SNT 2700-2010 母羊地方流行性流产补体结合试验操作规程.pdf

书书书 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 ? ? ? ? ? ? ? ? 母羊地方流行性流产补体结合 试验操作规程 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?发布? ? ? ? ? ? ? ? ? ?实施 中华人民共和国 国家质量监督检验检疫总局 发 布 书书书 前?言 ?本标准按照 ? ? ? ? ? ?给出的规则起草? 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口? 本标准起草单位? 中华人民共和国湖北出入境检验检疫局? 湖北省农业科学院畜牧兽医研究所? 本标准主要起草人? 张汉协? 刘泽文? 陈平? 徐涤平? 段正赢? 汪宏才? 杨宜生? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 母羊地方流行性流产补体结合 试验操作规程 ?范围 本标准规定了母羊地方性流产? 羊衣原体病? 补体结合试验操作规程? 本标准适用于母羊地方流行性流产的血清学诊断和流行病学调查? ?规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的?凡是注日期的引用文件? 仅注日期的版本适用于本文 件?凡是不注日期的引用文件? 其最新版本? 包括所有的修改单? 适用于本文件? ? ? ? ? ? ?实验室?生物安全通用要求 ?缩略语 下列缩略语适用于本文件? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 补体结合试验 ?设备? 材料和试剂 ? ? 器材? ? ? ? 试管? 试管架? 水浴箱? 型微量滴定板? ?孔? ?孔? ? ? ?补体? 由指定单位供应? 按说明书使用和保存? ? ?溶血素? 由指定单位供应? ? ?敏化红细胞? 制备及使用方法见附录?中表注? ? ?绵羊红细胞悬液? 制备方法见附录? ? ?抗原和标准阳性血清? 阴性血清? 由湖北省农业科学院畜牧兽医研究所供应? 按说明书使用? ?采样? 送检和处理 按常规方法采血? 分离血清? 要求不溶血? 无腐败? 在血清中加入? ? ?硫柳汞或? ?叠氮钠防 腐? ?保存? 试验前需? ? ?灭活? ? ? ? ?操作步骤 ? ?预备试验 ? ? ?补体效价滴定? 试验前应对补体进行效价滴定?滴定方法见附录 ? ? ? ?溶血素效价滴定? 试验前应对溶血素进行效价滴定? 以后每隔?个月测定效价一次?滴定方法 见附录? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?抗原? 阳性血清效价滴定? 抗原和阳性血清效价滴定的方法见附录 ? ? ?正式试验? 包括试管法和微量法? ? ? ?试管法? 按表?的程序操作?试验要同时设抗补体对照? 阳性血清对照? 阴性血清对照? 抗原对 照? 溶血素对照和生理盐水对照? 表? 补体结合试验? 试管法? 单位为毫升 成分 被?检?血?清各?项?对?照 试?验?管 抗补体 对照 阳性 血清 阴性 血清 抗原 对照 溶血素 生理 盐水 效 价 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?个工作量? ?个工作量 血清 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?工作量 抗原 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?单位 补体 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 生理盐水 ? ? ? ? ? 混匀? ? ?感作? 取出后? ?水浴? ? ? ? 敏化 红细胞 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 混匀? ?水浴? ? ? ? 结果 判定 ? ? 全 不溶 全 不溶 ? ? 溶 ? ? 溶 ? ? 溶 全溶全溶全不溶全溶全溶全溶全不溶 ? ? ? ? ?微量法? 用 ? 型? ?孔反应板?按表?的程序操作?试验同时设抗补体对照? 阳性血清对 照? 阴性血清对照? 抗原对照? 溶血素对照和生理盐水对照? 表? 补体结合试验? 微量法? 单位为微升 成分 被?检?血?清各?项?对?照 试?验?孔 抗补体 对照 阳性 血清 阴性 血清 抗原 对照 溶血素 生理 盐水 效 价 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?个工作量? ?个工作量 血清 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?工作量 抗原 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?单位 补体 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 生理盐水? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 表? ? 续?单位为微升 成分 被?检?血?清各?项?对?照 试?验?孔 抗补体 对照 阳性 血清 阴性 血清 抗原 对照 溶血素 生理 盐水 效 价 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?个工作量? ?个工作量 混匀? ? ?感作? 取出后? ?水浴? ? ? ? 敏化 红细胞 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 混匀? ?水浴? ? ? ? 结果 判定 ? ? 全 不溶 全 不溶 ? ? 溶 ? ? 溶 ? ? 溶 全溶全溶全不溶全溶全溶全溶全不溶 ? ? ?结果判定 ? ?在最后一次? ?水浴? 或汽浴? ? ? ? ?后? 立即进行试验结果判定? ? ?各组对照为如下结果时试验方成立? 否则应重复试验? ? ? ?被检血清抗补体对照? 完全溶血? ? ? ? ?阳性血清加抗原对照? 完全抑制溶血? ? ? ? ?阴性血清加抗原对照? 完全溶血? ? ? ? ?抗原抗补体对照? 完全溶血? ? ? ? ?溶血素对照? 完全溶血? ? ? ? ?生理盐水对照? 完全抑制溶血? ? ? ?判定标准? 血清效价以? ?溶血? ? 为判定终点?被检血清效价? ? ? ? 判为阳性? ? ? ? 判为阴性? ? ? ? 判为可疑? 重复试验仍为可疑? 则判为阳性? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 附?录? ? 规范性附录? 补体效价滴定 ? ?用生理盐水将补体作? ?稀释? 按表 ? ?测定补体效价? 表? ? 补体效价滴定单位为毫升 组别抗原生理盐水 试管号 ? 二单位抗原 ? ? ? ? ? ? ? ? 生理盐水 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?补体 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 混匀? ?水浴? ? ? ? 敏化红细胞 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 混匀? ?水浴? ? ? ? 结果示例 ? ? ? 全 不溶 ? ? 溶 ? ? 溶 ? ? 溶 全溶全溶全溶 全不溶 ? ? 溶 ? ? 溶 ? ? 溶 全溶全溶全溶 ?注?敏化红细胞系由?公绵羊红细胞悬液加等量的?个工作单位的溶血素? 放? ?水浴? ? ? ?后再滴加? ? ?补体效价的计算? 能使红细胞完全溶血的补体量即为?个补体单位? 表 ? ?所示第?管? ? ? 为一个补体单位?而正式试验使用两个补体单位? 原补体在使用时应稀释的倍数按下列公式计算? 原补体应稀释倍数?使用时每管加入量?滴定时补体稀释倍数 一个单位量? ? ? ? ? ? ? ? ? 倍? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 附?录? ? 规范性附录? ?绵羊红细胞悬液的制备 ? ?颈静脉采取成年健康公绵羊血液? 以常规方法脱纤后? 按?加入红细胞保存液? 混匀后分装成 ? ? ? 一瓶? 封固后放 ? ? 冰箱可保存 ? 个周? 用前用生理盐水洗涤 ? 次? 最 后 一 次 在 ? ? ? ? ?离心? ? ? 按红细胞泥容量加生理盐水配成?红细胞悬液? ? ?红细胞保存液配方? 葡萄糖? ? ? ? 氯化钠? ? 柠檬酸三钠? ? 柠檬酸? ? ? 蒸馏水加至 ? ? ? ? ? ? ? ?灭菌? 备用? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 附?录? ? 规范性附录? 溶血素效价滴定 ? ?先将溶血素? ? ?稀释? ? ?含甘油的溶血素加? ?生理盐水? ? 按表? ?稀释成不同倍 数? 再按表? ?操作? 表? ? 溶血素稀释单位为毫升 成?分 管号及稀释倍数 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 生理盐水 ? ? ? ?溶血素 ? ? ? ?溶血素 ? 表? ? 溶血素效价测定单位为毫升 成?分 管号及稀释倍数 ?对照 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?补体 ? ? ? 溶血素 ? 红细胞 稀释熔血素? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 生理盐水 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?补体 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?红细胞 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 充分摇匀? ?水浴? ? ? ? 结?果 ? ? ? ? 全溶全溶全溶全溶全溶全溶全溶? ?溶 ? ?溶 全不溶全溶全不溶 ? ?以完全溶血的溶血素最高稀释倍数为一个溶血单位? 表? ?所示为? ? ?倍? 正式试验时? 使用两 个溶血素单位? 则本例溶血素稀释倍数为? ? ? ? ?倍? ? ? ? ? ? ? ? ? ? 附?录? ? 规范性附录? 抗原? 阳性血清效价滴定方法 ? ?取? ?支试管? 排成纵横各?排的方阵? 第?排缺?管? ? ? ?抗原和阳性血清分别从? ? ?作倍比稀释? 阴性血清作?稀释? 设抗原? 血清和生理 盐水对照? ? ?每管按不同稀释度的要求加入阳性血清各? ? 抗原对照组一排不加血清? 而用? ?生理 盐水代替? ? ?每管再按不同稀释度的要求? 各加入不同稀释倍数的抗原? ? ? 血清对照不加抗原? 而用 ? ?生理盐水代替? ? ?每管中加入? ?含?单位补体? ? ?摇匀? 置?冰箱感作? ? ? 次日取出放? ?水浴? ? ? ? ? ? ?每管加入敏化红细胞? ? ? ?混匀? 置? ?水浴? ? ? ?后? 取出静置? ? 判定结果? ? ?效价判定? 能与最高稀释度的阳性血清呈现完全抑制溶血