脑胶质瘤患者脑脊液中hoxa13、plexin―b2的定量分析及生物学意义研究

-精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 1 脑胶质瘤患者脑脊液中 HOXA13、PlexinB2 的定量分析及 生物学意义研究 摘要 目的 探讨同源基因 A- 13（homeotic genes-A13，HOXA13）和 神经丛素-B2（Plexin-B2）在脑胶质瘤 中的表达情况及生物学意义。 方法 收 集 2014 年 5 月2016 年 2 月间我院诊 断的脑胶质瘤患者 60 例，使用 qRT- PCR 技术分别检测实验组（脑胶质瘤患 者）和对照组（健康受试者）血清中 S100、HOXA13 和 Plexin-B2 的表达水 平，并分析 HOXA13 和 Plexin-B2 在不 同级别脑胶质瘤患者中的表达情况，分 析其与肿瘤恶性程度的关系。 结果 与 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 2 对照组对比，实验组的 HOXA13 和 Plexin-B2 在脑脊液及血浆中表达水平 显著升高血液中： HOXA13， （1.210.14） vs 0；Plexin- B2：（ 1.570.33） vs 0；脑脊液中： Plexin-B2：（4.871.13） vs 0；Plexin- B2：（ 5.880.21） vs 0，肿瘤体积越 大、分化程度越低，血液中 HOXA13 和 Plexin-B2 表达水平越高；脑脊液中 HOXA13 和 Plexin-B2 蛋白水平明显高 于血浆中。 结论 脑胶质瘤患者中 HOXA13 和 Plexin-B2 表达上调，且与 肿瘤恶性程度有显著关系，脑脊液中 HOXA13 和 Plexin-B2 表达显著升高， 可用作脑胶质瘤恶性程度的标志物。 中国论文网 /6/view-12962070.htm 关键词 脑胶质瘤；同源基因 A-13；神经丛素-B2；qRT-PCR 中图分类号 R739.41 文献标识 码 A 文章编号 1673-9701（2017）15- 0023-04 Abstract Objective To investigate -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 3 the expression and biological significance of gomeotic genes-A13（HOXA13） and neuronal-B2（Plexin-B2） in gliomas. Methods 60 patients diagnosed with glioma were diagnosed in our hospital from May 2014 to February 2016 were chosen. The serum expression levels of S100， HOXA13 and Plexin-B2 in the experimental group（glioma patients） and the control group（health volunteers） were measured by qRT-PCR. And the expression of HOXA13 and Plexin-B2 in different stages of glioma patients was analyzed， the relationship with the degree of tumor malignancy was analyzed. Results Compared with those of the control group， the expression levels of HOXA13 and Plexin-B2 in cerebrospinal fluid and plasma were significantly higherblood： HOXA，13， （1.210.14） vs 0； Plexin-B2， （1.570.33） vs 0； -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 4 cerebrospinal fluid： Plexin-B2， （4.871.13） vs 0； Plexin-B2， （5.880.21） vs 0. The larger the tumor volume， the lower the degree of differentiation and the higher the expression level of HOXA13 and Plexin- B2 in the blood. The levels of HOXA13 and Plexin-B2 protein in cerebrospinal fluid were significantly higher than those in plasma. Conclusion The expression of HOXA13 and Plexin-B2 in brain glioma patients is up-regulated and is significantly correlated with the degree of malignancy. The expression of HOXA13 and Plexin-B2 in cerebrospinal fluid is significantly increased and can be used as a marker of malignant degree of glioma. Key words Glioma； HOXA13； Plexin-B2； qRT-PCR X 神经胶质瘤是脑肿瘤中最常 见的恶性肿瘤，是严重危害人类健康的 恶性肿瘤之一。全国肿瘤防治办公室最 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 5 近发表的统计结果，脑肿瘤调整死亡率 列为第十位主要的恶性肿瘤，在大城市 的发病率男性女性均为第十位1，2， 因此寻找特征性生物标记物用来诊断脑 胶质瘤至关重要。本研究通过检测血浆 及脑脊液中 HOXA13 和 Plexin-B2 蛋白 的表达，探讨 HOXA13 和 Plexin-B2 在 脑胶质瘤的生物学意义，现报道如下。 1 材料和方法 1.1 一般资料 收集从 2014 年 5 月2016 年 2 月在我院神经外科接受治疗的脑胶质瘤 患者 60 例（实验组） ，30 例健康受试者 （对照组） ，所有患者均通过病理诊断 证实。入选标准：病理诊断明确，患者 知情同意。排除标准：合并其他严重并 发症影响实验过程；严重肝肾功能损害； 妊娠及哺乳期妇女。根据 2014 年中国 脑胶质瘤分子诊疗指南分级，其中脑胶 质瘤级 30 例，脑胶质瘤 级 30 例。患者一般情况比较，差异无 统计学意义（P0.05） ，具有可比性。 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 6 见表 1。已告知患者实验内容和实验目 的，并签署知情同意书。 1.2 总 RNA 提取 PCR 引物采用 Primer 5.2 设计 S100：Forward Primer：AAGGATGCCGTGGATAAAT TGC；Reverse Pri- mer：ACACGATGAACTCACTGAAGT C；HOXA13：For-ward Primer：CTCCCGCGCTAAGGAGTTC ；Reverse Pri- mer：CCGGCACCACTGGCATATC ；P lexin-B2：Forward Primer：ATGCCAACTCCCTCTCCTG ；Reverse Primer：CTAGGCGTATT TCCACGATGC。所有引物由上海生物 工程公司合成。收集不抗凝血液 35 mL，保存 4冰箱中，在恒温离心机中， 以 4、3500 r 离心 10 min，收集上层 血清，以 200 uL/管分管编号冻存 -80 冰箱中。总 RNA 提取试剂盒由百泰克 公司提供。RT-PCR 试剂盒为日本 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 7 Takara 公司生产。按照总 RNA 提取试 剂盒提取所有患者血浆及脑脊液中的总 RNA，根据 RT 盒的说明书操作，以 OLIGO 进行 cDNA 的合成。 1.3 qRT-PCR 基因表达用 SYBR GREEN I 荧光 定量 PCR 在 iQTM5 上进行监测，结果 用该仪器进行分析。结果重复 3 次。反 转录条件：95 30 s，95 5 s，60 30 s，40 个循环。 1.4 观察指标 实验组和对照组血浆及脑脊液中 S100、HOXA13 和 Plexin-B2 的表达差 异；不同级别胶质瘤 S100、HOXA13 和 Plexin-B2 蛋白的表达差异。若患者 血浆及脑脊液中分别能够检测出 S100、HOXA13 和 Plexin-B2 蛋白，则 记为该项蛋白表达阳性；反之，记为阴 性。 1.5 统计学方法 采用 SPSS13.0 统计学软件对实 验数据进行统计学分析，计量资料以 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 8 （xs）表示，采用 t 检验，计数资料采 用 2检验， P0.05 表示差异具有统计 学意义。 2 结果 2.1 两组受试者血浆及脑脊液中 S100、HOXA13 和 Plexin-B2 的表达情 况 健康受试者血浆中 S100 表达高 于脑胶质瘤患者（6.980.23） vs （1.010.19） ，t=1.908，P0.05，未检 测出 HOXA13 和 Plexin-B2。而脑胶质 瘤患者中 HOXA13 和 Plexin-B2 基因表 达水平增加，无论是血浆 HOXA13：（1.210.14） ；Plexin- B2：（ 1.570.33）还是脑脊液Plexin- B2：（ 4.871.13） ；Plexin- B2：（ 5.880.21）中均明显上调。脑 脊液中两者表达水平高于血浆中 （t=2.571，P0.01） 。见图 1。 2.2 两组 S100 蛋白的表达情况 在健康受试者血清及脑脊液中均 可以检测出 S100 蛋白。脑胶质瘤患者 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 9 随恶性程度升高，S100 蛋白阳性率患 者逐渐减少（2=1.773，P0.05 ） ，见表 2。 2.3 实验组中不同级别胶质瘤患 者 HOXA13 蛋白的表达情况 在健康受试者血清及脑脊液中不 表达 HOXA13 蛋白。脑胶质瘤患者表 达 HOXA13 蛋白，且随恶性程度升高， HOXA13 蛋白阳性率患者逐渐增加 （P0.05） 。见表 3。 2.4 实验组中不同级别胶质瘤患 者 Plexin-B2 蛋白的表达情况 在健康患者血清及脑脊液中 Plexin-B2 蛋白基本不表达。脑胶质瘤 患者 Plexin-B2 蛋白的表达显著升高， 且随恶性程度升高，Plexin-B2 蛋白阳 性率患者逐渐增加（2=3.112，P0.05 ） 。 见表 4。 3 讨论 脑神经胶质瘤是脑肿瘤中最常见 的恶性肿瘤，严重危害人类健康，发病 率仍然居高不下，因此做好脑胶质瘤的 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 10 早期发现、早期诊断至关重要。胶质瘤 是肿瘤形成的异质组这占大多数原发性 肿瘤中枢神经系统；尽管由辐射和化疗 后手术切除组合治疗取得进展，预后良 好的患者疗效仍然令人沮丧，与诊断后 的中位数存活约 15 个月3-4。因此， 有必要进行识别对胶质瘤阶段特异的新 型生物标志物。尽管近年来随着影像学 的发展，胶质瘤的诊断、治疗有了长足 的进展，但其总体疗效并无明显改善， 手术后 5 年生存率仍在 6%左右5-6。 S100 蛋白是一个酸性的 Ca2+结 合蛋白家族，参与细胞内和细胞外的因 子调节，钙离子对 S100 蛋白发挥生物 学效应至关重要7。S100 蛋白参与许 多细胞内外功能，如调节细胞内环境 Ca2+稳态、细胞增殖与凋亡、细胞侵袭、 蛋白磷酸化、细胞支架构成、自身免疫 和炎症8。研究表明 S100 蛋白与肿瘤 增殖呈现负相关关系9。本实验结果表 明，患者病变越严重，病理级别越高， S100 蛋白越少，提示 S100 蛋白的较少 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 11 或者沉默，S100 蛋白的表达可能为治 疗胶质瘤提供依据。 HOXA13 首先在果蝇中发现，具 有特征存在可识别的 183 个碱基对的 DNA 序列，其编码高度保守的 61 个氨 基酸肽称为同源结构域10-11。 HOXA13 位于 HOXA 的 5端位点。最 近的研究表明涉及 HOXA13 在癌发生 和促进肿瘤生长。有些报道显示12-13 异常 HOXA13 表达与肝细胞癌有关和 HOXA13 过表达提示肝癌患者易转移和 不良预后。实验数据显示 HOXA13 基 因与肿瘤恶性程度相关，恶性程度越高， 该基因表达越高。研究表明 HOX 家族 基因与肿瘤级别相关，且在胶质瘤中预 示着预后不良14 。HOXA13 抑制胶质 瘤细胞生长细胞系和异种移植模型15。 神经丛素 B2（Plexin-B2）是一 种跨膜受体，其参与响应于信号素的轴 突引导和细胞迁移，参与肿瘤细胞侵袭 和血管生成研究显示，胶质瘤患者的中 -精选财经经济类资料- -最新财经经济资料-感谢阅读- 12 位生存期不到 2 年，且预后不良，生活 质量差16-17 。