耐热菌的极限生存条件研究.pdf

贮藏与加工 北方 园 艺 2 0 0 6 ( 6 ) ： 1 5 4 1 5 6 耐热菌酌极限生存条件研究 李 莉 ， 田 士 林 ( 黄淮学院农林科学系 。 河南驻马店 4 6 3 0 0 0 ) 摘 要 ： 本试验 以从河南三 门峡湖滨果汁有 限责任公 司苹果浓缩 汁生产线上分 离出的耐热茵和从 德 国 引进的标准耐热茵为试材 ， 对其热力杀菌进行 了 系统试验研 究。结果表 明： 在 8 0 热处理 4 5 rai n时， 分 离 耐热茵和标 准耐 热茵 的杀 灭率 分 别 为 8 4 4 7 、 8 6 6 7 ； 8 5 热 处 理 3 5 mi n 。 杀灭 率 分 别 为 9 2 5 6 、 9 4 6 6 ； 9 0 热处理 3 0 mi n ， 杀灭率分别为 9 9 8 5 、 9 8 ， 9 5 ； 9 5热处理 1 1 mi n ， 杀灭率分别为 9 6 5 9 、 9 9 0 1 。可以看 出8 0 、 8 5 、 9 5 时， 在相同温度 条件 分 离耐热 茵比标准耐热 茵更难以被杀死 ， 但在 9 0时 ， 热处理对标 准耐热 茵的杀灭率度却小于此条件 下分 离耐热 茵的杀灭率。 关键词 ： 浓缩苹果 汁； 耐热菌； 分离 ； 热处理 中图分类号 ： s 6 0 9 文献标识码 ： B文章编 号 ： 1 0 0 1 0 0 0 9 ( 2 0 0 6 ) 0 6 0 1 5 40 3 浓缩苹 果 汁加 工是 一 种提 高苹 果附 加值 的加 工方 式。 2 0 0 4年 ， 我 国浓缩苹果 汁出 口量为 4 8 7万 t 约 占世 界苹果 汁贸易 总量 的 5 0 H 】 。但在苹果浓缩 汁加工过程 中 ， 存在许 多有待解决 的问题 ， 耐热菌便是其 中之 一 j 。 所谓耐热 菌是指酸 土环脂芽孢 杆菌 ， 它属于环脂 芽孢杆 菌属 ， 在环 脂芽 孢杆 菌 属 的 5个 种 中仅 酸土 环脂 芽孢 杆 菌 ( A l i c y c l o b a c i l l u s a c i d o t e r r e s t r i s ) 3 J 可经受果汁巴氏杀菌过程而 存活 。 在合适的条件下 ， 可迅速生长繁殖而导致果汁感 官品质 的劣变。在浓缩苹果 汁出口时 国外厂商 要求在 1 0 mL浓缩 汁中该 菌含量不 大于一个 。于是 ， 对耐 热菌 的含量 控制成 为 各 苹果浓缩生产 厂家最迫切解决 的问题 。 本次试验对苹果浓缩 汁生产线 上分离 出的耐热 菌， 采 用 高温热力杀灭的方法进行 杀菌试验 研究 ， 找 出了杀灭 率较 高 的温度 和热处理 时间 。以期 为控制耐热菌含量提供依据 。 1 材料与方 法 1 1 材料 浓缩苹果 汁 ： 河南三门峡湖 滨果汁有 限责 任公 司浓缩苹 果汁生产线 标准耐热菌 ： D S M3 9 2 2 ( 购 自德 国) 增菌 培 养 基 ： 酵 母 浸 膏 0 5 、 葡 萄 糖 0 2 、 蛋 白胨 0 5 、 浓 缩 苹 果 汁 ( 7 2 b r i x) 2 、 Mg S O 4 7 H ， O 0 1 、 ( N 8 4 ) z S O4 0 0 4 、 C a C L 2 。 2 H 2 O 0 0 5 、 KH 2 P O 4 0 1 2 、 M n S O4。 4 Hz O 0 0 5 、Na NO3 0 3 、KC1 0 0 5 、 F e S O4 0 0 0 1 。P D A 培 养 基_ 4 J ： 水 1 0 0 0 mL 、 琼 脂 2 0 g 、 葡 萄糖 2 0 g 、 马铃薯( 去皮 ) 2 0 0 g 。 1 2 仪器 恒温培养箱 ( D P X一9 0 0 2 B一1 ) 、 二氧化碳培养箱 、 摇床培 养箱( H WY一2 l l 2 ) 、 鼓风 干燥 箱( D GX一9 1 4 3 B C) 、 恒温 水浴 器 ( HS QI ) 、 电子 天平 ( J A 2 0 O 3 ) 、 酸度计 ( P HS 一3 C ) 、 超低温 冰箱( WD 9 0 0 AT L 2 3 2 ) 、 菌落计 数器 ( T Y J 一2 A) 、 生物 洁净 工作 台( B C N一1 3 6 0 B ) 、 高压蒸汽 灭菌器 ( Z D X一3 5 B I ) 、 超声 波清洗机( HS 一6 0 0 1 3 ) 。 收稿 日期： 2 0 0 60 6 2 2 1 5 4 1 3方法 用热处理对分离耐热菌及标 准耐热 菌进行 杀菌处 理 ， 比 较两种耐热菌芽孢的耐热能力。 1 3 1 耐热菌芽孢悬浊 液的制备 将分离 出 的耐 热菌 于增 菌培养基上( p H=3 7 )4 5下培养 2 d ， 转 移至 P D A培 养基 ( p i t =5 6 ) 于 4 3培养 7 d直到至少有 8 0 的芽孢 生成 ， 用 约 5 mL无菌水 和柔软无 菌 的擦 拭纸 冲洗擦 拭培 养基 表 面 ， 收集悬浮液于 4下 4 0 0 0 g 离心 2 0 m i n ， 弃去上层清液。用 无菌水再次悬浮 ， 于 4下 4 0 0 0 g离心 1 0 mi n ， 重 复 4次。 将最终得到 的沉淀置于缓冲液( p H=7 0 ) 中制成悬浮液 。 1 3 2 热处理杀灭耐热 菌 5 将 标准耐 热菌 和分 离 出的耐 热 菌制备成芽孢悬浊液 ， 于 7 0下处理 3 0 mi n激 活芽孢 ， 再 将其注入无菌毛细试管中 ， 火焰 封 口。 分别在 8 0 、 8 5 、 9 0 、 9 5 温度下水浴热处理不同 的时间 ， 热 处理后 马上取 出立 即冰水 冷却 ， 浸入 7 0 乙醇溶 液中 ， 取出 ， 无菌 操作 打开 一端 ， 取 出 溶液 1 0 0 u L ， 用无菌水稀释成不同倍数 ， 用涂 布法接种 1 0 0 u L 于 p H=3 7的 A A M 培养基上 ， 4 5 下培养 7 2 h ， 观察 并记 录菌落个数。 2 结 果与分 析 果汁中耐热菌的杀菌试验结 果分析如下。 2 1 热处理试验 从表上可以看出 ， 相 同的热处 理温度下 ， 延长 处理 时 间， 菌株的杀灭率提高 ； 提高热处 理温度 ， 将加快菌株 的杀灭 。8 0 条 件 下 ， 热 处 理 4 5 min ， 标 准耐 热菌 杀 灭 率 才 达 到 8 6 6 7 ， 分离耐热菌 的杀灭率达到 8 4 4 7 ； 但 在 9 5 条件下 ， 只要热处理 5 m i n ， 就可以达到相 同的杀灭率 。表上说 明在对 耐热菌杀灭的实验 中 ， 提高温度比延长热处 理时间更 加有效。 2 2 相同杀菌温度下杀灭率 与时间的关 系( 如图 1 4所 示) 比较图 1 4不同温度 下的耐热菌杀灭率 与时间的关系 ， 可 以看出在温度 为 8 0 、 8 5 、 9 5 三 个水平 中相 同处理时 间下 的 标准耐热菌 的杀灭率度 大于此 条件下分 离耐热菌 的杀灭 率 ， 这表明在相 同热处理杀 菌条件下 ， 一般 情况下 分离耐热 菌 比 标准耐热 菌更难 以被杀死 。此外我们也注意到在热处理温度 为 9 0时 ， 热处理对标 准耐热菌 的杀灭率度却小于此条件下 维普资讯 北 方 园艺 2 0 0 6 ( 6 ) ： 1 5 4 1 5 6 贮藏与加工 分离耐热菌的杀灭率。 I - ： ： ： = = 图 1 8 0以下耐热菌杀灭率与 时间的关 系 图 2 8 5 以下耐热菌杀灭率与时 间的 关系 ：毒錾瓣 鲤 孥 j 誊 t 毒 季 。 毒 。 。 | | 鼍曩 谚 孽 菇 誊 毫誊 毒 甏 纂 4 麓 | 誊 t 簿毒 鏊 强 图 3 9 0以下耐热菌杀灭率与 时间的关 系 图 4 9 5 以下耐热菌杀灭率与时间的关 系 衰 1 热处理试验结果 注 ： 杀灭率 ： ( MI C OMI C) MI C O x1 0 0 ( MI e一杀菌处理后的菌体浓度 ， MI c 0 一杀菌处理前 的菌体原始浓度 ) 1 55 嘶 维普资讯 贮藏与加工 北 方 园 艺 2 0 0 6 ( 6 ) ： 1 5 6 黄瓜黑 星病的 发生 与 防治措 施 李晓红 ( 辽 东学院农学院园林园 艺系， 1 1 8 0 0 3 ) 中图分类号 ： $ 4 3 6 4 2 1 、 1 9 文献标 识码 ： B 文章编号 ： 1 0 0 1 0 0 0 9 ( 2 0 0 6 ) 0 6 0 1 5 60 1 黄瓜黑星病 ， 又叫疮痂病， 此病发生时间早 、 持续 时间长、 幼苗、 叶片、 茎蔓和果 实均可被 害， 严 重影响黄瓜 的产量和 质 量 ， 发病后一般减产 1 0 3 O ， 病瓜味 苦失去食 用价值 ， 随 着设施栽培的发展逐 年加 重， 除黄瓜外， 还危 害甜瓜、 南瓜 、 西 葫芦 、 冬瓜等 葫芦科作物。 1 症状 幼苗期发病 ， 子叶上形 成 圆形 、 黄褐 色小斑 点， 扩展后 烂 掉 ， 植株停止 生长 导致死亡 。成株期 发病 ， 叶 片、 茎蔓、 龙 头、 瓜条等部位均可受 害。 以瓜条 受害最 为严重。叶片发病产 生 褪绿的近 圆形的病斑 ， 后 变为黄 褐 色， 病斑 干枯后会 穿孔 ， 边 缘呈 星芒状 ； 龙 头发病 生长 点萎 蔫， 发褐 。 2 3 d龙 头烂掉 ， 形 成“ 秃桩” ； 茎蔓病斑略呈椭 圆形 ， 淡黄褐 色， 稍凹陷； 幼瓜和成 瓜病斑 水浸状 向内发展 。 褪绿 圆形 、 不规 则行 至星芒状 。茎蔓 和瓜条上的病斑表面常有琥珀 色段质物 溢 出， 俗称“ 冒油” ； 湿 度 大对 密生灰 色霉层 ； 后期 病斑表 面呈疮痂状 ， 干燥 时龟裂。 病 瓜一般不腐烂 ， 但常生长不均衡 。 弯曲畸形。 2 发 生规律 黑星病 的病原 茵属半知 茵亚门真菌。病 菌可产生发达的 茵丝体和分 生孢 子梗 、 椭圆形的分 生孢子。病茵 以菌丝体或 茵丝块在地表或土壤中越冬， 或以茵丝体潜伏在种皮下越冬， 或附着在架材上越冬。带菌种子播种后可直接侵染子叶。 引 起 幼苗发病 。越冬的 茵丝春 天产 生新 的分 生孢 子， 引起 田 间 初 次侵 染。黄瓜发病后 ， 在适 宜条件 下病 部产生 大量 的分 生 孢子， 借气流、 水和农事操作传播， 引起再侵染。低温、 弱光和 高湿有利于黑星病 的发 生。最适温度在 1 5 2 2 ， 空气相对 湿度在 9 0 以上 时， 棚 室项部 、 植株 上有 水滴 的情况 下发 生 严重。因而春天温度低 、 湿度 大、 雨雪天或透光差的棚 室早 而 且 严 重 。 3 防治措 施 3 1 加强检疫 黄瓜生长期进行 田间检 疫检 验， 发现病株及 时采取相 应措 施： 调 用无病种 子 ， 控制 黑星病 的传播 蔓延 。 3 2 消毒 处 理 3 2 1 种 子消毒 选用抗病品 种， 播种 前进行种子 消毒 ， 可 用 5 5温水浸泡 1 5 mi n后催 芽播种 。 或 用 4 0 甲醛 1 0 0倍 液浸种 3 0 n fi n洗净晾干后播种 ， 或用 2 5 多菌灵可湿性粉剂 3 0 0 倍 液浸种 1 2 h ， 清洗后催 芽播种 ， 或用种 子 重量 0 3 5 0 多菌灵可湿性粉剂拌种。 3 2 2 棚 室消毒播种前或定植前 ， 用硫磺 熏蒸进 行环境 消 毒 ， 每 1 0 0 I1 1 用硫磺 0 2 5 k g 加锯 末 0 、 5 k g混合后分几堆点 燃 后 熏 蒸一 夜 。 3 2 3 苗床 消毒 选 用大田土或 未种 过瓜 类蔬 菜的 土壤 。 床 土消毒可 用 5 0 多茵灵可湿性粉 f Il ， 或用 6 0 防霉宝可 湿 性粉荆， 或 5 0 凯克星可湿性粉 剂 ， 用药 8 g ， ，n l ， 混入 干细土 5 k 旦 拌 匀配成 药土撒施。 3 2 3 定植地块土壤消毒 对于连作的地块在夏季高温季 节 ， 每 6 6 7 D I 2 撒石灰 氮 3 5 6 0 ， 和 4 6 C r l l 长 的秸杆 I 1 5 t ， 耕翻 3 0 c m深 ， 起 垄， 覆盖 透明 薄膜 ， 膜 下灌足 水 ， 四 周 盖 严 用 太 阳能 熏蒸 2 03 0 d。 3 3 栽培管理 与瓜类蔬菜 实行 3年 以上 的轮 作 ， 施足腐 熟 的有机肥 ， 增施磷 、 钾肥提 高植 株体抗性 。使 用 透光 率高 、 防 尘性能好、 抗老化、 无滴新薄膜； 及时清除薄膜上的灰尘， 保持 薄膜表面清洁 ； 棚膜 变松 、 起皱 时， 应及 时拉平 、 拉 紧等措施 增 加 内的光照。晴天时棚室晚放 风， 保持较 高温度 ， 使棚 室项 部 露水 雾化 ， 棚 室温度 升高后再放 顶风 ， 下午加 大放 风 量， 降低 湿度。棚室栽培覆 盖地膜 。 露地栽培 采 用高畦 ， 避 免积 水 ， 雨 后及时排 水。合理密植 ， 及时摘除老叶、 病叶 ， 清除病瓜、 病 株 等。 3 4 药剂 防治 发病初 期 用 4 5 百 茵清烟 荆或 黑 星净 烟 荆， 每 6 6 7 r n 用药 3 0 0 3 5 0 g ， 7 d熏 1次 ， 连 熏 4 5次。喷 雾用 4 0 杜 邦福星乳 油 8 0 0 0 1 0 0 0 0倍液 、 4 0 福 硅唑 乳 油 8 0 0 0 1 0 0 0 0倍液 、 l 2 5 腈茵唑乳油 8 0 0 l 0 0 0倍 液、 5 0 苯菌灵可湿性粉 剂 5 0 0倍 液 、 4 6 多抗 霉素 8 0 0 1 0 0 0 倍液 ， 7 d 1次， 晴天连喷 3 4次， 喷后加 强通 风。 3 结论 国内外对浓缩果汁 中耐热菌进行 了大量研 究， 大部 分集 中在如何检测 】 和性质 】 方 面。本 试验 选用热 力杀菌 的方法， 杀灭率能达到 9 9 0 1 ， 效果较好， 但足在加热过程 ； | 果 汁的营养成分会有所 流失。如何 能有效热 杀菌 ， 又保 证 果 汁的感官 、 营养 、 色泽保持不变 ， 是有待解决的问题 。 参考文献 ： 1 1 2 0 0 4年陕西果 品出口创江 ： 增长 4 4 9 中国食品工业 剐 2 0 0 5 【 2 e c ru) ， G e t a 1 s p o i l a g e o f f r u i t j u ic e b y b a c il l u s ： i s o la t i o n a n d c h a r a c t e r i z a t i o n o f t h e s Ix ) i l i n g mi c r o o r g a n i s m Z Le b e n s m Uut e r s f o r t h 1 9 8 4， 1 7 9： 2 2 4 2 2 7 3 j E v a n g e l i a Ko mi t o pou l o u ，l o mn i s S B o z i a r i s A l i t ：y c l a b a c ii l u 8 a c i d o t e r r e s t r is i n f r u i t j u i c e s a n d i t s c o n t r o l b y n i s i n I n t e r n a t i o n a l j o u r n a l o f f o o d S c i e n c e& F e c h n o lo g y， 1 9 9 9， 3 4( 1 ) ： 81 8 5 4 周 德庆 微生物学教程 Mj 高等教育 出版 1 9 9 3 5 Mi mh a N e i N , Ub o l d i E i r o a Va l e r i a C h I i s t i m Ams t a l d c r l j u n q u e i r a 1 56 F la v i o L S e h mid t A I i c y c I o b a c I u u s in o r a n g e j u i c e ： O c c u r r e n c e a n d h e a t r e s i s t a n c e o f s p o r e s J o u r n a l o f f o o d p r o t e c t io n ， 1 9 9 9， 6 2 ( 8 ) 8 8 38 8 6 陈颖 ， 仇农学 臭氧对耐酸耐热 菌作 用的研究 J j 食品工业科 技 2 0 0 4 3 8 ( 1 ) ： 3 l 一3 2 7 王思新 ， 焦咔 r 高， 王晓燕 浓缩苹果 汁加工r 】 耐热 菌的分析 j 控 制 J 食品科学 ， 2 0 0 0 ， 3 l ( 9 ) ： 3 3 3 6 8 仇农学 ， 陈颖 氧溶解特性 及对耐热 菌非热杀 菌的研究 J 农 业工程学报 ， 2 0 0 4 ， 2 2 ( 4 ) ： 7 1 1 1 9 j P e t t i p h e r G L。 M E o s mu n d s o n ， a n d J M Mu r p h y