热休克蛋白70在食道鳞状细胞癌中表达及其可能对凋亡的调控.doc

热休克蛋白70在食道鳞状细胞癌中表达及其可能对凋亡的调控 作者：刘健宋祖军袁顺书陈广生 【关键词】 脱噬作用 关键词: 脱噬作用;热休克蛋白质类70;食道;癌，鳞状细胞;免疫组织化学 摘 要:目的 研究热休克蛋白70（HSP70）在食道鳞状细胞癌中的表达与意义. 方法 采用鼠抗人HSP70单克隆抗体及免疫组织化学SABC法. 结果 在60例食道鳞状细胞癌中，HSP70表达46例（76.7%）.HSP70在食道鳞状细胞癌级中表达强于在食道鳞状细胞癌级中的表达（P<0.05）. 结论 HSP70在大部分食道鳞状细胞癌中有不同程度表达，HSP70可能参与食道鳞状细胞癌的凋亡调变;其表达与食道鳞状细胞癌分化有关. Keywords:apoptosis;heat-shock proteins70;esophagus;carcinoma， squamous cell; immunohis-tochemistry Abstract:AIM To study the expression and significence of HSP70in esophagus squamous cell carcinomas.METHODS Streptavidin-Biotin-peroxidase Complex（SABC）methods，monoclonal antibody against HSP70were employed.RESULTS HSP70immunoreactivity was detected in46out of60cases of esophagus squamous cell carcinoma.The expres-sion of HSP70in esophagus squamous cell carcinoma signifi-cant difference was not found between the different grades in proper order of esophagus squamous cell carcinoma（P>0.05），and in20low grade（WHO Grade）esophagussquamous cell carcinomas was higher than that in20cases high grade（WHO Grade）esophagus squamous cell carci-nomas（P<0.05）.CONCLUSION HSP70are differently expressed in most of esophagus squamous cell carcinomas and that HSP70may take part in the modulation of apoptosis in esophagus squamous cell carcinomas. 0 引言 食道鳞状细胞癌是一种常见的肿瘤，对食道鳞状细胞癌凋亡调变的研究具有一定意义，这方面的研究文献报道较少.为此我们用免疫组化SABC法，检测了HSP70在60例食道鳞状细胞癌中的表达. 1 材料和方法 1.1 材料 60例食道鳞状细胞癌组织标本来自西京医院，全部病例均经病理诊断证实.其中级食道鳞状细胞癌20例，级20例，级20例.全部标本经40g・L-1 甲醛固定，石蜡包埋，5m连续切片贴于经APES处理的载玻片. 1.2 方法 （1）免疫组化SABC法步骤如下:切片脱蜡至水后经30mL・L-1 H2 O2 室温封闭10min;98微波炉修复抗原10min，冷却至室温;滴加抗原修复液（武汉博士德公司），室温10min;20mL・L-1 正常山羊血清封闭30min，甩去不洗;滴加鼠抗人HSP70单克隆抗体（SIGMA dilution1100）4冰箱过夜，37孵育50min;滴加生物素化羊抗鼠IgG（武汉博士德公司dilution1100）40min;滴加SABC复合物（武汉博士德公司dilution1100）40min;除外每步后均以0.01mol・L-1 （pH7.4）PBS振洗3次，每次5min;DAB-H2 O2 显色5min，苏木精衬染，脱水透明，DPX封固;（2）对照实验:阳性对照为HSP70明确阳性淋巴瘤组织;PBS的代替一抗为阴性对照;（3）结果评定:标本无阳性反应细胞及背景同空白对照者为阴性;标本阳性细胞率介于0%30%为（+）;标本阳性细胞率介于30%60%为（）;标本阳性细胞率>60%为（）.统计学处理:统计阳性标本例数，计算阳性率，各组阳性率的比较用2 检验. 2 结果 2.1 HSP70阳性物质 呈棕色颗粒状，位于磷状细胞癌的胞核和胞质中，在肿瘤组织中阳性细胞以团巢分布为主（Fig1），部分呈局灶性分布，少数散在分布. 图1 略 2.2 HSP70的表达阳性率 60例食道鳞状细胞癌中（，级各20例）HSP70阳性率为76.7%（46/160例），详细情况:级95.（19/20）其中阴性1例（-），弱阳性1例（+），阳性3例（），强阳性15例（）;级85.0%（17/20例）其中阴性3例，弱阳性1例，阳性11例，强阳性5例;级50.0%（10/20例）其中，阴性10例，弱阳性7例，阳性3例，强阳性0例. HSP70在和，和食道鳞状细胞癌相互间表达无显著差异（P>0.05）;但HSP70的表达在级明显强于在级的表达（P<0.05）. 3 讨论 目前关于HSP和凋亡的研究中存在不同观点. Gabai等1 研究Ehrlich腹水癌（ehrlich ascites carci-noma，EAC）细胞时发现HSP70能促使癌细胞获得对凋亡的抵抗力.Samali等2 转染HSP27或70的V937或Wehi-S细胞，对凋亡的抵抗力增强.但Chant等3 在研究急性髓性白血病（AML）患者的血细胞中，发现HSP70的水平与凋亡率间呈正相关.在60例食道鳞状细胞癌中，46例（76.7%）HSP反应阳性，在不同病例中其阳性反应存在差异，表明HSP不同程度地参与了大部分食道鳞状细胞癌的凋亡，HSP70在和，和食道鳞状细胞癌相互间表达程度无显著差异，这表明HSP70的对凋亡作用在分化差别小的食道鳞状细胞癌中可能很相似.HSP70在级食道鳞状细胞癌中表达明显强于级的表达，提示HSP70的对凋亡作用在分化差别大的食道鳞状细胞癌中可能存在差异.级别低、分化程度高HSP70阳性表达强，反之，HSP70表达弱. 近年来在肿瘤细胞增殖与凋亡关系的研究中，发现细胞增殖活跃往往凋亡也活跃.Carroll等4 研究发现，星形瘤细胞恶性程度越高凋亡指数越大.本研究HSP70在分化程度高的食道鳞状细胞癌中表达强，在分化程度低食道鳞状细胞癌中表达弱，说明HSP70可能参与食道鳞状细胞癌的凋亡调变;其表达与食道鳞状细胞癌分化有关. 参考文献: 1Gabai VL，Zamulaeva IV，Mosin AF，Makarova YM，Mosina VA，Budagova KR，Malutina YV，Kabakov AE.Resistance of ehrlich tumor cells to apoptosis can be due to accumulation of heat shock proteins J.FEBS Lett，1995;375:21-26. 2Samali A，Cotter TG.Heat shock proteins increase resistance to apoptosis.J.Exp Cell Res，1996;223（1）:163-170. 3Chant ID，Rose PE，Morris AG.Susceptibility of AMLcells to in vitro apoptosis correlates with heat shock protein70（HSP70）expression