腈菌唑在辣椒上的残留检测方法研究.pdf

安徽农业科学 ， J o u rna l o f A n h u i A S e i 2 0 1 0 ， 3 8 ( 5 ) ： 2 2 1 3 2 2 1 5 责任 编辑姜丽责任校对况玲玲 腈菌唑在辣椒上 的残 留检测方法研究 谭龙波 ( 贵 州 中 水 能 源 股 份 有 限 公 司 ， 贵 州 贵 阳 5 5 o o o 4 ) 摘要 目的 研究农药腈茵唑在辣椒( C a p s i c u m a n n u u m) 上残留的提取及检测方法， 并对其在辣椒作物上的施用作了安全性评价。 方 法1 采用气相色谱法进行测定。 结果 辣椒中腈茵唑添加浓度为 0 0 1 1 0 0 m S k g时， 平均回收率为9 4 3 一 9 8 8 ， 相对标准偏差 为 2 1 5 4 ； 建立的检测 方法的标 准 曲线 的回归 方程为 Y=1 6 2 9 8 x+3 4 8 9 2 ， R =0 9 9 9 4， 按 照剂量 6 0 g h m 施 药 6 0 d后 ， 在采 集 的辣椒样品中腈茵唑残留量小于0 0 1 m s k g 。【 结论 腈茵唑按照该研究中的试验剂量在辣椒上施用是安全的。 关键词腈茵唑； 辣椒； 残留； 气相色谱 中图分类号$ 4 8 1 8 文献标识码A 文章编号0 5 1 7 6 6 1 1 ( 2 0 1 0 ) 0 5 - 0 2 2 1 3 0 3 S t u d y O i l t h e De t e r mi n a t i o n o fMy c l o b u t a n i l Re s i d u e s O i l P e p p e r ( C a p s i c u m t i l J i ； l l l i m) T AN L o n g - b o ( G u i z h o u Z h o n g s h u i E n e r g y De v e l o p me n t L i m i t e d C o mp a n y ， Gu i y a n g ， G u i z h o u 5 5 0 0 0 4 ) Ab s t r a c t f O b j e c t i v e T h e e x t r a c t i o n a n d d e t e r mi n a t i o n me t h o d o f My c l o b u t a n i l o n p e p p e r ( C a p s ic u m 口 M 胂 )Wa s s t u d i e e l ， a n d t h e u s i n g m e t h o d o f t h e pes t i c i d e o n C a p s ic u m a n n u u m W a S a s s e s s e d M e t h o d The G C m e t h o d w a s u s e d t o d e t e r m i n e R e s u l t T h e r e s u l t s s h o w e d t h a t t h e me a n r e e o v e r y wa s 94 3 一9 8 8 a n d t h e r e l a t i v e s t and a r d d e v i a t i o n wa s 2 1 一5 4 wh e n t h e a d d i t i o n c o n c e n t r a t i o n wa s0， 0l一1 O 0 mg k g T h e r e g r e s s i o n e q u a t i o n o f s t a n d a r d c u r v e w a s Y=1 6 2 9 8 X+ 3 4 8 9 2， R = 0 9 9 9 4 On t h e d o s e o f 6 0 g h m ， t h e a mo u n t o f My c l o b u t a n i l r e s i d u e s w a s l o w e r t h a n 0 0 1 一 1 0 0 m g k g o n t h e C a p s i c u m a n n u u m s a m p l e C o n c l u s i o n 1 1 1 e pes t i c i d e i s s a f e t o C a p s w u m a n n u u m w i t h s t u d - i e d d o s e Ke y w o r d s My c l o b u t a n i l ；P e p p e r ( C a p s i c u m a n n u u m) ；R e s i d u e s ；G C 自2 0世纪4 0 年代农药大规模施用以来， 全球每年有几 百万 t 的化学农药被喷洒到 自然环境 中。环境中的农药残 留量 日趋增多， 在 自然条件及生物作用下， 农药在环境中重 新分布， 致使全球大气、 水体、 土壤和生物体内都含有农药残 留。农药残留是指农药施用后残存于生物体、 农副产品和环 境中的痕量农药原体、 有毒代谢物、 降解物和杂质的总称。 农药残留是人类大规模施用农药的必然后果， 然而人口数量 的增加和人类物质生活水平的不断提高离不开农药的施用 ， 为了最大限度地减小农药对人类的危害 ， 建立卓有成效的农 药残留分析方法是科学指导农药使用的关键。 农药残留分析方法 的产生源于传统 的高毒农药对环境 污染的日 趋严重。农 药残留分析方法的原理是首先找到一 种合适的提取手段 ， 经过一系列的科学操作 ， 将残留在取 自 自然环境的样本中的目标检测农药完全提取出来 ， 最后进入 自动化程度较高的分析仪器中进行定性 定量分析。腈菌唑 ( m y c l o b u t a n i l ) 是一种三唑类广谱、 内吸性杀菌剂， 是甾醇脱 甲基化抑制剂， 具有高效、 广谱 、 低毒及持效期长等特点 ， 主 要用于防治子囊菌亚门等病原菌引起的多种病害， 如黑星病 和白粉病 ， 被认为是一种前景较好的杀菌剂 。目前对该 药品在 小麦、 香 蕉、 黄瓜 和毛 豆上 残 留分析 已有 相关 报 道 ， 但是尚未见到该药品在辣椒作物上残留分析的相关 报道。为此， 笔者研究了气相色谱测定农药腈菌唑在辣椒上 残 留的提取及检测方法， 并对其作 了安全性评价 ， 这对于科 学合理地分析该农药残留和安全施用具有指导意义。 1 材料与方法 1 1 材料腈菌唑 2 5 E C ， 由江苏省宜兴生物化工厂生 产 ； 腈菌唑标准品， 由上海贝基生物科技有限公司生产； 所使 用化学试剂均为分析纯。 气相色谱仪： A g i l e n t 6 8 9 0 N； 色谱柱： H P - 5毛细管柱 ( 3 O 作者简介谭龙波( 1 9 7 6一) ， 男， 贵州兴叉人 ， 工程师， 从事有机化学方 面的研究。 收稿 日期2 0 0 9 - 1 0 - 2 2 m0 3 2 am 0 2 5 m) ； S Z - 9 3自动双重水过滤器 ， 上海亚 荣生化仪器厂； R E - 5 2 A A旋转蒸发器 ， 上海亚荣生化仪器厂 ； F J - 2 0 0高速匀浆机 ， 上海标本模型厂； Q L - 9 0 1 涡旋混合器， 江 苏海门市麒麟 医用仪器厂； D C 1 2 一 I 氮吹仪； A s 3 l 2 O超声清 洗器 ； 玻璃层析柱 ( 2 5 0 a m 1 5 c m ) ； 梨形分液漏斗 ( 具聚 四氟乙烯活塞) ； 三角瓶等一些痕量分析常用玻璃仪器。 1 2 方法 1 2 1 田问试验。试验地点 ： 贵阳市花溪区。施药时间； 辣 椒开花期。施药剂量 ( a i ) ： 6 0 g h m 。采样时间 ： 施药 6 0 d 后的辣椒成熟期。采样方法 ： 施药 区随机选取 5 一l 0点 ， 每 点采0 1 r l l 植株， 收集辣椒 1 k g ， 置于冰箱内备用。 l 。 2 2 提取及净化方法。取 1 0 0 g 辣椒样品于干燥的 2 5 0 I n l 具塞三角瓶中， 加入 甲醇 一 水 ( 4 ： 1 ， V ) 混合溶剂 2 0 m l ， 于振荡机上振荡 2 h 。取下 。 于超声器上超声提取 1 5 m i n ， 用 布氏漏斗抽滤( 2 层滤纸上铺约 3 g 助滤剂 C e l i t e 5 4 5 ) ， 用 l O m I 提取液分次冲洗滤渣 和抽滤瓶 ， 并把滤液转移至 2 5 0 m 1 分液漏斗中。加入 4 氯化钠溶液5 0 ， 用二氯甲烷2 O 、 2 0 、 l 0 I T l 1 分 3次进行萃取 ， 每次萃取时间 1 m i n ， 合并萃取后的 有机相， 用无水硫酸钠过滤脱水， 在旋转蒸发仪( 水温 3 8) 上减压浓缩近干， 取下用氮气吹干 ， 待柱净化。 选取 2 0 0 IT I 1T I 1 0 mm玻璃柱 ， 用重蒸后的石油醚( 沸程 6 o9 0) 装柱， 自下至上分别装入 1 0 g无水硫酸钠、 4 0 g 5 水失活中性氧化铝( 1 0 0 2 0 0目) 、 1 0 g无水硫酸钠 ； 用 2 r n l 石油醚 一二氯甲烷 ( 2 ： 3 ， ： V ) 溶解样品， 将样品全部转 移至柱中， 用 1 0 r n l 石油醚 一二氯甲烷( 2 ： 3 ， V ) 洗脱； 用甲 醇 一 二氯甲烷( 2 ： 2 5 ， V ) 淋洗， 收集 1 5 m 1 淋洗液， 于氮气仪 上吹干， 用重蒸甲苯定容至 2 0 m l ， 待测。 1 2 3 检测方法。I a E C D N i 检测器； A g i l e n t 1 9 0 9 4 G - 0 1 3石 英毛细管柱 HP 5 ( 3 0 m0 3 2 mm 0 2 5 m) ； 柱温 ： 初温 1 5 0 ， 保持 2 m i n ， 以6 m i n升至 2 1 2， 保持2 m i n ， 以3 0 C m i n升至 2 8 0 ， 保持 3 mi n ； 柱压， 6 0 6 0 k P a ； 进样 口温 度 ， 2 6 0 c c； 检测器温度 ， 2 8 0 ； 尾吹气 流量 ( 高纯氮 ) ， 6 0 2 2 1 4 安徽农 业科 学 2 0 1 0正 ml m i n ； 进样模式， 分流进样； 分流比， 1 0 ： 1 ； 进样量， 2 0 l ； 保留时间。 1 4 9 0 1 5 0 5 m i n 。 以上试验过程均作 3次平行试验 。 2 结果与分 析 2 1 提取与净化方法的建立 2 1 1 提取试剂的选择。依据腈菌唑在甲醇、 二氯甲烷 、 三 氯 甲烷、 丙酮中的溶解度 腈菌唑的溶解性 ( 2 5) ： 溶于醇、 芳烃、 酯 、 酮( 5 0 1 0 0 g L ) ， 难溶于水 ( 1 4 2 m g L ) ， 不溶于脂 肪烃 ， 用同体积的丙酮 、 水、 氯仿、 二氯甲烷和甲醇进行标准 添加回收试验。 发现甲醇的提取效率最高， 二氯甲烷次之， 其 次是丙酮和氯仿。最终确定样品的提取液为甲醇 一水( 4 ： l ， ) 混合溶剂。 2 1 2 提取剂量的选择。在选用 甲醇 一水( 4 ： 1 ， ： V ) 混合 溶剂作为提取剂后， 进行提取用量的试验。分别以 2 0 、 3 0 、 5 0 m l 混合液进行标样添加回收提取试验， 发现使用 3 O 、 5 0 m l 溶剂量得到的添加回收率比使用 2 0 m l 溶剂量的添加回收率 高 ； 而 3 O 、 5 O r n l 溶剂量条件下的平均添加 回收率均在 9 0 以上。从降低成本考虑 ， 最后确定提取液用量为 3 O r n l 。 2 1 3 提取时间的选择。采用振荡加超声 的方法进行提 取 ， 选择在振荡机上振荡 2 h ， 再在超声器上提取 1 5 mi n进行 添加回收试验。与不用超声和使用提取液浸泡过夜的方法 作 比较， 不用超声提取只振荡 2 h的情况下 添加 回收率 配位作用 氢键作用 偶极作用 范德 华力作用。有机物的极性越强， 在氧化铝上的吸附越强。吸 附剂的活性与其含水量有关， 含水量越低 ， 活性越高。在选 择洗脱剂的过程中， 选择石油醚 一 三氯甲烷 一 异丙醇作为洗 脱剂， 弱极性的有机分子先流出， 通过试验发现， 前 5 m l 淋洗 液中不含腈菌唑， 可以弃去。最后确定石油醚 一三氯甲烷 一 异丙醇 ( 2 0 ： 3 0 ： l ， ) 淋洗体积为2 O ml 。 2 2 提取与净化方法的回收率与相对标准偏差通过空白 样品添加一系列浓度的腈菌唑标样 ， 按照以上提取和净化方 法制备待测样品， 其检测结果见表 l 。 表 1 提取方法的加标 回收率试验结果 Ta b l e 1 Th e r e c o v e r i e s o f t h i s e x t r a c t i o n me t h o d 由表 l可知， 辣椒 中腈 菌唑添加浓 度为 0 0 11 0 0 m g k g时 平均回收率为 9 4 3 9 8 8 ， 相对标准偏差为 2 1 5 4 ， 符合农药残留分析检测的标准。 经上述方法净化后 ， 辣椒样品气相色谱 图见 图 1 。由图 1可知， 在腈菌唑的保留时间 1 4 5 m i n 前后没有大的吸收峰 干扰， 可以说明该净化方法是合理的。 图 1 净化后的辣椒样品色谱图 Fi g 1 Chr o ma t o g r a m o f p e p p e r s a mp l e s a f t e r pu rific a ti o n 2 3 检测方 法的建立 2 3 1 进样口温度的选择。进样 口温度首先必须满足要检 测组分瞬间气化 ， 使所要检测组分完全进入色谱柱。但温度 太高可能会使样品组分分解， 也会缩短色谱柱的使用寿命。 常温下腈菌唑的汽化温度在 2 2 0左右。最终选择设定进 样 口温度为2 6 0。 C。 2 3 2 进样量和进样速度的确定。进样量主要是由所定仪 器条件下的灵敏度确定 ， 选用分流进样模式 ， 可以适当加大 进样量 ， 减小进样误差 ， 但进样量太大会增加色谱柱的负载， 导致柱子固定相流失加快 ， 缩短柱子使用寿命。最后确定的 进样量为 2 l 。 进样速度的确定应当是保证所要检测组分能和其他物 3 8卷 5期 谭龙 波等腈菌唑在辣椒 上的残 留检测方法研究 2 2 1 5 质有效分开， 且样品峰具有 良好 的对称性。最后确定的柱压 为 6 0 6 0 k P a ， 氮气流量为 6 0 ml mi n 。 2 3 3 色谱柱的选择 。根据腈菌唑极性不强的特点， 选择 弱极性的毛细管色谱柱 H P - 5作为分析柱。规格为 3 0 m O 3 2 mm 0 2 5 m 。 2 3 4 程序升温条件的选择。被检测组分在柱子里面进行 分离的过程中， 升温速率会影响被检测组分的流速和峰形 ， 当应用毛细管色谱柱分析宽沸点组分时( 常压下腈菌唑的沸 点为2 0 2 2 0 8) ， 一般均采用程序升温。在程序升温开始 时， 为使被检测组分和其他杂质有效分离， 应保持较缓的升 温速度( 不高于 1 0 C mi n ) ， 温度升到高于腈菌唑 的沸点 5 左右时。 可以加快升温速度直到终温， 以缩短分析时间。 选用初温 1 5 0， 保持2 ra i n ， 以6 C m i n 升至 2 1 ， 保 持 2 m i n ， 以 3 0 m i n升至 2 8 0， 保持 3 m i n作为升 温 程序。 2 3 5 检测器的选择。I x E C D - N i 检测器适合分析含高电 负性元素或基团的有机化合物 ， 主要用于含 卤素的有机化合 物。由腈菌唑的结构可知， 分子中含有电负性元素 c l ， 所以 采用 Ix E C D N i ” 检测器。 图 2 腈菌唑标样色谱 图 F i g 2 Ch r o mat o g r a m o f s t a n d a r d Myc l o b u t an i l 2 3 6 尾吹气流量 的确定。尾吹气流量的大小决定被检测 组分在色谱柱中的流速， 同时适合的尾吹气流量可以及时吹掉 残留在色谱柱中高沸点组分， 尽快稳定仪器条件。但尾吹气流 量太大会导致色谱峰拖尾， 也是不必要的浪费。对于在毛细管 色谱柱条件下使用 E C D检测器 ， 一般使用 5 0 7 0 m l m i n 的 流量。经过试验最终确定尾吹气的流量为 6 0 m l m i n 。 + -+-+* +“+”+ +”+-+一+” 卜 w卜 ”+ + +“十-+*+一+ +-+-+ ( 上接第 2 2 1 0页) 参考文献 1 甘肃省统计局 甘肃统计年鉴 2 0 0 7 M 北京： 中国统计出版社 ， 2 0 0 7 2 王光远 未确知信 息及其数学处理 J 哈尔滨建筑工程学院学报， 1 9 9 0 ( 4 ) ： 1 1 2 3 岳常安， 吴和琴 未确知有理数论 M 石家庄： 河北教育出版社， 2 0 0 1 4 董俊， 蒲秀英， 邱丙益 未确矢 理论在通信训练效果评价中的应用 J 由图 2 可知， 在上述气相色谱条件下， 腈菌唑的保留时 间为 l 4 5 m i n ， 峰形较好。 2 4 检测方法标准曲线的建立 由图 3可知， 检测方法的 回归方程为 y=1 6 2 9 8 x+ 3 4 8 9 2 ， R =0 9 9 9 4 ， 线形良好， 能 满足农药残留分析方法的要求。 苎 x 娶 帽 质量 M a s s n g 图 3 腑菌唑标准曲线 Fi g 3 Th e s t a n d a r d c u r v e o f M y c l o b u t a n i l 3结论 ( 1 ) 建立了杀菌剂腈菌唑在辣椒上的残留提取及检测方 法。按照该提取方法 ， 辣椒中腈菌唑添加浓度为 0 0 11 0 0 m g k g时 ， 平均回收率为 9 4 3 一9 8 8 ， 相对标准偏差为 2 1 5 4 ； 建立的检测方法的标准曲线的回归方程为 Y = 1 6 2 9 8 X+ 3 4 8 9 2 ， R = 0 9 9 9 4 ， 说明建立的方法精密准确 ， 操作简便且适用范围较宽 ， 能满足