GB∕T 34776-2017 T4DNA连接酶 酶活及杂质检测方法

ICS07080 A 40 . 中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 GB/T347762017 T4DNA 连接酶 酶活及杂质检测方法 T4DNAligaseDetectionmethodsofactivityandimpuritiesofenzyme2017-11-01发布 2018-05-01实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发 布 中 国 国 家 标 准 化 管 理 委 员 会 GB/T347762017 前 言 本标准按照 给出的规则起草 GB/T1.12009 。 本标准由全国工具酶工作组 归口 (SAC/SWG11) 。 本标准起草单位 中国测试技术研究院 深圳华因康基因科技有限公司 福建华灿制药有限公司 : 、 、 。 本标准主要起草人 周李华 李怀平 盛司潼 孙登峰 谭辉彪 黄发灿 金虹 马丽侠 叶德萍 李花 : 、 、 、 、 、 、 、 、 、 、王智 沈兴中 谭和平 、 、 。 GB/T347762017 T4DNA 连接酶 酶活及杂质检测方法 1 范围 本标准规定了 连接酶的活力 杂质的检测方法 T4DNA 、 。 本标准适用于作为分子生物学研究用的 连接酶 T4DNA 。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 凡是注日期的引用文件 仅注日期的版本适用于本文 。 , 件 凡是不注日期的引用文件 其最新版本 包括所有的修改单 适用于本文件 。 , ( ) 。 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T6682 电泳装置 YY/T0087 医用离心机 YY/T0657 移液器检定规程 JJG646 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 。31 . DNA 连接酶 DNAligase 一种封闭 链上的缺口酶 借助 或 水解提供的能量催化相邻的核苷酸分子间 羟 DNA , ATP NAD 3- 基和 磷酸基形成磷酸二酯键 5- 。 注 连接酶催化底物可以是 或 依据酶的类型不同 反应中产生高能中间产物的辅助因子可以是 :DNA DNA RNA。 , 或 + ATP NAD 。32 . T4DNA 连接酶 T4DNAligase 一种 噬菌体基因 的编码产物 以 作为辅助因子 催化双链 或 的 磷酸末 T4 30 , ATP , DNA RNA 5- 端和 羟基末端形成磷酸二酯键 3- 。 注 带有 分子质量约为 来源于转化有 连接酶表达载体的 E.Coli 菌株 主要作用是催化 : His-Tag, 70ku, T4DNA 。 末端之间的连接 修复双链核酸中的单链切刻 DNA , 。33 . 酶活力单位 unitactivity 在 连接酶反应缓冲液中 反应条件下 能使 的经 消 20L1 T4DNA ,16 ,30min 50% Hind 化的 片段 端浓度为 连接所需的酶量即为 活力单位 DNA 5 0.12mol/L(300g/mL) 1 。4 缩略语 下列缩略语适用于本文件 。 聚合酶链式反应 PCR (polymerasechainreaction)。 十二烷 基 硫 酸