生物化学实验预习及实验报告范例.doc

目 录预习报告示范2实验 还原糖和总糖的测定2实验二：(Fehling试剂)直接(热)滴定定糖法2实验报告示范15实验 还原糖和总糖的测定15实验二：(Fehling试剂)直接(热)滴定定糖法15一、实验原理15二、实验用品15三、实验操作步骤16四、实验记录及计算结果17五、结果与讨论1717预习报告示范实验 还原糖和总糖的测定实验二：(Fehling试剂)直接(热)滴定定糖法一、实验目的和要求1初步掌握费林试剂热滴定定糖法的原理和方法。2正确掌握滴定管的使用方法和热滴定终点的判断方法。二、实验原理思 考(一)基本原理还原糖是指含有自由醛基(如葡萄糖)或酮基(如果糖)的单糖和某些二糖(如乳糖、麦芽糖)。在碱性溶液中，还原糖能将金属离子(Cu2+、Hg2+、Ag+等)还原，而还原糖本身则被氧化成各种羟酸类化合物。该特性常用于还原糖的定性和定量测定。(二)本实验反应原理1、Fehling试剂（又称作酒石酸铜溶液）介绍：A液：由硫酸铜和次甲基蓝组成1、硫酸铜的作用是什么？1、Cu2+用于将来被还原成Cu+2、次甲基蓝的作用是什么？2、氧化还原指示剂B液：由氢氧化钠、酒石酸钾钠和亚铁氰化钾组成3、氢氧化钠的作用是什么？3、一、生成Cu(OH)2，二、创造碱性反应环境4、酒石酸钾钠的作用是什么？4、用以生成可溶性络合物酒石酸钠铜5、亚铁氰化钾的作用是什么？5、生成可溶性复盐，以便于观察滴定终点用前将A、B两液等体积混合时，依次反应：(1) 2NaOH + CuSO4 = Cu(OH)2 （天蓝色）+ Na2SO4(2) 在碱性溶液中：酒石酸钠铜为可溶性络合物。2、酒石酸铜与还原糖热滴定时的反应：(1) 红色氧化亚铜沉淀生成：在加热条件下，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还原糖还原，产生红色氧化亚铜沉淀，还原糖则被氧化和降解(2) 反应生成的氧化亚铜沉淀与斐林试剂中的亚铁氰化钾（黄血盐）反应生成可溶性复盐：6、为什么要生成可溶性复盐？6、便于观察滴定终点(3) 亚甲基蓝为氧化-还原指示剂指示滴定终点7、为什么亚甲基蓝可为滴定终点指示剂？7、因为亚甲基蓝氧化能力比Cu2+弱，因此Cu2+会先被还原。当Cu2+被全部还原后，稍过量的还原糖可使蓝色的氧化型的亚甲基蓝还原为无色的还原型的亚甲基蓝，即指示到达滴定终点。(4) 根据样液消耗量即可计算出还原糖的含量。三、实验用品思考答案用品量实际用量(一)、实验材料：红薯粉（可换淀粉）班级：16g(二)、实验试剂：(1) Fehling试剂A液:分别称取15g CuSO45H2O和 0.05g 亚甲基蓝于烧杯中；加50100mL蒸馏水将它们溶解；转移到1000mL容量瓶中；定容到1000mL。8、为什么要分开配制A、B液？什么时候混合较佳？用品：电子天平、100/200mL烧杯1、玻棒、1000mL容量瓶、蒸馏水计算：533n，适当放大（一般多配1/3左右）配1000mLCuSO45H2O= (g)亚甲基蓝= (g)(2) Fehling试剂B液:先称取50g 酒石酸钾钠和+ 75g NaOH，溶于水；再称取 4g亚铁氰化钾，溶解分别转移到1000mL容量瓶中；定容到1000mL。9、为什么贮存于具橡皮塞玻璃瓶中？用品：100/200mL烧杯2、1000mL容量瓶配1000mL酒石酸钾钠= (g)NaOH = (g)亚铁氰化钾= (g)(3) 0.1%葡萄糖标准溶液：G在98105下干燥至恒重为无水葡萄糖；准确称取1.000g无水葡萄糖，用少量蒸馏水溶解；转移到1000mL容量瓶中，加水约置750ml往容量瓶中加入5-8mL浓HCl；定容1000ml。10、G为什么在98105下干燥？葡萄糖中的水分是吸湿水还是结晶水？8、因为葡萄糖中的水分是吸湿水，在98105下可以使之汽化除去，并且该温度不致使葡萄糖碳化。称量瓶或表面皿或培养皿1套烘箱，10mL移液管G= (g)浓盐酸= （mL） 标准液葡萄糖浓度C= g/mL11、为什么加5 - 8mL浓HCl？可以防止微生物生长。(4)6mol/L盐酸溶液*：配100mL6mol/L盐酸：吸取258.00mL 36%的发烟盐酸，定容到100mL。12、这样配出的盐酸是标准浓度吗？可用量筒量取吗？200mL容量瓶，10mL移液管配200mL(5) I-IK溶液分别称取5g I和10g IK于烧杯中，溶解，定容至100ml。可用容量瓶取蒸馏水，烧杯中溶解后即可分装。为什么？因为是定性试剂。25/50ml滴瓶6配200mLI= (g)IK= (g)(6) 10% NaOH称取50g NaOH，溶于500ml蒸馏水中。冷却至室温。13、盛于什么容器中？用滴瓶分装，实验完成后该如何处理滴瓶？塑料试剂瓶500ml1，50ml滴瓶4配500mLNaOH= (g)(7) 0.1%酚酞指示剂称取0.1g酚酞溶于100ml蒸馏水中。25/50ml滴瓶4配100mL酚酞= (g)(8) 蒸馏水。14、根据反应原理，指出这些试剂中哪些是定量试剂，哪些是定性试剂。* 36%浓盐酸摩尔浓度 = 1.178936% / 36.5 1000mL/L =11.6275 mol/L浓盐酸的36%-38%是指质量浓度，密度是1.19g/ml。摩尔浓度=1190g 36.5%（假设的盐酸浓度） / 36.5（HCL的分子量） 1000mL/L =11.9mol/L.(三)、实验仪器及设备名称规格台套数使用电子天平1公用烘箱1公用电热恒温水浴锅2公用调温电炉n/2每两组共用称量瓶/培养皿1套公用100ml烧杯/150ml锥形瓶5公用250mL锥形瓶2+11n*2个公用*每组至少需6个才能轮换使用100ml容量瓶2+2n2个公用1000ml容量瓶3公用200ml容量瓶2公用5ml移液管4公用10ml移液管n+33支公用，每组1支移液管架1公用100mL量筒1公用50/100ml漏斗n试剂瓶若干500mL塑料试剂瓶1公用25/50/100mL棕色滴瓶6公用25/50/100mL滴瓶4+4公用吸耳球n滴定管n/2+ 2nn/2：每两组共用玻璃棒n或 2n白瓷板n定量滤纸2n先每组发一张吸水纸若干玻璃珠若干四、实验程序步骤注意事项及问题答案仪器、药品及用量实际用量班级用量(n=共16组)（一）、样品中还原糖的提取：（本步骤不做，仅供了解、参考与思考）从实验目的和实验材料角度考虑，老师为什么取消这一步骤的实验？1、准确称取红薯粉2g于100-200ml烧杯/锥形瓶中；电子天平、100-200ml烧杯/锥形瓶1红薯粉样品重量= (g)红薯粉2n=2n(g)电子天平1台250ml锥形瓶1n2、加入85%乙醇5060ml，混匀；50/100ml量筒1，玻棒150/100ml量筒4个，公用玻棒1n=n支3、50恒温水浴保温30min，不时搅拌；提前加热到50。恒温水浴锅2台4、过滤；漏斗1，滤纸1，100/200ml烧杯/锥形瓶1漏斗1n=n个定量滤纸1n=n张100/200ml烧杯/锥形瓶1n=n个5、滤渣再用85%乙醇提取二次，合并提取液；三次提取液总量不能超过100ml。为什么用乙醇提取？相似相溶6、定容至100ml。100ml容量瓶1100ml容量瓶1n=n个（二）、样品中总糖的水解及提取：1、称取红薯粉1g（换淀粉，称0.5g）于250ml锥形瓶中如果样品的测定从第一步开始开始平行处理3个样，直到测定，我们做的是重复还是平行？重复与平行是同一个概念吗？电子天平、250ml锥形瓶1样品重量m= g红薯粉1gn = n g电子天平1台（公用）250ml锥形瓶1n=n个样品真需要象指导中要求的一样精确称取1.000g吗？为什么？2、加入6mol/L HCl 10ml，蒸馏水15ml6mol/L HCl的作用是什么？为什么不用发烟盐酸？10ml移液管2支（公用）、玻棒12支、移液管架1个（公用）10ml移液管2支（公用）移液管架1个（公用）玻棒1n=n支6mol/L HCl 10mln = 10n mL3、沸水浴中加热30min沸水浴锅需提前准备好。恒温水浴锅2台（公用）4、检验水解程度：取12滴水解液置于白瓷板上，加1滴I-IK溶液检验检验样品以1滴为宜。白瓷板1滴管125/50/100mL棕色滴瓶6个（公用）白瓷板1n=n个滴管1n=n支25/50/100mL棕色滴瓶6个（公用）检验样品以1滴为宜。为什么？随着水解进程，检验依次会出现什么现象？为什么？5、水解毕，冷却至室温6、中和：加入1滴酚酞指示剂，以10%的NaOH中和至溶液成微红色为什么要中和？是进行滴定中和吗？25/50/100mL滴瓶4个（公用）100mL滴瓶8个（两组共用）25/50/100mL滴瓶4个（公用）100mL滴瓶8个（两组共用）酚酞指示剂100mL10%NaOH 500mL7、将样品水解溶液定容至100ml100ml容量瓶1100ml容量瓶1n=n个8、将7中的溶液过滤漏斗1，定量滤纸1，100/ 200/250ml烧杯/锥形瓶1漏斗1n=n个定量滤纸2n=2n张100/200/250ml烧杯/锥形瓶1n=n个9、稀释：取滤液10ml，定容至100ml， 10ml移液管1，100ml容量瓶110ml移液管1n=n支100ml容量瓶1n=n个10、结果：得到稀释1000倍的总糖水解液（三）、碱性酒石酸铜溶液的标定1、准确吸取碱性酒石酸铜甲液和乙液各5ml，置于250ml锥形瓶中，加蒸馏水10ml，加3粒玻璃珠玻璃珠的作用是什么？5ml移液管2，250ml锥形瓶13，(10ml移液管1)，玻璃珠5ml移液管4（公用）碱性酒石酸铜甲液和乙液各5ml3n=15n mL250ml锥形瓶3n=3n个玻璃珠，若干2、从滴定管中滴加约9ml葡萄糖标准溶液于锥形瓶中为什么只加约9ml？需要做平行吗？为什么？25/50ml滴定管125/50ml滴定管8支（两组共用）3、加热使其在2min中内沸腾，准确沸腾30s为保证尽快沸腾，需先将电炉预热。可调电炉可调电炉8个（两组共用）为什么需使沸腾？1、加快还原糖与Cu2+的反应速度；2、防止空气进入，保证还原型亚甲基蓝不被再氧化成氧化型；3、使得Cu2O不被氧化成CuO。为什么要保证溶液在2min内沸腾？且准确沸腾30s？保持蒸发量基本一致，使碱度不变，减少误差，避免耗糖量增加。如何简便知道你的测试结果的准确性？做平行试验，看样液消耗量相差量，不应该超过0.1ml。4、趁热以1滴G标准液/2s速度滴定，至蓝色褪去为终点滴定时不能随意摇动锥形瓶，更不能从热源上取下滴定。标定酒石酸铜消耗的葡萄糖标准液体积：V1= mL，V2= mL，V3= mL= mL为什么不能摇动和从热源上取下锥形瓶？(四)、样品中糖的定量测定1、样品溶液预测定为什么要进行预测定？以确定还原糖浓度是否在0.1%左右，过大则稀释。浓度过大则增加样品量，增加滴定时间，造成更大误差。(1)、准确吸取碱性酒石酸铜甲液和乙液各5ml，置于250ml锥形瓶中，加蒸馏水10ml，加3粒玻璃珠玻璃器具前面用过，清洗烘干再用。碱性酒石酸铜甲液和乙液各5ml3n=15n mL(2)、加热使其在2min中内沸腾，准确沸腾30s(3)、趁热以先快后慢的速度从滴定管中滴加样品溶液，待溶液蓝色变浅时以1滴样液/2s速度滴定，至蓝色褪去为终点。样液消耗体积：V4= mL，V5= mL，V6= mL= mL 25/50ml滴定管n支2、样品溶液测定(1) 准确吸取碱性酒石酸铜甲液和乙液各5ml，置于250ml锥形瓶中，加蒸馏水10ml，加3粒玻璃珠，玻璃器具前面用过，清洗烘干再用。碱性酒石酸铜甲液和乙液各5ml3n=15n mL(2) 加入比预测时样品溶液消耗总体积少1ml的样液；为什么？以保证在1分钟内完成滴定工作，和标准曲线工作条件尽可能一致，减少误差，提高准确度。(3) 加热使其在2min中内沸腾，准确沸腾30s； (4) 趁热以1滴样液/2s速度滴定，至蓝色褪去为终点。样液消耗体积：V7= mL，V8= mL，V9= mL= mL五、实验结果及计算碱性酒石酸铜的标定预测定总糖样品测定(%)总糖耗糖液体积(ml)相当葡糖含量(mg)平均值(mg)计算公式：（1） 碱性酒石酸铜的标定：F = C F10ml碱性酒石酸铜溶液相当于G的量，mgC标准G溶液的浓度，mg/ml标定时消耗标准G溶液的体积，mL（2） 总糖含量：m样品重量，g总糖样品溶液的总体积1000mg换算成g的系数实验报告示范实验 还原糖和总糖的测定实验二：(Fehling试剂)直接(热)滴定定糖法一、实验原理还原糖是指含有自由醛基(如葡萄糖)或酮基(如果糖)的单糖和某些二糖(如乳糖、麦芽糖)。在碱性溶液中，还原糖能将金属离子(Cu2+、Hg2+、Ag+等)还原，而还原糖本身则被氧化成各种羟酸类化合物。该特性常用于还原糖的定性和定量测定。菲林试剂是将碱性酒石酸铜甲液和乙液等体积混合后，生成可溶性的酒石酸钾钠铜；在加热条件下，还原糖与酒石酸钾钠铜反应，酒石酸钾钠铜被还原糖还原，产生红色氧化亚铜沉淀，还原糖则被氧化和降解。氧化-还原指示剂亚甲基蓝氧化能力比二价铜弱，在溶液中二价铜离子全部被还原后，稍过量的还原糖可使蓝色的氧化型的亚甲基蓝还原为无色的还原型的亚甲基蓝，即达滴定终点。根据样液消耗量可计算出还原糖的含量。二、实验用品（一）、器材（需要给出数量）电热恒温水浴锅、调温电炉、烘箱100ml烧杯、250mL锥形瓶、100ml容量瓶、1000ml容量瓶、5ml移液管、10ml移液管、吸管、50/100ml漏斗、吸耳球、滴定管、玻璃棒、白瓷板、定量滤纸、玻璃珠若干（二）、试剂（1） 碱性酒石酸铜甲液：15g CuSO45H2O + 0.05g 亚甲基蓝 + H2O，溶解；定容1000ml。（2） 碱性酒石酸铜乙液：50g 酒石酸钾钠 + 75g NaOH，溶于水；+ 4g亚铁氰化钾，溶解；定容1000ml。（3） 0.1%葡萄糖标准溶液：G在98100下干燥至恒重；准确称取1.000g无水葡萄糖，蒸馏水溶解；加水约750ml时，加入5mlHCl；定容1000ml。（4） I-IK溶液：5g I + 10g IK，溶于100ml蒸馏水中。（5） 6mol/L HCl：258.00ml浓HCl（36%），稀释至500ml。（6） 10%NaOH：50g NaOH溶于500ml蒸馏水中。（7） 0.1%酚酞指示剂：0.1g酚酞溶于100ml蒸馏水中。（三）、材料红薯粉（换淀粉，酸水解）三、实验操作步骤（一）、样品中总糖的水解及提取：准确称取红薯粉（换淀粉0.5g）1g于250ml锥形瓶中；