泰乐祺科技推出发酵乳中黄曲霉素M1专业解决方案.doc

泰乐祺科技 推出发酵乳中黄曲霉素M1专业解决方案 针对近日来国家质检总局公布了的蒙牛乳业（眉山）和福建长富纯牛奶抽查的产品被检出黄曲霉毒素M1超标的问题。蒙牛乳业对此向民众进行了致歉申明，反应了民族企业的责任心和对食品安全的重视。对于黄曲霉毒素M1的限量，在之前的相关食品卫生标准中有明确规定，其中：鲜乳及其乳制品（折算为鲜乳汁）不得超过0.5ug/kg;婴儿代乳食品不得检出黄曲霉毒素b1。（GB 2761-2005国家标准食品中真菌毒素限量 GB 9676-2003国家标准乳及乳制品中黄曲霉毒素M1限量！ 黄曲霉毒素主要存在于谷物、坚果、花生、棉籽粉、玉米、干辣椒粉等食品中以及一些与人类血液，动物饲料相关的产品中。霉菌的生长并不一定表明黄曲毒素的存在，因为黄曲毒素只有在湿度、温度适合及通风良好才会生成。黄曲霉素B类具有蓝色荧光，G类具有绿色荧光。除了蔬菜中常见的(B1,B2,G1,G2)，还有存在喂食了有毒饲料的奶牛的牛奶中的黄曲霉素M，其中毒性最高的M的代谢物为4羟基化的产物Bs.黄曲霉毒素M1是黄曲霉毒素B1的羟基化代谢产物，也是一种强致癌物质。其危害巨大，人类日常消费食品中如牛乳及其制品是易受到黄曲霉毒素M1污染的食品之一。黄曲霉毒素的危害性在于对人及动物肝脏组织有破坏作用，严重时，可导致肝癌甚至死亡。毒性是砒霜的100倍其实主要是指黄曲霉毒素比砒霜毒。 目前来讲，Aflatoxin M1的检测方法有高效液相色谱法(HPLC)，酶联免疫检测法等。液相色谱法可以精确的检测奶制品中黄曲霉毒素的微小含量。而使用黄曲霉毒素M1 ELISA试剂盒则能够快速而准确的分析样品中黄曲霉毒素M1残留。 作为国内专业从事霉菌毒素检测技术与产品服务的主要供应商， 2010年泰乐祺科技投巨资成立了检测应用实验室，重点关注食品安全事件尤其是涉及霉菌毒素安全等检测技术问题，以期望快速提出解决方案。近期应针对奶中出现的黄曲霉毒素M1超标问题，泰乐祺科技提供了两种检测方案，可以帮助企业轻松应对奶中黄曲霉毒素M1的限量检测。高效液相色谱法：根据国标GB 5413.372010食品安全国家标准乳和乳制品中黄曲霉毒素M1 的测定实验用前处理：实验仪器和好耗材包括：恒温水浴锅溶剂过滤器(带真空泵)1000ml 高速匀质器 黄曲霉毒素免疫M1亲和柱玻璃纤维滤纸 玻璃注射器 无荧光特性玻璃试管 空气压力泵 超声波清洗机 定量滤纸 量筒 样品瓶 容量瓶 移液器或移液管实验用试剂：色谱乙腈色谱甲醇 氢氧化钠 石油醚 超纯水或去离子水等等HPLC条件：高效液相色谱仪色谱柱C18柱，150*4.6mm，5um流动相乙腈水（25：75）荧光检测器：激发波长365nm，发射波长435nm；柱 温室温流速1.0ml/min进样量20ul出峰时间10分钟左右样品取样：真菌毒素分析的最大误差来源是样品的收集和取样过程，所以必需保证样品收集和取样具有代表性。样品前处理：分不同样品发酵乳(包括固体状、半固体状和带果肉型)：称取适量奶粉样品，用于蒸馏水中，调节PH值至微碱性，高速均质器匀浆，水浴加热后离心，取上清液混合均匀使其充分溶解，离心离心用上清液过柱净化；免疫柱净化步骤：完全符合GB/T 18980-2003取出免疫亲和层析柱, 恢复至室温，将上方塞子取出斜剪断，再插回亲和柱上。将免疫亲和柱连接于玻璃注射器下。准确移取清澈液注入玻璃注射器；将空气压力泵与玻璃注射器连接，调节压力使溶液以约2-3mL/min流速缓慢通过免疫亲和柱，直至23mL空气通过柱体；更换玻璃注射器与亲和柱连接，在注射器中加入10ml水，调节压力使水以约6mL/min流速清洗亲和柱。准确加入4mL色谱级乙腈洗脱，流速为1 mL/min 2mL/min，收集全部洗脱液于玻璃试管中，供检测。注：收集管中的洗脱液即为纯化后的样品，可直接用ELISA,荧光和高效液相等方法检测。HPLC 检测需要仪器与耗材产品名称说明规格黄曲霉毒素M1固体标准品参比对照使用100ug 1mg 黄曲霉毒素M1液体标准品浓度0.5ug/ml, 溶于乙腈1ml PriboFast 黄曲霉素M1免疫亲和柱用于 样品前处理柱 分析黄曲霉素25/50TPriboFast泵流操作架（8位）用于免疫亲和柱净化样品处理，方便控制流速黄曲霉毒素检测专用玻璃纤维滤纸用于去除HPLC检测时部分杂峰，有效提高灵敏度。110，1.5um100P不锈钢均质器高速匀浆样品，有效提高萃取效率旋转蒸发仪-超声波发生器酶联免疫检测法：符合国家标准 酶联免疫检测法采用竞争ELISA，在微孔板上预包被黄曲霉毒素B1抗原，加入样本（或黄曲霉毒素M1标准品溶液）及辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素M1抗体。样本或标准品溶液中的黄曲霉毒素M1与预包被在板孔上的黄曲霉毒素M1抗原竞争结合辣根过氧化物酶标记的黄曲霉毒素M1抗体。未结合的酶标抗体在洗涤时被除去。再加入TMB显色液，读取吸光值。样本的吸光值与其所含残留物黄曲霉毒素M1抗原的含量成负相关。对照标准曲线，即可得出相应残留物黄曲霉毒素M1的含量。样品处理牛奶 直接离心取上清液用于检测奶粉及其他固状奶制品：需要溶解于去离子水中，离心取上清液用于检测试剂盒检测时间：30分钟30分钟交叉反应率：Aflatoxin M1100%Aflatoxin B18%Aflatoxin B210%Aflatoxin G17%Aflatoxin G25%ELISA 方法检测需要：说明PriboFast 黄曲霉毒素M1酶联免疫检测试剂盒检测范围 (0.1 ppb 8.1ppb)96孔雷勃半支灭菌移液器（彩色）多个量程：0.5-10; 20-200; 5-50; 1000-5000ul支雷勃八道半支灭菌移液器量程： 5-50ul; 50-300ul支酶标仪进口、国产仪器，台分析人员要求：化学分析仪器及其相关专业或有高效液相色谱仪操作经验的人员。注：作为面向全球提供霉菌毒素检测技术解决方案的主要服务商之一，PriboLab凭借强大的研发团队和霉菌毒素检测技术的研究，为全球农业生产、