GB 13092-1991 饲料中霉菌的检验方法.pdf

中华 人 民共 和 国 国家 标 准 饲 料 中 霉 菌 检 验 方 法G B 1 3 0 9 2 一 9 1 M e t h o d f o r d e t e r mi n a t i o n o f Mo l d s i n f e e d s ， 主肠内容与适用范围 本标准规定了饲料中霉菌的检验方法。 本标准适用于饲料中霉菌的检验。 2 原理 根据霉菌生理特性， 选择适宜于霉菌生长而不适宜于细菌生长的培养基， 采用平皿计数方法， 测定 霉菌数。 3 设备及材料 3 . 1 天平: 感量1 g , 最大秤量1 0 0 0 g , 3 . 2 显微镜: 1 5 0 O X。 3 . 3 温箱: 2 5 一2 8 士1 C。 3 . 4 冰箱: 普通冰箱。 3 . 5 高压灭菌器: 2 . 5 k g . 3 . 6 干燥箱: 5 0 - 2 5 0 士I C a 17 水浴锅: 4 5 -7 7 士1 0C。 I8 振荡器: 往复式。 3 . 9 微型混合器: 2 9 0 0 r / m i n , 3 . 1 0 电炉。 3 . 1 1 酒精灯。 11 2 接种棒: 镍铬丝。 3 . 1 3 温度计: 1 0 0 士I C。 11 4 载玻片。 11 5 盖玻片。 3 . 1 6 乳钵。 11 7 试管架。 11 8 玻璃三角瓶: 2 5 0 , 5 0 0 m I 。 11 9 试管: 1 5 X1 5 0 m mo 3 . 2 0 平皿: 直径9 C m, 3 . 2 1 吸管: 1 , 1 0 m L , 3 . 2 2 玻珠: 直径5 m m. 国家技术监督局1 9 9 1 一 0 7 一 1 6 批准1 9 9 2 一 0 4 一 0 1 实施 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 G B 1 3 0 9 2 一 9 1 3 . 2 3 广口瓶: 1 0 0 , 5 0 0 M L , 3 . 2 4 金属勺、 刀等。 3 . 2 5 橡皮乳头。 4 培养基和稀释液 高盐察氏培养基。 稀释液。 试验室常用消毒药品。 414243 5 检验程序 霉菌检验程序如下: 6 操作步骤 6 . 1 采样 采样时必须特别注意样品的代表性和避免采样时的污染。 首先准备好灭菌容器和采样工具， 如灭菌 牛皮纸袋或广口瓶， 金属勺和刀， 在卫生学调查基础上， 采取有代表性的样品， 样品采集后应尽快检验， 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 G B 1 3 0 9 2 一 9 1 否则应将样品放在低温干燥处。 根据饲料仓库、 饲料垛的大小和类型， 分层定点采样， 一般可分三层五点或分层随机采样， 不同点的 样品， 合。 充分混合后， 取5 0 0 g 左右送检， 小量存贮的饲料可使用金属小勺采取上、 中、 下各部位的样品混 海运进口 饲料采样: 每一船仓采取表层、 上层、 中层及下层四个样品， 每层从五点取样混合， 如船仓 盛 饲料超过1 0 0 0 0 t , 则应加采一个样品。 必要时采取有疑问的样品送检。 6 . 2 以 无菌操作称取样品2 5 g ( 或2 5 m L ) ， 放入含有2 2 5 m L 灭菌稀释液的 玻塞三角瓶中， 置振荡器上， 振摇3 0 m i n ， 即为1 : 1 0 的稀释液。 6 . 3 用灭菌吸管吸取1 : 1 0 稀释液1 0 m L ， 注入带玻璃珠的试管中， 置微型混合器上混合3 m i n ， 或注入 试管中， 另用带橡皮乳头的1 m L灭菌吸管反复吹吸5 0 次， 使霉菌抱子分散开。 6 . 4 取1 m L 1 : 1 0 稀释液， 注入含有9 m L灭菌稀释液试管中， 另换一支吸管吹吸5 次， 此液为1 : 1 0 0 稀释 液。 6 . 5 按上述操作顺序作1 。 倍递增稀释液， 每稀释一次， 换用一支1 m L灭菌吸管， 根据对样品污染情况 的估计， 选择三个合适稀释度， 分别在作1 0 倍稀释的同时， 吸取1 m L 稀释液于灭菌平皿中， 每个稀释度 作两个平皿， 然后将凉至4 5 左右的高盐察氏培养基注入平皿中， 充分混合， 待琼脂授固后， 倒置于 2 5 - - 2 8 士I C 温箱中， 培养3 d 后开始观察， 应培养观察一周。 6 . 6 计算方法 通常选择菌落数在3 0 - 1 0 0 个之间的平皿进行计数， 同稀释度的2 个平皿的菌落平均数乘以稀释倍 数， 即为每克( 或每毫升) 检样中所含霉菌数。 6 . 7 报告 每克( 或每毫升) 饲料中含霉菌数以个/ 9 ( 个/ m L ) 表示。 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 免费标准下载网( w w w . f r e e b z . n e t ) 无需注册 即可下载 G B 1 3 0 9 2 一 9 1 附录A 培养墓和稀释液制备 ( 补充件) 除特殊规定外， 本标准所用化学试剂为分析纯或化学纯; 生物制剂为细菌培养用; 水为蒸馏水。 A 1 高盐察氏培养基 A l . 1 成分 硝酸钠( G B 6 3 6 ) 2 g 磷酸二氢钾( G B 1 2 7 4 ) 1 g 硫酸镁( Mg S 0 4 - 7 H 2 0 , G B 6 7 1 ) 0 . 5 g 氯化钾( G B 6 4 6 ) 0 . 5 g 硫酸亚铁( G B 6 6 4 ) 0 . 0 1 g 氯化钠( G B 1 2 6 6 ) 6 0 g 蔗糖( H G 3 -1 0 0 1 ) 3 0 g 琼脂2 0 g 蒸馏水1 0 0 0 m L A 1 . 2 制法 加热溶解， 分装后， 1 1 5 高压灭菌3 0 m i n 。 必要时， 可酌量增加琼脂。 A 2 稀释液 A 2 . 1 成分 氯化钠( G B 1 2 6 6 ) 蒸馏水 A 2 . 2 制法 加热溶解， 分装后， 1 2 1 高压灭菌3 0 m i n , ， 。 8.00 05 gm L 附加说明: 本标准由全国