GB 15997-1995 白喉诊断标准及处理原则

5997感染特征为咽、喉、鼻部等处粘膜充血，肿胀并有灰白色假膜形成，以及细菌外毒素引起的全身中毒症状，严重者常合并心肌炎和末梢神经麻痹。由于白喉菌苗(百白破三联制剂)的广泛应用，典型白喉逐渐减少，不典型白喉或轻型白喉日渐增多，尤其成人白喉的发病应引起关注。本标准在制定过程中，参考了1989年卫生部制定的中华人民共和国传染病防治法及中华人民共和国传染病防治法实施办法，尽量结合我国流行病学，临床实践和各地情况，以便易于实施和应用。本标准的附录标准的附录B、附录标准由中华人民共和国卫生部提出。本标准起草单位:中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所、北京市地坛医院、首都儿科研究所。本标准主要起草人:张荣珍、杨立信、王树山。本标准由卫生部委托技术归口单位卫生部传染病防治监督管理办公室负责解释。中华人民共和国国家标准5997一1995白喉诊断标准及处理原则of of 标准适用干齐级、各i 生、保健机构和人员对白喉病人的诊断、报告和处理。2诊断原则应根据流行病学资料、临床表现及咽拭子细菌学涂片结果做出临床诊断;确诊则需白喉杆菌培养阳且证明能产生毒素或检出白喉特异性抗体。确诊白喉病人有直接或间接接触史。痛、林塞、声音嘶哑、犬吠样咳嗽。鼻、咽、喉部有不易剥落的灰白色假膜，剥时易出血3. 有异染颗粒。3病人双份血清特异性抗体四倍以上增长，3确诊病例疑似病例加3. 3. 1,3. 3. 3任何一条者。4防治原则4门对病人的隔离发现疑似或诊断病例，应立即隔离，失后14 d,4. 2终末消毒病人隔离后对病家以及病愈出院后4. 3治疗原则国家技术监督局1995一12门5批准隔离期至症状消失后，咽拭子两次细菌培养阴性为止，或症状消，对其病室均应进行终末消毒。可用含氯消毒剂。1996一07一01实施次足量给予白喉抗毒素。抗生素首选青霉素杀灭病原菌，减少毒素的分泌。别是心肌炎的防治。采取应急接种白喉类毒素。喉毒素皮肤试验)阳性后肌注白喉抗毒素。检疫7d。对细菌培养阳性的带菌者，应给予抗生素治疗。白喉类毒素应急接种，对控制流行效果十分显著。保证接种质量，就能控制白喉的发生。5997一1995附录A(标准的附录)白喉病原学诊断方法油盐水保存液从疑似患者咽喉假膜边缘蘸取标本或同时采取鼻咽拭子，放入灭菌试管内同时送检。应采集鼻咽部或扁桃体粘膜上的分泌物送检。1菌型革兰氏阳性细长杆菌呈棒状，排列不规则，常呈人字形、栅栏状。庞氏染色可见异染颗粒。形光滑菌落，有溶血环在亚谛酸钾血平板上，菌落呈中心黑色或灰黑色，边缘带灰色。在尿素卵黄双糖培养基上，经370C 12喉杆菌发酵葡萄糖、乳糖、麦芽糖、果糖，产酸不产气，不发酵乳糖、甘露醇，一般不分解蔗糖。不产生叫噪，能还原硝酸盐，酶阳性，氧化酶阴性，不液化明胶，不分解尿素。重型白喉杆菌能分解淀粉、搪原和糊精，迟缓分解蔗糖。依据形态、培养、生化特性可将白喉杆菌分为轻、中、重三型。致病因素为外毒素。抗原性强，毒性剧烈。白喉杆菌不是所有菌株都有毒力，只有那些携带力试验可侧定白喉杆菌产生外毒素的能力，常用的方法有两种。1艾立克(平板毒力试验将却至50左右，加入正常无菌(兔或牛)血清2 匀后用无菌镊子取预先制好的白喉抗毒素(每毫升含5 00000u)，干燥滤纸条贴于平板中央表面，置375 h，烘于表而水分，时间不宜过长，以免影响结果。将试验菌株划线接种于平板上成一直线，使其与抗毒素滤纸成直角相交。同一平板可同时接种4时要用已知有毒菌株作阳性对照。于37 h，如发育良好即可观察结果。阳性者于72 37 18 h，加肉汤1 下菌苔，使成悬液，吸取此菌液。.5 入3. 5 匀后即可应用。同时要用已知有毒菌株作对照。选体重250 00u，作为对照动物;另一只不注射抗毒素，作为试验动物。接种前先将动物腹部向上，固定在架上。以温水洗净腹部后剃毛。剃毛后再用无菌生理盐水擦洗一次待干，用1 确注射0. 1 同时接种5997一19956射后4h，给试验动物注射抗毒素4 000u，以免因毒株毒力太强而致死。注射后经24,48,72 h，各观察皮内反应一次。对照动物无论接种有毒或无毒菌株，均应无局部反应;试验动物在注射有毒株的部位，于24 8 2 现灰黑色坏死斑，无毒的菌株则无病变。动物毒力试验也可应用家兔及小鸡作试验动物。附录B(提示的附录)白喉毒紊试验(锡克氏试验)白喉毒素试验可用于测定机体对白喉的易感性及判断白喉预防接种后是否产生免疫力。处，左臂皮内注射白喉毒素液。1 臂皮内注射对照液。. 1 2反应的观察与判断阴性反应:两臂注射处无任何反应为阴性反应。两臂注射处稍有红色硬块，颜色较浅，界线不清，红色消退快，不留痕迹，在2436 872 假阳性。阴性和假阳性反应表示对白喉有免疫力，但感染量大时仍可得病。阳性反应:注射对照液处呈阳性反应或假阴性反应(48而注射试验液处呈现红色团块，界线分明，直径达1 常于注射后24296 留一个褐色斑，数周至数月后可以退净。阳性反应表示对白喉无免疫力。附录C(提示的附录)血清学诊断方法经过一定处理后，使蛋白质抗原吸附于红血球表面，此种血球称为致敏血球。然后用致敏血球来测定相应的微量抗体。当特异抗体存在时，发生抗原抗体结合，血球就出现凝集，为阳性反应。喉类毒素含量为20f/以测定致敏血球效价，用前须进行56C， 30 球保存液保存)。0. 15 0. 15 a,12HO(M. W= 53. 72 5997一1995蒸馏水至1 000 0. 15 . O,O,(M. W= 00 0. 15 . W= 8. 77 00 . B. S)0. 15 286 15 _ O, 90 15 376 菌后备用。. B. S)0. 15 . 100 15 210 15 . 310 . B. S)0. 15 97 15 O, 3 菌后备用。2磷酸盆缓冲液(P. B. S) 100 15 900 l. 2. 4. 6 1%戊二醛溶液25写戊二醛溶液4 溶液鞭酸19蒸馏水加至100 前以生理盐水稀释至1 e 20 05 89 0. 42 用10%拘椽酸校正至15，于0. 7 人血球保存液中(血球与保存液比例为1:工)，摇匀放冷库(2)48 生理盐水洗涤血球三次，每次离心(2 00000 r/0上清得压积5997一1995血球。入24份冷却的1%戊二醛溶液中，放2，固定时间大于等于30 5-6 心(2 000 r/0 上清，用生理盐水洗五次，再用蒸馏水洗五次，最后用生理盐水配成10%血球悬液，加入1:10 000硫柳汞防腐，放2库备用。化血球悬液，白类用2磷酸盐缓冲液(P. B. S)进行翰酸处理。a)球一份加1:10 000的裸酸一份，混匀后放45或37水浴30 5-6 然后用2磷酸盐缓冲液(P. B. S)洗涤三次(2 00000 r/-6 最后用4磷酸盐缓冲液(P. B. S)化血球悬液。b)致敏2. 5 %裸化血球一份加精制白喉类毒素一份(25 Lf/4磷酸盐缓冲液(P. B. S)三份置45或37水浴30 经常摇动)，离心弃上清，用。血清生理盐水配成2. 5%血球悬液。5 %揉化血球一份加4份4磷酸盐缓冲液(P. B. S)置45或37水浴30 离心弃上清，用。照血球悬液。感度的测定将标准白喉抗毒素用。血清生理盐水先行稀释使每毫升含1个单位，然后再以倍比法进行一系列稀释，自1:2 096，每个稀释度取一滴(入血凝板孔中，再加入致敏血球一滴(0. 025 摇匀放37C 2 h，取出判读结果或放冰箱，次晨判读结果，以“+”为凝集试验终点。白喉类毒素致敏血球的敏感度不能低于。06 IU/时作两种对照:a)不同稀释度抗血清加概化血球，以检查抗血清有无非特异性凝集;b) 0. 5%兔血清生理盐水加致敏血球以检查血球有否自凝作用。以上两种对照皆为阴性试验才能成立，否则应重试。56C 30 b)醛化血球吸收。吸收方法:待检血清1份加50%醛化血球2份，放37h，离心沉淀，吸取上清即为1:2稀释的血清样品。5%兔血清生理盐水一滴(0. 025 再将待检血清用微量滴管滴入第一孔中(0. 025 使与0. 5%兔血清生理盐水混合，注意不要发生气泡，混匀血清后，每孔均取0. 025 入到第二孔中。混匀后自第二孔中吸出。此类推，最后一孔取出0. 025 掉。或用。025 微量滴管吸取。. 500致敏血球加到每个孔中，加时滴管勿碰到孔壁，以免沾有抗血清。然后摇匀，放370C 2 210“+”为凝集试验终点。每份待检血清可做三个稀释度抗血清加鞭酸血球的对照，稀释方法如前所述(即1:2,1:4,1:8),以排除血清中非特异凝集。检血清终点稀释度如标准白喉抗毒素(10 IU/点稀释度为1:2 048，含有。 IU/待检血清终点稀释度为1:8，于是其单位5997一1995为0. 038 IU/集的红血球均匀地铺在孔底形成一薄层为“十十十十”;b)凝集的红血球基本同a)，只是在此薄层的底部有一很弱红圈为“+”;c)凝集的红血球在孔底形成的薄层，同时中间可见一松散的红圈为“+”;d)”;e)血球在孔底形成紧密的圆圈成圆点为“一”。影响血凝试验的准确性与敏感度因素很多，如用具的清洁，材料的标准化，操作的细致等。用酶标记的抗人原一抗体一酶标记抗抗体)，1抗原精制白喉类毒素1 110 Lf/2. 2. 3载体1 2. 2. 4底物令传苯二胺。2. 5参考血清多份间接血凝法阳性高效价血清混合为阳性参考血清，多份阴性血清混合为阴性参考血清。2. 2. 7测定仪721型分光光度计。3方法及步骤定本试验包被抗原浓度为20 Kg/检血清最适起始稀释度为1，40,3. 2参考血清标准曲线绘制阳性及阴性参考血清均从1:40开始至10 240二倍法稀释，反应结果用721型分光光度计测光密度=492 试验取三次测定结果的均值，以血清稀释度为横坐标，相对应的曲线;然后用相关回归法确定性血清最高6，最低为。阳性和阴性血清呈明显差别的界限3处，故确定为阳性，其所对应的血清稀释度为1:2560，即为一个单位。每份被检血清稀释度为1:40，效价从标准曲线查出。13经测算，两系数的原包被每管加已稀释好的抗原1. 0 4后用2磷酸盐缓冲液(P. B. S)一吐温20洗涤三，两次之间静止3 室温2h，再洗涤三次，方法同前次:8 000)1.0 温2 h,洗涤同前。3. 6加底物液(1.0 温下30 2 硫酸0. 015 终止反应立即测应用双抗体法，以纯化的白喉类毒素吸附到固相载体上，加入特异性抗血清，载体上形成抗原一抗体复合物。然后再加入标有同位素的第二抗体，就形成抗原一抗体一抗抗体复合物，通过测定标记的第二抗体的放射性就可确定相应抗体的含量。1血清标本来源人群白喉抗体水平检测对象，多为采集儿童血清标本。其浓度。准品)纯化)作为第二抗体，参照格林伍德(亨特(高比度标化法进行放射碘化标化获得的6缓冲液及填充液a)缓冲液:温20的0. 0l 4磷酸缓冲盐水。b)稀