微生物保藏.ppt

1、2020年10月26日3时0分,微生物菌种保藏,B1-341,菌种保藏要求各保藏管理中心所保藏的菌种，必须具有该菌种的详细历史及有关实验资料。并对其所负责保藏的菌种均应采取妥善、可靠的方法保藏，避免菌种的污染或死亡。 中国微生物菌种保藏管理条例 1986年,微生物个体微小，代谢活跃，生长繁殖快，如果保存不妥容易发生变异，或被其他微生物污染，甚至导致细胞死亡。 因此，在保藏过程中，必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的状态，才能在一定的时间内使其不发生变异而又保持生活能力。,微生物菌种保藏基本原理,在挑选优良纯培养物并使其处于休眠状态基础上，人为地创造一个有利于休眠的环境，使其长期保存后仍能

2、保持菌种原有的优良特性。,微生物菌种保藏基本措施,传代培养保藏法,液体石蜡覆盖保藏,载体保藏法,真空,干燥,低温,寄主保藏法,冷冻保藏法,冷冻 干燥 保藏 法,1传代培养保藏法又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等（后者作保藏厌氧细菌用），培养后于46冰箱内保存。 2液体石蜡覆盖保藏法是传代培养的变相方法，能够适当延长保藏时间，它是在斜面培养物和穿刺培养物上面覆盖灭菌的液体石蜡，一方面可防止因培养基水分蒸发而引起菌种死亡，另一方面可阻止氧气进入，以减弱代谢作用。,3载体保藏法是将微生物吸附在适当的载体，如土壤、沙子、硅胶、滤纸上，而后进行干燥的保藏法，例如沙土保藏法和滤纸保藏法应用相当广泛。

3、 4寄主保藏法用于目前尚不能在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次氏体、螺旋体等，它们必须在生活的动物、昆虫、鸡胚内感染并传代，此法相当于一般微生物的传代培养保藏法。病毒等微生物亦可用其他方法如液氮保藏法,5冷冻保藏法可分低温冰箱（-20-30，-50-80）、干冰酒精快速冻结（约-70）和液氮（-196）等保藏法。 6冷冻干燥保藏法先使微生物在极低温度（-70左右）下快速冷冻，然后在减压下利用升华现象除去水分（真空干燥）。,有些方法如滤纸保藏法、液氮保藏法和冷冻干燥保藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液，以防止因冷冻或水分不断升华对细胞的损害。 保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的

4、亲和力来稳定细胞成分的构型。 保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。,滤纸保藏法,方法步骤,1）将滤纸剪成0512cm的小条，装入068cm的安瓿管中，每管12张，塞以棉塞，（105kg/cm2），1213灭菌30分钟。 2）将需要保存的菌种，在适宜的斜面培养基上培养，使充分生长。 3）取灭菌脱脂牛乳12ml滴加在灭菌培养皿或试管内，取数环菌苔在牛乳内混匀，制成浓悬液。 4）用灭菌镊子自安瓿管取滤纸条浸入菌悬液内，使其吸饱，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。,5）将安瓿管放入内有五氧化二磷作吸水剂的干燥器中，用真空泵抽气至干。 6）将棉花塞入管内，用火焰熔封，保存于低温下。 7）需要使用菌种，复活培养时，可将安瓿管口在火焰上烧热，滴一滴冷水在烧热的部位，使玻璃破裂，再用镊子敲掉口端的玻璃，待安瓿管开启后，取出滤纸，放入液体培养基内，置温箱中培养。,优缺点,细菌、酵母菌、丝状真菌均可用此