不同样品核酸提取、扩增、荧光定量PCR完美解决方案.ppt

1、其他样本核酸提取、放大、荧光定量PCR完美解决方案，北京市白泽生物技术有限公司(北京市海淀区上肢信息15号)，FAXTel62983458 62979408核酸提取攻略上层溶液，液氮研磨或其他细胞分解，干燥溶解或洗脱，离心洗涤，酒精沉淀或介质吸附，RNA萃取过程，沉淀法：异丙醇或乙醇介质吸附法：RNA萃取公用方法-沉淀方法，介于ipso之间有机溶剂萃取，沉淀，获得纯RNA。RNA提取是常用的方法-分解法，提取胍盐/-巯基乙醇盐酸胍分解样品，抑制RNase的活性。BIOTEKE的RNA提取试剂巯基乙醇变性蛋白(BioTeke的RNA提取)具

2、有明显的优点，这是基于经典试剂的持续升级。多种高质量RNA提取试剂：Tri pure(三唑)RNApure(三唑方法的升级产品)，组织/细胞样本RNA提取，材料：鼠标间组织，方法：BioTeke RNApure高纯总RNA快速提取试剂盒rnanm rain:标准hella细胞RNA；材料：松针、冬青、香蕉、树菠萝、杨树；方法：普通植物总RNA提取试剂盒(离心柱类型)0.1g样品组织结果：产量：约35-40g纯度：OD260 35、6松针；7、8冬青；9，10棵树菠萝，多糖多酚植物样品2DNA提取，1 2 3 4 6 7 8 9 10，试剂盒适用范围：水稻种子、小麦种子、玉米种子、高粱种子、拟南

3、芥种子、大豆种子、苹果、葡萄、香蕉、棉花、龙眼、高粱新方法：通过分解液和山梨醇层经过柱两次，一次去除基因组DNA和大块RNA，以后吸附Micro RNA，然后冲洗收集。(阿尔伯特爱因斯坦，Northern Exposure(美国电视电视剧)，新方法特征：有效地分离小RNA，同时分离总RNA，snRNA分析可用的各种来源的样本提取时间较短，完成实验约30分钟，生物大分子纯度：紫外线分光光度法测定260nm和280nm波长中提出的总RNA的光吸收，以A260/A280的比率判断总RNA的纯度。质量：甲醛变性琼脂糖凝胶电泳鉴定。，RNA纯度和质量调查，RNA提取常见问题和解决方案，RNA的分解OD2

4、60 /OD280比率低的传记永冻型异常下游实验效果不好。RNA的分解，新鲜细胞或组织：分解液的质量外源RNase的污染分解液使用不足组织分裂不能充分分解富含内源酶的其他样品(如脾脏、胸腺等)。在液氮条件下压碎组织均匀胶水时，最好使用更多的分解液。RNA分解，冷冻样品：取样后，可以立即放入液氮中的冷冻，然后转移到-70冰箱保存。样品必须相对较小。先磨液氮，然后热分解液体均匀化；避免样品和龟裂液充分接触前熔化，研磨机必须预冷，在抛光过程中要及时补充液氮。RNA保护，样本收集保护：通常是液氮保留样本保护剂RNAfixer，样本浸泡可以保存37天、25周、4个月、-20年左右。从环境中删除RNase

5、:DEPC处理各种实验机构RNAsafe，以从溶液中删除RNase。RNA酶喷雾去除剂具有去除固体表面RNase的作用，避免了更多的RNase污染。蛋白质污染：不要吸入中间层和有机相，添加氯仿后先混合，离心层的离心力和时间要足够。减少起始样品量，确保分解完整、彻底的解决方法：再次提取，再次沉淀，溶解。苯酚残留：不要吸入中间层和有机相，应添加氯仿后先混合，离心层的离心力和时间充足。解决方法再次提取：再次沉淀，融化。OD260 /OD280比率低，OD260 /OD280比率低，提取试剂残留物。洗涤时要彻底悬浮RNA，彻底去除75%的乙醇。解决方法：再沉淀一次，然后融化。设备限制：测量OD260和

6、OD280数值时，请确保OD260读数在0.10-0.50之间。牙齿范围线性度最好。用水稀释样品：测定OD时，与样品稀释相对，使用10 mM Tris，pH 7.5。作为稀释液的水会导致比率的减少。郑智薰变性传记电泳：3g以上的样品，6V/cm以上的电压，过时的传记电泳缓冲区可能导致28S和18S条带无法分离。变性传记游泳带变浅：由于EB和单链结合能力下降了一些，因此等量的变性传记游泳比郑智薰变性传记神童稍轻。甲醛质量不高。传记电泳条异常，提取试剂残留75%乙醇洗涤样品中的杂质残留多糖等杂质，再沉淀DNA污染RNase-Free的DNase I消化提取RNA，下游实验效果下降(RNA分解)，其

7、他样品基因组DNA提取，一般样品基因组DNA提取细胞/组织用阳离子洗涤剂溶解细胞膜，与核酸结合。在高盐中溶解释放DNA。SDS方法：适用于血液、细胞、动物组织、细菌、酵母等物理方法机械剪切、超声波粉碎、研磨均匀化等。容易引起DNA破裂。酶法蛋白酶K BioTeke基因组DNA提取系列试剂盒综合利用牙齿方法，基因组DNA提取过程-细胞分裂，特点：毒性氯仿，苯酚等试剂多次热冲洗，确保高纯度；长度高达30-50Kb，提取原理：组织/细胞/细菌/血液基因组DNA提取，玉米叶基因组DNA提取(使用新的快速植物基因组DNA提取试剂盒)，提取原理：植物材料基因组DNA提取，特殊样本基因组DNA提取，传统方法

8、应用举例就像从土壤/粪便中提取微生物基因组DNA一样？比如提取病毒和其他微量样本DNA？不！提取重量/大量血液基因组DNA，用传统方法消化后提取苯酚/氯仿，长时间，操作员健康受损，非欧技创新，蛋白酶消化，苯酚/氯仿提取结果：产量：约75-250g /5mL血液纯度：OD 260采用包括玻璃牛奶、离心吸附柱连接在内的纯化方式，DNA大量丢失，产率低，很难切身感受土壤微生物的多样性。BioTeke的技术创新：用酶粉碎，确保基因组的完整性用异丙醇沉淀DNA，DNA没有损失。林爽样品基因组DNA提取，病毒基因组DNA提取酵母基因组DNA提取口腔棉签DNA提取微量样品DNA提取石蜡组织DNA提取头发DN

9、A提取，一步DNA提取放大，原理：综合微量样品基因组DNA提取和高效PCR放大试剂。从头发、石蜡组织等微量组织中高效提取足够浓度的DNA后，进行PCR扩增。操作简单方便，可以同时操作大量样品。确保基因组DNA的完整性和纯度提高DNA的溶出效率，保存DNA，基因组DNA分离纯化注意事项，确保基因组DNA的完整性和纯度提高DNA的溶出效率，保存DNA，基因组DNA分离纯化注意事项，简化操作程序，缩短操作时间，减少物理因素分解DNA，振动，搅拌等化学物质DNase，确保基因组DNA的完整性和纯度，提高DNA的溶出效率DNA储存，基因组DNA分离纯化注意事项，溶出液65度预热10分钟溶出量30L溶出量

10、2次或3次以上，确保基因组DNA的完整性和纯度提高DNA的溶出效率DNA储存，基因组DNA分离纯化注意事项，pH如何提高微量核酸提取或回收后的浓度？核酸佐剂的应用微量吸附柱的应用- 15l洗脱系统质粒萃取胶回收或PCR产物回收微量细胞/组织DNA/RNA萃取病毒DNA/RNA萃取微量林爽样品DNA/RNA萃取，其他样品核酸萃取，扩增，荧光定量PCR完整解决方案-北京市白泽生物技术有限公司(北京市海淀区整个过程不需要RNA酶操作。逆转录酶、RNA酶抑制剂都在一定程度上影响产物的质量。反转录相关因素，Super M-MLV逆转录酶高效反转录活性，RNASEH活性Thermo M-MLV逆转录酶有效

11、反转录活性，RNaseH无活性适合长片段cDNA合成的RNaseH活性，强大的模板兼容性，高GC含量(75%)，One step RT-PCR，模板：使用BioTeke的RNApure总RNA提取试剂盒鸡肝脏组织RNA，目的片段：执事基因-Actin反应系统：反应节目：RT-PCR相关产品，superm 11Thermo M-MLV逆转录酶，10000u/580韩元Thermo RT Kit cDNA第一链合成试剂盒50次，价钱1200韩元Thermo One-step RT-PCR Kit第一阶段RT-PCR试剂盒50次，价钱疾病和药物研发等，Real-time qPCR原理， 探针流(TaqMan探针及分子信标)是利用靶序列和特殊混杂的探针表示扩增产物的增加。后者增加了探针的识别阶段，特异性更高，但前者更容易。荧光染料和荧光探针、SYBR Green I工作原理、SYBR Green I是双链DNA结合染料，与双链DNA结合后荧光有了很大改善。牙齿性质对强酸物质检查很理想。SYBR GreenI的最大吸收波长约为497nm，发射波长约为520nm。在PCR反应体系中，SYBR荧光染料添加过量，SYBR荧光染料特异性地混合DNA双链后，释放荧光信号，没有在链中混合的SYBR染料分子不会释放荧光信号，从而使荧光信号的增加与PCR产物的增加完全同步。LU