肿瘤超早期筛查在体检中的应用.ppt

,preMiD肿瘤（超）早期预警筛查 体检中的应用,癌症分子解析 preMiD技术在肿瘤早期筛查中的应用 案例分享 总结,主要内容,恶性肿瘤现状,恶性肿瘤已成为人类的“头号杀手”。 全球每年新发肿瘤1400万人，死亡约820万人。预计2025年，因人口增加和老龄化等因素，每年新增超2000万病例。 “2012年中国肿瘤登记年报”数据表明，中国每年新发肿瘤约310万人，死亡270万人（右上图）。 近60年来癌症致死率没有明显下降（右下图）。,世卫组织（WHO）：早发现 早诊断 早治疗,“三早”是关键，“早发现” 是根本!,目前还无法攻克癌症（尤其是中晚期）； 癌症可防、可治： 癌前阶段：可实现近100%预防 早期癌症：可以实现80%治愈率 晚期癌症：仅30%人活过5年。,按照平均寿命74岁计算，人一生中患癌几率是22%。 从年龄看，45 岁以后发病率上升明显，应在40岁开始重视针对肿瘤的专项检查。,2014世界癌症报告 “抗击癌症，重在预防”,癌症的分子解析,ICGC：癌症基因组学研究,国际癌症基因组联盟(International Cancer Genome Consortium，ICGC)2014年2月4日公布超过1万个癌症基因组的数据。 2013年12月5日ICGC宣布：在原来白血病、膀胱癌、胃癌的基础上，中国又发起针对肠癌、食道癌、肝癌的驱动基因检测项目。,“眼下癌症诊治急需新的途径。如果能更好地从基因组来了解癌症，那么将更有利于癌症的预防和控制。“ Tom Hudson 安大略癌症研究所（OICR）所长、ICGC创始人之一,,致癌突变（oncogenic mutations）到肿瘤形成需要10-20年； 期间，涉及多基因的异常发生，具有早期性和特异性： （早期性：分子异常是癌症发生的早期事件； 特异性：分子异常是癌症发生的特有标记）,癌变的分子事件,Alfred G. Knudson, Nature Rev. Cancer, 1, 157-162 (2001) Carlo M. Croce, N. Engl. J. Med. 358, 502-511 (2008),原癌基因（Proto-oncogene）,原癌基因是是细胞内与细胞增殖相关的高度保守的基因。 原癌基因的结构或调控区发生变异，基因产物增多或活性增强时（此时转化为癌基因），使细胞过度增殖。,抑癌基因（Tumor Suppressor）,抑癌基因一般调控DNA的修复和细胞凋亡。 在被激活情况下它们具有抑制细胞增殖作用。 抑癌基因突变能导致活性降低或消失，从而减弱甚至消除抑癌作用。,Sanger研究所：Cosmic数据库,Emerging landscape of oncogenic signatures across human cancers Nature Genetics 45, 11271133 (2013),http:/cancer.sanger.ac.uk/cancergenome/projects/cosmic/,肠癌中基因异常发生率 Gao H. et al, Cancer Res., 54, 4342-4346 (1994) Morgan C. et al, Br. J. Cancer, 89, 1314-1319 (2003),preMiD技术 在肿瘤早期筛查中的应用,传统检测,突变检测,癌症的“冰山学说”,早期癌症几乎没有症状，极其容易被传统检测所忽视，一旦检出，则大部分为中晚期。 preMiD超早期防癌检测，提前约3年预防发现潜伏体内的癌症或癌前病变。,preMiD超早期防癌检测，提前临床症状3-5年预警！,preMiD技术检测的是来自于肿瘤相关的原癌基因和抑癌基因的异常突变。,基因突变类型如下：,血液循环肿瘤DNA（ctDNA）来源,Nat Rev Cancer. 2011 Jun;11(6):426-37,ctDNA由癌变细胞死亡、凋亡或主动分泌进入循环系统 cfDNA的长度一般为100-500碱基，携带有癌症细胞内部所含异常信息，如突变、copy数变化、甲基化、融合基因及染色体异常等。 血液中含有驱动突变或致癌突变分子，意味身体内有癌变细胞。,“ctDNA是最有希望发现早期癌症” 美国约翰霍普金斯大学Luis Diaz博士 Free-floating DNA from tumor could provide early warning！ USA today,分子癌变阶段 （8-10年）,细胞癌变阶段 （3-5年）,细胞簇形成,组织形成,早癌（1-3年）,中晚期癌（？）,1.不死 2.无限增殖 3.表型正常,1.逃避免疫监视 2.形成新血管 3.异性增生,常规手段可以检测,preMiD可以,血浆突变检测技术 - preMiD,preMiD = Blocker + ASA + MCA,突变偏向扩增系统（ASA） PCR引物的3端位必须和突变扩增子匹配，而野生不匹配 采用特异探针，实时PCR反应,熔解曲线分析（Melting Curve Analysis） 荧光vs温度作图得到DNA熔解曲线 DNA溶解曲线是DNA序列的“指纹”,核酸blocker阻滞野 生扩增 设计野生匹配blocker（含PNA修饰） 阻滞对野生片段扩增,三种已有技术的有机结合成preMiD，灵敏度达到0.01%，特异性近100%。,美国斯坦福癌症研究院近30年调查研究发现： 癌前阶段，癌症是可逆性“工程”。,消除突变，抑制癌变,正常DNA,DNA突变 （肿瘤驱动基因）,DNA修复,抑癌基因诱导凋亡,免疫监视,失败,癌,干预 （突变逆转）,早发现与早预防,突变筛查,免疫力,远离致癌物,干预,突变定量分析,1.对于有基因突变的受检者，同时加做突变定量值，便于后期干预有效性的对比； 2.随着样本量的增加，跟踪后续发展变化，将给出突变风险提示。,突变值,QRAM-qPCR相对定量检测肿瘤特异突变位点在血浆中含量在干预前后的变化，判断效果。,干预有效性判断,主要用途： 1. 直观反应干预或治疗方案的有效性，避免无效治疗。 2.评估手术后患者基本状态，如体内有无残留或转移。 3.判断有无复发。,preMiD专业性,preMiD,德国标准生产质控体系,国际公认检测内容,COSMIC数据库，包含突变基因及位点信息，属于国际最权威机构最新研究成果。,国家批准专有检测试剂,美国Roche检测仪器,注册号: (进)字 2009 第3402689号,preMiD血浆突变技术验证： NSCLC组织和血浆中EGFR突变一致性研究,试验单位： 北京协和医院、浙江大学附属第一医院、江苏省肿瘤医院、青岛大学附属医院 Sanger测序1212例非小细胞肺癌患者肿瘤组织EGFR突变； preMiD法检测对应1212例血浆EGFR突变。,总体结果： 阳性符合率为80.49%，阴性符合率为94.66%，总符合率为90.35% （唯一完成临床试验研究，血浆-组织突变一致性最高的结果）,（已完成CFDA批准临床实验，2011年12月28号-2013年12月28号）,中国唯一入选国际肿瘤学术大会ASCO会议的主讲报告,中国医师协会preMiD项目专家论证会,ctDNA 在国际上的应用,NDRG4, BMP3,NDRG4, BMP3, KRAS,总灵敏度：92% sensitivity 早期肠癌灵敏度：94% 特异性：87%,ColonGuard （EXACT）,ColonVantage (QUEST),ColoVantage 检测血浆中SEPTIN9的甲基化状态，达到检测和预警结直肠癌的目的。 ColoVantage 是一种无创的检测方法 灵敏度达到70% 特异性达到89% 适用于各个分期的结直肠癌,ctDNA在甲状腺癌检测中的应用,基因检测对甲状腺肿瘤诊断的准确率在80%以上 突变检测能够应对病理检测不能确定的情况,Nikiforov YE et al, J Clin Endocrinol Metab. 2011 Nov;96(11):3390-7,案例分享,preMiD检测：FLT3突变,案例一： FLT3基因突变，2年半后诊断大肠癌中晚期,个人不相信，不愿面对， 没有采取必要干预措施,案例二：,KRAS突变,检测者：男性，35岁，重庆人 家族史：其父患肺癌 进行preMiD检测：KRAS基因突变,KRAS突变,报告解读： 结合健康问卷及专家咨询 其父患肺癌 作息紊乱 干咳、胸闷 近期没有体检资料 结合该情况给出建议： 进行胸部增强CT检查， 判断突变在哪个阶段 （临床前期或临床阶段）,KRAS突变,2014年5月8日 右肺下叶斜裂旁小结节影 肝左叶多发小囊肿,KRAS突变 干预方案,匹多莫德口服液 服用方法： 1支（10ml）/次，2次/日（早晚空腹服用） 3个月为一周期,KRAS突变- - 跟踪随访,2014年9月9日 胸部CT增强未发现肿瘤,干预后4个月进行突变复查及突变定量分析：复查结果，基因仍有突变，并对再次突变情况进行与第一次的定量值分析，突变较之前下降。,KRAS突变- -复查及定量,案例三：,THR-基因突变,检测者：男性，41岁，南京人 进行preMiD检测：THR-基因突变,THR-基因突变,报告解读： 结合健康专家咨询 作息紊乱 20年吸烟史，每日1包 近期没有体检资料,THR-基因突变,右颈部、颌下多发小淋巴结，部分淋巴结FDG代谢增高； 甲状腺瘤可能,THR-基因突变- - 干预方案,胸腺肽a1方法： 1支（1.6mg）/次，1次/周，皮下注射 3个月为一周期,干预后3个月进行突变复查及突变定量分析：复查结果：突变消失。,THR-基因突变- - 干预方案,病理：肺腺癌,案例四： EGFR突变确诊6mm早癌,检测者男性，62岁，无锡人士，某医院院长，体检发现肺内有6mm孤立影，不能确定其性质，经preMiD检测发现EGFR突变。,该检测者在上海肺科医院行胸腔镜手术，取出病理为肺腺癌。,案例五： FHIT突变确诊胃癌晚期,检测者男性，62岁，机关干部，既往慢性胃病史，平时喜食蒜泥等刺激食物。经preMiD检测：FHIT突变，后追加蛋白标志物FMD1值异常升高。,建议进一步胃镜检查，结果为低分化腺癌晚期，对化疗均不敏感。,病理：低分化腺癌,案例六： 宫颈癌复发监控案例,检测者女性，29岁，2012年12月确诊宫颈癌，术后、放、化疗后。2013年5月经perMiD检测发现FHIT-exon8位点和HLA-A-c.835CT位点有突变，确诊为术后复发。,案例七： 鉴别：前列腺癌or前列腺增生（BPH）？,PSA700, 前列腺癌？！,PSA=25， BPH？,总 结,preMiD检测原理,preMiD技术检测的是来 自于肿瘤相关的原癌基因和抑癌基因的异常突变。,ctDNA由癌变细胞死亡、凋亡或主动分泌进入循环系统，携带有癌症细胞内部所含异常信息，如突变、copy数变化、甲基化、融合基因及染色体异常等。 血液中含有驱动突变或致癌突变分子，意味身体内有癌变细胞。,男性18肿瘤： 肺癌、肝癌、胰腺癌、胃癌、食道癌、肾癌、甲状腺癌、结直肠癌、 膀胱癌、黑色素瘤、胆管癌、淋巴瘤、脑胶质瘤、胆囊癌、头颈癌、 前列腺癌、急性髓性白血病、骨髓增生异常综合症 女性18肿瘤： 肺癌、