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层粘蛋白及受体在宫颈癌中的表达及意义 作者：刘晨辛晓燕张瑜张恩娣 【关键词】 宫颈肿瘤 关键词: 层粘连蛋白;受体，层粘连蛋白;宫颈肿瘤;肿瘤浸润;肿瘤转移 摘 要:目的 探讨层粘蛋白及受体在人宫颈癌中表达及其临床意义. 方法 应用SABC免疫组化法检测20例正常宫颈组织，26例宫颈原位癌，21例宫颈浸润癌-级，18例宫颈浸润癌级组织中层粘蛋白及受体的表达. 结果 层粘蛋白在正常宫颈组织及原位癌中强表达，在宫颈浸润癌中间断或缺失，二者有显著性差异（P<0.05）.层粘蛋白受体在正常宫颈组织及原位癌中阴性表达，在宫颈浸润癌中呈强阳性表达.有显著性差异（P<0.05）. 结论 层粘蛋白及受体在人宫颈浸润癌组织中有显著性改变，可为宫颈癌病理诊断及预后判断的标志. Keywords:laminin;receptors，laminin;cervix neoplasms;neoplasm invasiveness;neoplasm metastasis Abstract:AIM To investigate the expressions and singnifi-cance of laminin and laminin-receptors in human cervical carcinoma.METHODS Tissues from normal cervices，26cases with carcinoma in situ，21cases with microinvasive cancer and18cases with frankly invasive cancer were observed by SABC immunohistochemical method for expressions of laminin and laminin-receptors.RESULTS The positive staining for laminin was observed in normal cervical tissuesand carcinoma in situ，but was weak or abscent in cervical in-vasive carcinoma tissues.（P<0.05）.The staining for laminin-receptors of normal cervical tissues and carcinoma in situ was negative，but was positive in cervical invasive carci-noma tissues（P<0.05）.CONCLUSION There were posi-tive changes in laminin and laminin-receptors in cervical inva-sive carcinoma tissues.These changes may be very useful in the pathologic diagnosis and prognosis of human cervical car-cinomas. 0 引言 层粘蛋白（LN）是细胞外基质中大分子非胶原糖蛋白，是基底膜的主要结构蛋白.在细胞粘附、增生、移行中起重要作用1 .近年，LN在肿瘤浸润转移中的作用得到普遍的研究肯定.LN是与其受体（LNR）结合共同发挥作用的.我们就LN及LNR在宫颈癌中的表达及意义进行了研究探讨. 1 对象和方法 1.1 对象 收集1998-01/1999-12陕西省妇幼保健院宫颈鳞状细胞癌及宫颈腺癌病理蜡块标本85例，患者术前均未经过放、化疗.依据1994年FIGO宫颈癌分级标准进行组织病理分级.正常宫颈组织20例，宫颈原位癌26例，宫颈浸润癌-级21例，宫颈浸润癌级18例. 1.2 方法 蜡块标本作4m连续切片，常规脱蜡至水，3%H2 O2 灭活内源性酶，复合消化液消化酶，正常山羊血清封闭.滴加一抗（Anti-laminin美国Sigma;Laminin Receptor Ab-1.NeoMarkers公司）372h，0.01mmol・L-1 PBS液洗涤，加入二抗，用SABC免疫组化试剂盒（武汉博士德公司），DAB显色，苏木素轻染，脱水、透明、封片. 1.3 结果判定 以组织基底膜，癌细胞质、胞膜出现明确棕黄色颗粒，其染色强度高于背景非特异性染色为阳性.强度分为:阴性（-）为完全无表达或阳性小于5%;阳性（+）为5%50%阳性物质表达;强阳性（）为阳性物质表达大于50%.已知阳性片作阳性对照，PBS代替一抗作阴性对照. 统计学处理:采用2 检验法及精确概率法.数据应用Spass for windows8.0软件包处理. 2 结果 2.1 LN的表达 LN在正常宫颈组织及原位癌基底膜呈连续强表达，在宫颈浸润癌-级中呈间断阳性表达，在宫颈浸润癌级组织中则缺失阴性表达（Fig13）. 2.2 LNR的表达 LNR在正常宫颈组织及原位癌中不显色，在宫颈浸润癌-级中，癌细胞质、胞膜及毛细血管中有棕黄色颗粒阳性表达，在宫颈浸润癌级组织中癌细胞质、胞膜及毛细血管呈强阳性表达（Fig46）. 图1 图6 略 2.3 统计分析结果 LN及LNR在宫颈组织各病理分级中的表达有显著性差异（Tab1，2）.LN及LNR蛋白受体之间表达具有明显相关性（Tab3）. 3 讨论 肿瘤的发生、发展是多因素的结果，有细胞结构、细胞间因素以及细胞外基质因素.而在肿瘤浸润转移中细胞外基质起着重要作用2 .LN是一种大分子非胶原糖蛋白，由、3链组成，各链有不同的结构功能活性位点，依据细胞、组织特定性有10种同分异构体.LN是细胞外基质主要结构蛋白，在正常组织中维持组织结构和细胞形态;促进细胞增殖、分化、维持细胞生命营养;具有很强的介导细胞粘附和受体结合的特性;而在肿瘤组织中促使肿瘤细胞增殖、分化.LNR是位于细胞膜上的粘附分子.有3类:inte-grin，galectin和CD443-5 .LNR与LN结合发挥其功能，促进肿瘤细胞粘附、浸润转移;特定位点的LN与LNR有其特定的作用;LNR介导细胞与基膜及细胞间的信号传导作用.在正常组织中LN广泛存在各组织细胞基底膜，基底膜完整，LN连续表达.在未浸润性肿瘤组织中，LN表达增强，在肝、肺、乳腺癌及妇科肿瘤中均显著增强6-8 .体外试验也显示LN优先于肿瘤细胞粘附，使肿瘤细胞增生9 .LNR表达则逐渐增强;而在浸润性肿瘤中，肿瘤细胞的LNR与基底膜LN结合，促使型胶原蛋白酶分解，破坏基底膜结构10，11 ，基底膜缺失、断裂，肿瘤得以浸润转移.这时LN减少缺失，LNR则显著增加，其与肿瘤的进展、预后密切相关. 表1 LN在宫颈组织中的表达略 表2 LNR在宫颈组织中的表达略 表3 LN与LNR表达的相关性略 本研究显示，LN在正常宫颈及原位癌基底膜组织中连续线状表达，在浸润癌-级中间断、不完整阳性表达，而在宫颈浸润癌级组织中则缺失无表达，有显著性差异.LNR在正常宫颈组织及原位癌中呈阴性表达，而在宫颈浸润癌-级中阳性表达，在宫颈浸润癌级组织中呈强阳性表达，肿瘤微血管基膜也明显阳性表达，均有显著性差异.而LN与LNR在宫颈组织病理分级中表达具有明显相关性.充分说明LN在宫颈组织中稳定、粘附细胞，促进细胞增殖、分化，LNR在肿瘤组织中促进肿瘤细胞的增殖、粘附，浸润转移12-14 .LN受体的增多与肿瘤浸润转移程度及肿瘤预后情况密切相关15 .而LNR的mAb可抑制体外肺癌细胞对LN粘附，并阻断体内浸润16 .充分证明了LN及LNR在肿瘤组织浸润转移中的重要作用. LN及LNR在宫颈组织中的显著性表达，进一步证实了LN及LNR在正常组织及肿瘤组织浸润转移中的重要作用.可为宫颈癌浸润转移病理发展的机制之一，并可为临床探讨单克隆抗体治疗宫颈癌阻断其浸润的新方法.而LN及LNR亦可作为宫颈癌病理诊断分级及预后判断的标志. 参考文献: 1Miner JH，Patton BL，Lenti SI.The laminin alpha chains:Ex-pression，developmental transitions and chromosomal locations of alpha1-5J.Cell Biol，1997;137:685-701. 2Shi XL.The new direction of organism study-extracellular ma-trix and cell adhesion factor J.ACTA Anatomica Sinica，1999;30（2）:189-191. 3Jin BQ.Cellular and molecular immunology M.Shijie Tushu Chuban she（World Books Publishing House），1995:33-66. 4Carrerias F.Migration properties of the human ovarin adenocar-cinoma cell line IGROVI:Importance of alpha（v）beta3inte-grins and vitronectin J.Int Cancer，1999;802（6）:285-294. 5Iba.ADAM and adhesion protein J.Cell Biol，2000;149:1143-1155. 6Rita Rllegrini，Stefania Martignone.Laminin receptor expres-sion and function in small-cell lung carcinoma J.Int Cancer，1994;9（8）:116-120. 7Vincent Castronovo，Van den Drule FA.Decreased expression of galectin-3in associated with progression of human breast can-cer J.Pathology，1996;179:43-48. 8Vanden FA，Liu FT，Castronovo V.Transglutaminase-mediat-ed oligomerization of galectin-3modulates human melanoma cell interactions with laminin J.Cell Adhes Commun，1998;9（5）:425-435. 9Behrens P，Meissner C，Hopfer H.Laminin mediates basement membrane mouced differentiation of HEC endometrial adenocar-cinoma cells J.Biochem Cell Biol，1996;74（6）:875. 10Amy PN，Skubitz，Robert C，Bast.Expression of6and4in-tegrins in serous ovarian carcinoma correlates with expression of the basement membrane protein laninin J.Am Pathol，1996;148（5）:1445-1461. 11Wewer UM，Lars-Eric Thornell，Frosty Loechel.Extrasynoptic localization of Laminin2chain in developing and adult human skaletal muscle J.Am Pathol，1997;151:621-631. 12Dauidson B.Expression of matrix proteins in uterine cervical neoplasia using immunohistochemistry J.Eur Obstet Gynecol，1998;71（1）:109-115. 13Iris Goldberg，Ben Danidson，Liatierner-Geva.Expression of extracellular matrix proteins in cervical squamous cellcarcinoma-clinicopathological study J.Clin Pathol，1998;51（10）:781-785. 14Barbro Skyldberg，Sirpa Salo，Elina Eriksson.LN-5as a mark-er of invasiveness in cervical lesions J.Natl Cancer Inst，1999;91（21）:1882-1887. 15Giampietro G，Mattia B，Patrizia B.67-Kpa laminin-receptor expression adds progno