢拉定作为内标)。磺胺嘧啶以磺胺嘧啶-D6为内标，氧氟沙星和诺氟沙星以左氧氟沙星-D8为内标，克林霉素以噻苯咪唑-D4为内标，氯霉素以氯霉素-D5为内标)，横坐标表示样品中被测成分的质量浓度。4.4.2.6的测定将样品溶液注入超高效液相色谱-串联质谱法，利用两对离子(特征离子对/定量离子对)对应的色谱峰面积的保

12、留时间和相对丰度进行定性分析。根据标准曲线计算样品溶液中目标化合物的质量浓度。4.4.3空白试验应按照4.4.1中的步骤进行，但不添加样品。4.4.4结果计算和表达样品中目标化合物的含量根据公式(1)计算：m v x.(1)其中：x样品中被测成分的含量以微克/千克(g/kg)为单位。根据内标法，标准曲线中样品溶液中被测成分的浓度，单位为微克/升(克/升)；v样品的最终恒定体积，单位为毫升(ml)；m样品以克(g)为单位称重。计算结果保留三个有效数字。4.4.5精密度WS/T 6842020 5在重复条件下获得的两个独立测定结果之间的绝对差值不应超过算术平均值的15%。该方法的回收率和精密度见附

13、录E。4.4.6检出限和定量限如下：取样量为0.2 g，提取液体积为3.0毫升。该方法的检出限和定量限见附录F。5其他抗菌药物的检测方法可参照中华人民共和国药典进行检测。中华人民共和国药典未涉及的检测方法，必须参照文献报道的方法进行验证后才能使用。6评价要求6.1抗菌剂不应添加到消毒剂和抗菌剂中。6.2消毒剂和抗菌剂中四环素、土霉素、金霉素、米诺环素、多西环素、红霉素、头孢拉定、磺胺嘧啶、氧氟沙星、诺氟沙星、克林霉素和氯霉素的含量或总量不得超过30毫克/千克。6.3消毒剂和抗菌剂中其他抗菌药物的含量或总量不得超过外用药物最低规格的1%。Ws/t 6842020 6a b c附录a(信息附录)标

14、准产品信息。有关标准产品的信息，请参见表A.1。表A.1标准品相关信息化合物英文名称分子式CAS编号化学结构式四环素四环素C22H24N2O8 60-54-8土霉素土霉素C22H24N2O9 79-57-2金霉素金霉素C22H23ClN2O8 57-62-5米诺环素米诺环素C23H27N3O7 10118-90-8强力霉素强力霉素C22H24N2O8 564-25-0红霉素红霉素C37H 67N 13 114-07-8 WS/T 6842020 7头孢拉定头孢拉定C16H19N3O4S 38821-53-3磺胺嘧啶磺胺嘧啶C10H 10N 4O 42S 68-35-9氧氟沙星氧氟沙星C18H20FN3O4 82419-36-1诺氟沙星诺氟沙星C16H18FN3O3 70458-96-7克林霉素克林霉素C18H33ClN2O5S 18323-44-9氯霉素氯霉素C11 h12 C2 N2 o 5 56-75-7四环素-D6四环素-D6 C22H18D6N2O8钠土霉素- 13C 22- 15N 2土霉素-13C 22-15N 2 13C 22H 24 15N 209 NA WS/T 6842020 8米诺环素-D6米诺环素-D6 C23H27D6N3O3 1036070-10-