消毒灭菌与生物安全PPT课件

1,第3章消毒灭菌与实验室生物安全,2,消毒与灭菌,3,消毒（disinfection） 杀死物体上或环境中的病原微生物，并不一定能杀死细菌芽胞和非病原微生物的方法。用以消毒的化学制剂称为消毒剂（disinfectant）。 灭菌（sterilization） 指杀灭物体上所有微生物的方法，包括杀灭细菌芽胞在内的全部病原微生物和非病原微生物。,4,清洁（cleaning) 指通过除去尘埃和污秽以减少微生物数量的过程。防腐(antisepsis) 防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法。细菌一般不死亡。无菌(asepsis) 不存在活菌的意思。防止细菌进入人体或其它物品的操作技术，称为无菌操作。,5,物理消毒灭菌法一、干热方法焚烧(incineration)烧灼(flame)干烤 干热灭菌器 (hot airsterilizer)160 170 2h4 红外线 (ultra-red ray) 110m效果最好,6,二 湿热灭菌法1巴氏消毒法(pasteurization)2煮沸法(boiling water) 3 流通蒸气灭菌法(free-flowing steam)4 间歇蒸气灭菌法(fractional sterilization) 5 高压蒸气灭菌法 (autoclaving),7,二、辐射杀菌法,紫外线波长200一300nm的紫外线(包括日光中的紫外线)具有杀菌作用，其中以265266nm最强，这与DNA的吸收光谱范围一致。紫外线主要作用于DNA，使一条DNA链上相邻的两个胸腺嘧啶共价结合而形成二聚体，干扰DNA的复制与转录，导致细菌的变异或死亡。紫外线穿透力较弱，普通玻璃、纸张、尘埃、水蒸气等均能阻挡紫外线，故只能用于手术室、传染病房、细菌实验室的空气消毒，或用于不耐热物品的表面消毒。,8,电离辐射 主要包括和射线。 射线穿透性差，作用时间短，安全性好； 射线穿透性强，作用时间短长，安全措施要求高。微波（microwave) 可穿透玻璃、陶瓷、薄塑料，不能穿透金属，在有水分存在的条件下靠热效应发挥杀菌作用。,9,三、滤过除菌法(filtration),用物理阻留的方法除去液体或空气中的细菌、真菌以达到无菌的目的，但不能除去病毒和支原体滤菌器 液体除菌生物洁净技术 空气除菌,10,四、干燥与低温抑菌法,干燥防止细菌繁殖，抵抗力弱的细菌可以死亡低温常用于保存菌种，最好的方法为冷冻真空干燥法（lyophilization),11,（二） 化学消毒与灭菌方法 化学消毒剂的作用主要是能使微生物的蛋白质变性、酶失活、细胞壁或细胞膜的结构改变，从而导致微生物死亡。根据对微生物的杀灭作用，将消毒剂分为高效、中效和低效3类。高效消毒剂能杀灭包括细菌芽胞和真菌孢子在内的各种微生物，又称灭菌剂。中效消毒剂可杀灭除芽胞以外的各种微生物。低效消毒剂只能杀灭细菌繁殖体和有包膜病毒，对真菌有一定杀灭作用。,12,表 常用消毒剂的杀菌性能分类,13,1含氯酸消毒剂： 常用的有漂白粉、二氯异氰酸尿酸钠与次氯酸钠。（1）杀菌范围 本类化合物杀菌谱广，对细菌繁殖体、病毒、真菌和细菌芽胞都有杀灭作用。（2）消毒对象：可用于饮水消毒和污水处理；病人排泄物（粪便、尿、脓液、痰）和污染环境的消毒。（3）使用方法：可用其水溶液进行喷洒、浸泡、擦拭。住室、用具、杂物等用0.2%0.5%澄清液喷洒、擦拭，粪便1升加200克干粉，尿1升加5克干粉搅拌。注意事项：漂白粉性质不稳定，遇潮湿、光、热、二氧化碳均可使氯释放而失效，故应放在密闭容器中置阴凉、干燥通风处保存。,14,2过氧乙酸（1）杀菌范围：过氧乙酸是广谱杀菌剂，对细菌繁殖体和芽胞、真菌、病毒均有杀灭作用，对乙肝病毒消毒效果好。（2）消毒对象：病人的排泄物（粪便、尿、痰）、血液、环境和不锈钢、塑料、搪瓷、玻璃、化纤等物品。（3）使用方法：常用的消毒方法有喷雾、浸泡、擦拭、熏蒸等，常用浓度为0.2%0.5%。（4）注意事项：过氧乙酸有较强的腐蚀性和漂白作用。高浓度的溶液对皮肤黏膜有强烈的刺激性，甚至引起受伤。浓度为0.2%以下无明显刺激性，稀释过的溶液容易分解，不宜久放，需临用前配制。,15,3过氧化氢（1） 杀菌范围：对细菌繁殖体、芽胞、真菌、病毒均有一定杀灭作用。（2） 消毒对象：可用于消毒丙烯酸酸树脂制成的外科体内埋置物、隐形眼镜、不耐热的塑料制品、餐具，清洗伤口、皮肤及口腔等。（3） 使用方法：作为消毒剂时，可用3%6%溶液作用10分钟。作杀菌剂时，使用浓度为6%10%，作用60分钟。清洗伤口用3%。含漱剂浓度为1%1.5%。注意事项：过氧化氢不稳定，长时间接触对金属、织物有腐蚀和漂白作用。对皮肤黏膜有腐蚀性，吸入过多可使人中毒,16,5 二氧化氯 在水中溶解饱和后，可以以气态向空气中自然扩散，当空气中浓度达到4mg/m3时，可杀死99.99%细菌、病毒和真菌。二氧化氯 是新型的安全无毒、广谱高效的空气消毒净化剂,17,5甲醛 含36%40%甲醛的水溶液为福尔马林。（1） 杀菌范围：甲醛的气体和液体都有广谱杀菌作用，对细菌繁殖体、芽胞、分枝杆菌、真菌和病毒都有较好的杀菌作用。（2） 消毒对象：医疗器械浸泡消毒。在实验室消毒和卫生防疫中，用甲醛气体熏蒸消毒者较多。（3） 使用方法：8%甲醛-乙醇溶液（70%乙醇配制）可用于医疗器械浸泡消毒，5分钟杀灭繁殖体，10分钟杀灭结核杆菌，18小时杀灭一切微生物。在1000ml 10%的福尔马林溶液中加入50g硼砂，对清洁的金属器械浸泡过夜可达到灭菌。甲醛气体熏蒸消毒见表注意事项：甲醛对皮肤黏膜有强烈刺激作用。甲醛气体穿透性差，消毒物品的排放要相互间隔一定距离，污染表面尽量暴露在外面。,18,表2 甲醛熏蒸消毒方法和剂,19,6戊二醛（1） 杀菌范围：细菌繁殖体和真菌高度敏感，只需12分钟即可杀灭，在酸性条件下无杀灭芽胞作用，当PH增至7.58.5时，杀芽胞作用明显。（2）消 毒对象：为杀菌剂，常用于灭菌或消毒医疗器械，亦可用于卫生防疫消毒。（3） 使用方法：目前常用以下三种：2%碱性戊二醛，在2%戊二醛中加入0.3%碳酸氢钠，使PH增至7.78.3；强化酸性戊二醛，为2%戊二醛中加入0.25%聚氧乙烯脂肪醇醚，PH3.8；中性戊二醛，强化酸性戊二醛加碳酸氢钠将PH调制7.0。这三种方法均可用于浸泡擦拭消毒，浸泡10小时可达到灭菌。浸泡后的医疗器械必须用无菌蒸馏水冲洗3次后使用。对一般细菌繁殖体、结核杆菌和一般病毒需10分钟，乙肝病毒1小时、细菌芽胞3小时。注意事项：2%碱性戊二醛对黏膜和眼睛有刺激作用。,20,7环氧乙烷（1） 杀菌范围：在1%5%浓度下数小时可杀灭各种微生物。（2） 消毒对象：目前主要用其气体进行熏蒸消毒与灭菌。衣物、皮毛、贵重物品、精密仪器、一次性医疗用品，忌热忌湿物品的灭菌。（3） 使用方法：环氧乙烷易挥发成气体，且具有一定压力，用于熏蒸消毒时必须在密闭耐压的容器内，0.40.7kg/m3，要求温度高于15，以50为宜，作用1448小时。注意事项：环氧乙烷易爆炸，注意安全保存，对人有毒性，消毒后注意通风散气。,21,8碘酊 配方为：碘20g、碘化钾15g、95%乙醇500ml，加水至1000ml。（1） 杀菌范围：为广谱杀菌剂，对大部分细菌、真菌、病毒、细菌芽胞均有杀灭作用。（2） 消毒对象：主要用于皮肤消毒。（3） 使用方法：2%碘酊用于皮肤擦拭消毒。（4） 注意事项：对皮肤黏膜有强烈刺激作用，浓度过高引起碘烧伤，导致脱皮。碘过敏者禁用。用碘酊消毒后用75%乙醇脱碘。不宜用于口腔黏膜消毒。,22,9碘伏 是碘与表面活性剂的不定型结合物，根据表面活性剂的不同，其性状有一定差别，一般无刺激性，无腐蚀性，储存稳定。（1）杀菌范围：有广谱杀菌作用，能杀灭细菌繁殖体、真菌、病毒、细菌芽胞，对乙肝病毒有杀灭作用。（2）消毒对象：用于皮肤、黏膜及餐具、玻璃制品的消毒。（3）使用方法：10%溶液用于术前手的消毒，0,5%1%溶液用于口腔黏膜的消毒、阴道冲洗，0.1%冲洗污染的伤口。（4）注意事项：温度由20升至40时，可加强杀菌作用，有机物可使碘伏杀菌作用减弱。,23,10乙醇（1） 杀菌范围：65%80%的乙醇作用15分钟可杀灭一般细菌的繁殖体，结核杆菌，不能杀灭芽胞，对病毒和真菌效果差。（2） 消毒对象：皮肤消毒、医疗器械、体温计消毒。（3） 使用方法：75%乙醇溶液浸泡、擦拭，时间为560分钟。（4） 注意事项：乙醇杀菌需要一定水分，要稀释到一定浓度才能充分发挥杀菌作用，一般使用浓度不超过80%，高于80%作用反而降低，因高浓度乙醇接触部位的表层蛋白质迅速凝固，形成保护膜，阻碍了乙醇的渗透。消毒物品前，应尽量清除表面的有机物。,24,11新洁尔灭（苯扎溴铵）（1）杀菌范围：可杀灭多种细菌和真菌，对革兰氏阳性菌作用大于革兰氏阴性菌，对结核杆菌和细菌芽胞只有抑制作用，对肝炎病毒无效。（2）消毒对象：手、皮肤、黏膜、医疗器械的消毒。（3）使用方法：可浸泡、冲洗、擦拭、喷雾消毒。手、皮肤用0.1%水溶液，消毒医疗器械用0.05%0.1%溶液。（4）注意事项：极易被多种物质吸附，因此，药液浓度隋消毒物的增加而逐渐降低，应及时更换。不能与肥皂和洗衣粉合用,25,12洗必泰（氯已定） （1）杀菌范围：对细菌繁殖体、真菌有杀灭作用，对结核杆菌和细菌芽胞仅有抑制作用。（2）消毒对象：为用途广泛的消毒剂，可用于皮肤、黏膜、创面的消毒。（3）使用方法：0.1%溶液用于皮肤消毒，0.05%溶液用于伤口冲洗和创面消毒，0.01%0.1%溶液用于冲洗阴道、膀胱。（4）注意事项：一般条件下不能杀死乙肝病毒、结核杆菌、细菌芽胞。不能与肥皂或洗衣粉混用，以免失效。,26,常见物品消毒方法,27,1粪便 （1）粪便加等量20%漂白粉澄清液，充分搅拌后加盖消毒2小时。（2）稀便1000ml加干漂白粉200克，充分搅拌后加盖消毒2小时，肝炎肠结核患者粪便消毒时间应延长为6小时。（3）粪便加2倍量的石灰乳（新配制），充分搅拌加盖2小时。2尿液 1000ml尿加漂白粉10g或20%澄清液50ml搅拌，加盖消毒2小时。,28,3痰、脓、呕吐物（1）100ml痰、脓、呕吐物加漂白粉20g或等量20%澄清液50ml搅拌，加盖2小时。（2）等量0.5 %的过氧乙酸搅拌，加盖消毒3060分钟。4 体温计（1）0.5 %过氧乙酸溶液浸泡15分钟后洗净备用（肝炎30分钟）。（2）75 %乙醇浸泡30分钟。（3）2%碘酊浸泡5分钟，70%乙醇脱碘。,29,5试管、玻片及其他玻璃用品（1）高压灭菌 1530分钟。（2）煮沸15分钟（3）0.5%过氧乙酸溶液浸泡2小时。 6. 空气（1）紫外线照射30分钟。（2）过氧乙酸熏蒸1g/m3 (肝炎3g/m3 )1小时，2%喷雾 8ml/ m3 30分钟。（3）甲醛熏蒸12.525ml/ m3 12小时。,30,家具、地面、墙壁0.2% 1%漂白粉澄清液（肝炎用3%）200ml/ m3喷洒、擦拭1小时。（2）3%5%煤酚皂溶液200ml/ m3喷洒、擦拭1小时。2%过氧乙酸喷雾30分钟。0.2 % 1 %熏蒸、喷洒、擦拭。甲醛熏蒸2550ml/ m3 12小时。,31,8皮肤(1) 洗必泰 0.2 %0.5 %浸泡洗手510分钟。(2) 新洁尔灭 0.1 %浸泡洗手510分钟。(3) 3 %5 %煤酚皂溶液浸泡洗手510分钟.。(4) 0.04 %过氧乙酸浸泡510分钟.。,32,9书籍、纸币(1) 甲醛熏蒸12.525ml/ m3 12小时。(2)环氧乙烷熏蒸0.40.7kg/m32448小时。 10生吃水果、蔬菜 1：5000高锰酸钾溶液浸泡15分钟。,33,四 化学消毒注意事项 1消毒剂的性质、浓度与作用时间 各种消毒剂的理化性质不同，对微生物的作用也有差异，应根据不同的微生物和消毒物品选择适当消毒剂。一种消毒剂要达到好的消毒效果，要有适当浓度。并且要有一定作用时间，时间越长，消毒效果越好。 2细菌的种类与数量 同一种消毒剂对不同微生物的杀菌效果不同，一般消毒剂对结核杆菌的作用比其他细菌繁殖体差，一些消毒剂不能杀灭芽胞。要根据不同消毒对象选择适当消毒剂。细菌数量越大，所需消毒时间越长。,34,3温度 温度升高可提高消毒效果。如2%戊二醛杀灭每毫升含104个炭疽杆菌的芽胞。20时需15分钟，40时为2分钟，56时为1分钟。4酸碱度 消毒剂受酸碱度的影响。如戊二醛本身呈中性，其水溶液呈弱酸性，不具有杀芽胞作用，加入碳酸氢钠使其达到PH7.58.5时则可杀灭芽胞。新洁尔灭的杀菌作用是PH愈低所需杀菌浓度愈高，在PH3时所需的杀菌浓度较PH9时要高10倍左右。,35,5有机物 环境中有机物的存在，能影响杀菌效果。病原菌常随排泄物、分泌物一起存在，这些物质可阻碍消毒剂与病原菌接触，并消耗药品，对消毒灭菌有影响。,36,五 消毒与灭菌效果检查（1）高压蒸气灭菌器内温度检查 检查高压蒸汽灭菌器内温度是判定灭菌是否彻底的方法，检查方法有在高压蒸汽灭菌器内将温度指示剂封闭小玻璃管内，当高压温度上升至指示剂熔点时，指示剂熔化(2) 消毒用标准菌株 对捆包物深部高压灭菌效果的测定用嗜热脂肪芽胞杆菌ASI.999株芽胞纸片为指示菌，将其夹在灭菌物中间，灭菌后取出55培养5天无菌生长为合格。,37,表4 高压蒸汽灭菌器常用的温度指示剂,38,2消毒剂消毒效果检查 消毒后必须进行效果检查，原则上凡消毒过的物品不应有特异性病原体存在，但由于某些病原体的生长条件较高，检出比较困难，阴性结果难以判定消毒效果，故目前仍采用某些条件致病菌作为间接指标。如肠道传染病的大肠杆菌为指标，呼吸道传染病的溶血性链球菌为指标等。还可以以消毒后的自然菌总数降低的百分率来评价，计算方法： 杀灭率（消毒前菌落数消毒后菌落数）/ 消毒前菌落数100% 消毒后自然菌总数下降以上为良好；减少70%以上为较好；减少60%以上为一般；减少60%以下为不合格。,39,检查方法：(1) 物品表面的检查：在消毒物