课件：血型鉴定、交叉配血中若干.ppt

孙利,值班人员血库上岗前培训,卫生部规定,血型“正反“鉴定 Rh“”鉴定 交叉配血能检测出部分不完全抗体 血型不规则抗体筛查试验和定性鉴定 标本保存天以上 资料保存年,基础概念,抗原是能与特异性抗体或免疫细胞在体内、外发生反应的物质，并常常可引起特异性免疫应答。 抗体是指体内免疫系统所产生的蛋白质，为对某种抗原引起反应所形成，且能与该抗原或相近的抗原发生特异性反应。 不完全抗体在生理盐水中与相应的红细胞不产生可见反应(不凝集),需通过其它介质(胶体、酶、抗人球蛋白血清等）才能出现可见的抗体。 不规则抗体 是指抗A和抗B以外的血型抗体,基础概念,血型早期 仅指存在于红细胞上表面抗原的差异，现在 包刮白细胞、血小板表面抗原的差异。 血型可分ABO、RH、MNSs等血型系统，共有9系统共有400多种抗原。 亚型：指虽然属同一血型抗原，但结构和性能上有一定差异 血型抗体：IgG IgM IgA IgD IgE 天然IgM 免疫 IgG 前两者最多见。,基础概念,ABO血型系统：1900年卡尔兰德斯坦那发现 根据红细胞上是否有A和B抗原将人类分四种血型。 A型：红细胞含有A抗原，血清（浆）中有B抗体。 B型：红细胞含有B抗原 ，血清（浆）中有A抗体。 AB型：红细胞含有A、B抗原，血清（浆）中无AB抗体。 O 型：红细胞上无A、B抗原，血清（浆）中有A、B抗体。,基础概念,血型物质：每个人专有的血型抗原物质。主要存在于红细胞，广泛存在于其他组织和体液中。两种形式 醇溶性 水溶性 意义 鉴定血型 鉴定抗体性质 可测脏器和组织血型,嘉 兴 市 第 一 医 院 （嘉兴医学院附属第一医院） 临 床 输 血 申 请 单 No：000000 预定输血日期： 年 月 日 时 肯定输血手术备用酌情备用 受血者姓名： 性别：（男/女） 年龄： 病案号： 科别： 病区： 床号： 临床诊断： 输血目的： 继往输血史（有/无） 孕 产 受血者属地：（本市/外埠 ） 预定输血成分（类型）： 预定输血量： 受血者： ABO血型： Rh(D)血型： 血红蛋白： ， HCT： ，血小板： ALT： U/L，HBsAg： ， Anti-HCV： Anti-HIV1/2： ，梅毒： 申请医师签名： 主治医师审核签名： 申请日期： 上/下午 时 采血者签名： 收样本者（血库）签名： 注：请医师逐项认真准确填写，请于输血日前送输血科/血库。 受血者姓名： 受血者姓名： No：000000 病案号 ： 病区： 床号 病案号： 病区： 床号： 血型： No：000000 血液类型： 申请量：,血型鉴定,卫生部临床输血技术规范规定：正反鉴定 标准抗血清、标准血球、必须符合国家标准 正鉴定-用已知标准抗血清 定血球 反鉴定-用已知标准血球 定血浆或血清 手工试管法 （具体操作见操作规程) 操作要点:取两支小试管，各加被检者2-5%红细胞悬液200微升+分别用抗A、抗B标准抗血清在不同的管子中加2滴，用离心1000-1500转/分，3分钟后，在显微镜下看结果。,血型鉴定,卡式微量凝胶法 (具体操作见操作规程) 操作要点：被检者1%红细胞悬液，前四孔加50微升，后两孔加血浆50微升，(前2孔是正定型，第3孔是D，第4孔是对照，第5、6是反定型）放专用的离心机离心5分钟，沉底部的是阴性，在上层或中层算阳性。 注意观察： 1、正反结果是否一致， 2、D孔红细胞是否沉降，在上层或中层结果是阳性,红细胞沉底部阴性者（需进一步用手工法，单克隆抗D试剂确定，操作方法：2-3%红细胞悬液+2滴单克隆抗D试剂，放置37水域15分钟，用1500转/分，离心3分钟，在显微镜下看结果，凝集为阳性，无凝集为阴性。）,血型鉴定及影响因素,凝胶微柱法 专用仪器试剂 标准化 微机化 质量控制 正反定型结果不一致 技术失误 假阴性 假阳性 血清问题 被检者红细胞问题 免球致敏 遗传或获得性表面异常多凝集,血型鉴定影响因素,异常基因 亚型中弱抗原 近期输血 呈混合外观凝集 嵌和体血型 疾病因素导致抗原减弱 白血病 MDS 血型特异物质过高 卵巢囊肿 血型物质高 获得性B 由革兰阴性杆菌的作用 红C有类B 多凝集、全凝集 细菌感染,血型鉴定影响因素,血浆置换 异常血浆蛋白 不规则抗体存在 低丙种球蛋白血症 不凝集 弱凝集 药物等因素 右旋糖酐 激素 青霉素 年龄因素,血型鉴定,正反定性不一致的解决办法： 重复试验 洗涤被测红细胞 换试剂或方法测 用相关亚型试剂 相关试验加以鉴别 吸收试验 放散试验,h血型鉴定,卫生部要求：鉴定h阴阳性 试管法 抗血清滴被检2-3红细胞悬液滴混匀 1500转/分 离心2分钟 凝集为阳性。阴性：要求37水浴15分钟，离心检测。 卡式凝胶微柱 弱D者：受血者划定h阴性，供血者划定h阳性。,抗人球蛋白试验,测定: 不完全抗体 卡式凝胶微柱法 又分为 间接法 测患者血清中不完全抗体 直接法 测患者红细胞上有无不完全抗体 配受检者1%红细胞悬液，取50微升，加入到抗人球打蛋白卡中，放专用离心5分钟，红细胞在上层或中层是阳性。,不规则抗体筛查试验和性质鉴定,200年，卫生部临床输血技术规范第十七条规定：交叉配血不合时，对有输血史、妊娠史或短期内需要接受多次输血者。 不规则抗体筛查试验 1 2 3 标准抗原 血型抗体性质鉴定 标准 红细胞谱1-10 测定:是指抗A和抗B以外的血型抗体(完全抗体与不完全抗体),血型不规则抗体的检测,卡式微量凝胶法（具体操作规程见操作卡） 操作要点：取被检者血清（血浆）每孔加50微升（共三孔），+标准不规则抗体筛查约1%红细胞悬液50微升，放置专用37箱15分钟，取出放专用离心机，离心5分钟，红细胞沉底部为阴性，在上层或中层是阳性。,2019/8/21,23,可编辑,交叉配血试验,受血者血清与供血者血球 主侧 受血者血球与供血者血清 次侧 卡式凝胶微柱法 （抗球蛋白卡交叉配血卡） 操作要点：血标本离心3000转/分，5分钟，配检者和供血者0.5-1%的红细胞悬液， 主孔（侧）加受血者血浆（血清）50微升与加供血者血球50微升，次侧（孔）加受血者血球50微升与供血者血浆（血清）50微升，放37专用箱15分钟，取出，用专用离心机离心5分钟，观察结果：红细胞在上层或中层为凝集（阳性），红细胞两孔红细胞均沉底部为阴性，表示：供受者相容相合。,注意,在交叉配血中，如发现某孔弱凝集（凝胶层中有拖带），必需复检，（包刮：供、受两者血型鉴定，原方法、凝聚胺交叉配血法、）。确认安全，才可发出。 如，在卡式交叉配血中出现，次侧不合，首先复检受、供血者的血型，ABO和RHD血型相同，应加做抗人球蛋白试验，如患者阳性，与临床联系，说明，患者血球上有不完全抗体，建议临床改输洗涤红细胞，并马上向市血站约出洗涤红细胞。 如出现正反鉴定不一致，必须重新鉴定，并用手工试管法进行正反血型鉴定，以试管法为准，如仍然不一致，马上反馈给主任处理。,交叉配血注意点,标本是关键 核对 采集 操作 规范 决不放过疑点 弱凝集 溶血现象 输血基本原则：ABO、Rh“”血型相同，配血相合可输 标本保存 7天以上,例如 卡式凝胶微柱法（博迅）,凝聚胺原理,红细胞表面带有大量的负电荷，以避免其产生自发性聚集，当红细胞悬浮在电解质时，阳离子会被红细胞的负电荷所吸引，此时红细胞则被扩散的双层离子云所围绕，而形成Zeta电位， Zeta电位决定红细胞之间的排斥作用。 凝聚胺技术首先利用底离子溶液（LIM），降低介质的离子强度，减少红细胞周围的阳离子云，以促进红细胞和血清（血浆）中的抗体结合。 其后，加入凝聚胺（Polybrene）溶液，它是一种高价阳离子多聚物，肝素中和剂，溶解后能产生很多正电荷，可以中和红细胞表面带有的负电荷，使红细胞Zeta电位降低，缩短红细胞之间的距离，使红细胞产生非特异性的凝聚。最后，加入悬浮液（Resuspending），Resuspending具有中和凝聚胺（Polybrene）阳离子的作用，使正常的红细胞非特异性凝聚散开，试验结果为阴性，但如果红细胞被应的抗体致敏，则会被凝聚胺凝结，凝集就不会散开，试验结果为阳性。,凝聚胺法,1、取3支试管分别标记（主、次、混） 2、5%红细胞制备：取25ul样本压积红细胞悬浮于500ul生理盐水中。 3、主侧：受血者血浆2滴+5%供血者红细胞1滴。 4、次侧：供血者血浆2滴+5%受血者红细胞1滴。 5、将主侧管和次侧管所加的所有成分都加入混合管中。 6、主侧管、次侧管、混合管中各加入低离子介质溶液600ul,混合均匀，室温放置1分钟。 7、再分别向3管中加入凝聚胺溶液2滴混合均匀，室温放置15秒钟。 8、置离心机内3400rpm/15秒，倒去上清液，使管底保留约0.1ml的液体。 9、目测管内有无红细胞凝集块，若没有凝块，则必须重做。 10、向红细胞已发生凝集的试管内加入2滴复悬液，轻轻混匀，显微镜下观察结果（红细胞凝块散开为阴性反应，示血交叉配型相合；若红细胞仍凝集成块为阳性反应，示血交叉配型不合。,可引起血清学问题的一些临床疾病,DAT阳性 类风关 多凝集现象 细菌感染 A/B抗原表达减弱 白血病 ABO异常 卵巢囊肿 获得性B抗原 细菌感染、结肠癌、肠梗阻 Kell血型系统抗原抑制 慢性肉芽肿病 溶血 PNH、红细胞酶缺乏、过度加热 温性自身抗体 癌、HLE 冷性自身抗体 冷凝集素疾病、淋巴瘤、梅毒、病毒感染,可引起血清学问题的一些临床疾病,串钱状凝集 多发性骨髓瘤 ABO同种抗体缺乏或减弱 低（无）丙种球蛋白血症 免疫性ABO抗体 新生儿、妊辰 自身（同种）抗N 血液透析病人 HLA抗体 经产妇、移植病人、多次输血者 ABO同种抗体的缺乏或减弱 3岁新生儿 70岁老年人,药物的使用与血型血清学疑难问题,假凝集 血浆扩张剂 串钱状凝集 右旋糖酐 混合外观红细胞 输异型红细胞、骨髓（最近或过去） 获得额外抗原 同上 DAT阳性 输注/注射免疫球蛋白 意外的同种抗体 输注含同种抗体的血浆、 输注过免疫球蛋白 以往输红细胞免疫 意外的ABO同种抗体 输注冷沉淀、 因子浓缩剂、血小板,血浆,发血浆注意 1、无血型的，必须进行正反血型鉴定并且需复检血型确认。同型发血浆。 2、患者红细胞上有不完全抗体存在，一般情况下，不发血浆。如患者确实需要血浆，需用凝聚胺交叉配血后，相合、相容可发。 3、因市血站给我院是少浆血和血浆是1：1供给，故血浆紧缺，一般情况下，单要血浆，我们只能供给1-2包，除临床说明患者病情危急，我们尽量满足临床。,血小板,收到血小板输血单，无血型的，必须进行正反血型鉴定并且需复检血型确认。 马上向是血站要或预约好，并且在单子上注明，已约、几月几日。 发机采血小板与血浆一样，只要同型输注。 如手工血小板必须进行交叉配血，相合、相容才可发血小板。,住院收费程序,选择“住院病人信息管理系统” 选择“住院部工作系统” 用户部门选择“血库”，用自己的帐号登陆 选择“医技科室自己记帐” 选择“检查治疗记帐输入” 输入病人的病区和床号，在“助记码”一栏输入要收费的项目的拼音首字母，然后按回车，选择收费的项目，在“数量”一栏输入相应的数量，然后回车。例如“冰冻血浆”输入“BDXJ”，拼音不分大小写。,Rh(D)阴性患者输Rh(D)阳性血两难选择： 不输血：生命危险，“行政不作为” 输 血：中央台医疗纠纷官司报道：天津某医院 年轻女性RH（D）阴性，因车祸，急诊输RH(D)阳性血，（2002年）现在，告，法院判：医院输,负担60%-。2008年齐鲁医学院附属医院，一位年轻女子 Rh(D)阴性患者等了6小时，Rh(D)阴性血还是没有等到，后患者死亡。 ？“两利相存取其重，两害相存取其轻”,？,？,患者急需输血抢救生命，血型难定，怎么办？ 没有同型血，怎么办？ Rh(D)阴性患者输血，找不到Rh(D)阴性血，怎么办？ 交叉配血不合，怎么办？,疑难血型（A1HA，亚型）鉴定花费时间与紧急输血