家兔血浆中北豆根碱的高效液相色谱法测定及药动学研究

精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创1/7家兔血浆中北豆根碱的高效液相色谱法测定及药动学研究作者朱孝芹，臧亚如，张欢，刘翠哲【摘要】目的建立家兔血浆中北豆根碱（RM）的HPLC分析方法，并对RM静注给药在家兔体内药动学过程进行分析研究。方法采用乙腈、二氯甲烷沉淀蛋白质并提取药物，采用HPLC法测定。色谱柱为DISCOVERYC18柱（MM250MM，5M）；流动相为乙腈水磷酸1684VVV；检测波长208NM；柱温为室温；流速MLMIN1；动物实验使用家兔6只，采用静脉注射给药（10MGKG1），进行血药浓度测定和药动学参数计算。结果家兔血浆内源物质对药物测定无干扰，在血药浓度MGML1范围内，浓度对峰面积有良好的线性关系，R8，提取回收率大于85，方法回收率在之间；日内、日间精密度RSD均小于10（N5）。北豆根碱在家兔体内的血药浓度时间曲线符合二室模型。结论该法准确、简便、灵敏，可用于北豆根碱在兔体内药动学的研究。【关键词】北豆根总碱；高效液相色谱法；家兔；药动学ABSTRACTOBJECTIVETOESTABLISHANHPLCMETHODFORDETERMINATIONOFDAURICINEINRABBITSPLASMAANDSTUDYTHERELATEDPHARMACOKINETICSINRABBITS精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创2/7AFTERPROTEINWASPRECIPITATEDWITHACETONITRILEANDDICHLOROMETHANE,DAURICINEINPLASMAWASDETERMINEDONHPLCWITHUVDETECTIONAT208NM,ANDTHEMOBILEPHASEWASACETONITRILEWATERPHOSPHORICACID1684,RUNNINGATAFLOWRATEOFMLMIN1WEDETECTEDTHECONCENTRATIONOFDAURICINEINPLASMAANDCACULATEDPHARMACOKINETICPARAMETERSBY6RABBITSAFTERINJECTION10MGKG1RESULTSDAURICINEANDENDOGENOUSCOULDBESEPARATEDITSCALIBRATIONCURVEWASLINEARR8WITHINRANGEOFMGML1,THEEXTRACTIONRECOVERYWASMORETHAN85,THEMETHODRECOVERYWASWITHINRANGEOF,THEINTRADAYANDINTERDAYPRECISIONWASLESSTHAN10N5THECONCENTRATIONTIMECURVEOFDAURICINEINRABBITSPLASMACOULDBEFITTEDTOTWOCOMPARTMENTMETHODISSENSITIVE,SIMPLEANDACCURATEITISSUITABLEFORTHEPHARMACOKINETICSTUDYOFDAURICINEINRABBITSKEYWORDSDAURICINEHPLCRABBITSPHARMACOKINETICS精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创3/7北豆根为防己科植物蝙蝠葛MENISPERMUMDAURICUMDC的干燥根茎，有清热解毒、祛风止痛作用，其有效部位是生物碱，现已知北豆根中含有近二十种生物碱，总碱含量可达1以上，其中含量最高的生物碱为RM，其含量约占总生物碱的50左右1。临床及实验均证实RM有良好的抗心律失常作用，且RM延长心肌动作电位时程作用存在剂量依赖性2。此外，北豆根碱还有抑制动脉血栓形成3、抗氧化4、抗肿瘤等5作用，具有广泛的应用前景。本实验采用单剂量静脉注射给药的方法，检测北豆根碱在家兔体内的血药浓度，应用3P87软件计算药动学参数。1仪器与试药802B型台式离心机；802B型台式离心机；LG16W型离心机；ZH2型全自动涡流混合器；JASCO高效液相色谱仪（UV15紫外可见光检测器，RU1580泵，CKCHOM色谱工作站，日本）；北豆根饮片，市售，承德产，经鉴定为蝙蝠葛；北豆根碱，对照品，自制（含量）；无水甲醇、磷酸为分析纯；甲醇、乙腈为色谱纯。2方法与结果色谱条件色谱柱为DISCOVERYC18柱（MM250MM，5M）；流动相为乙腈水磷酸1684VVV；检测波长精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创4/7208NM；柱温为室温；流速MLMIN1。对照品储备液精密称取北豆根碱对照品60干燥至恒重MG置25ML容量瓶中，用流动相溶解并定容，作为对照品储备液。样品处理方法6精密吸取家兔血浆1ML，加乙腈ML，二氯甲烷4ML，旋涡混合5MIN，3000RMIN1离心15MIN，将有机相转入10ML离心管中，剩余水相再加入二氯甲烷2ML，同法萃取并离心，合并2次萃取液，40水浴，N2吹干，残渣用流动相ML定容，充分溶解后，16000RMIN1离心5MIN，取上清液20L进样。标准曲线的制备取空白血浆1ML置离心管中，加入北豆根碱对照品溶液，使其浓度分别为，MGML1，按“样品处理方法”项下操作，以RM峰面积对RM血药浓度进行回归，其回归方程为Y108X103，R8N7，线性范围为MGML1。血浆样品典型色谱图见图13。回收率测定分别取空白血浆1ML，准确加入北豆根碱对照品溶液，配制高中低3个浓度的血浆样品，按“样品精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创5/7处理方法”项下操作，使其最终浓度为，MGML1，同时配制相同浓度的北豆根碱对照品水溶液进行测定，每个浓度测定5次。计算提取和方法回收率。结果见表1。表1RM血浆样品回收率壹（略）精密度测定将高、中、低浓度的对照品血浆分别进行日内精密度和日间精密度测定。结果见表2。表2RM血浆样品的日内和日间精密度（略）家兔血浆样品测定健康家兔6只，雌雄兼用，雌兔无孕，体重KG，于耳缘静脉注射给予北豆根碱，剂量为10MGKG1。于给药前和给药后2，5，10，20，30，45，60MIN及，2，4，6，8，12H在另一侧耳缘静脉采血,置肝素化离心管中，3000RMIN1离心15MIN，分离血浆，40贮存备用。血浆样品照“”项下处理，测定。将实验结果绘制血药浓度时间曲线如图4所示。应用3P87软件进行模型拟和。以AIC和拟和优度（R）为判别指标，确定血药浓度为二室模型。结果RM在家兔体内过程符合二室模型，其相关药动学参数见表3。表3药动学参数（略）3讨论家兔静脉注射10MGKG1北豆根碱后，药物自中央室向周边室分布很快，T1/2约为5MIN，药物从中央室消除精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创6/7也较快，T1/2约为1H，VD值大于实际的体液体积，说明北豆根碱因脂溶性强而在体内广泛分布。有文献报道78，北豆根碱口服给药，在大鼠和狗体内存在着胃肠循环，CT曲线明显存在着双峰现象。狗大剂量50MGKG1口服给药时，药物消除为非线性，T1/2，CL，AUC等重要参数显著改变。但由于种属差异的问题，在兔体内是否也存在这一现象，尚需进一步研究。在本实验中，从高效液相色谱图上可以看出，在给定的实验条件下，血浆中杂质不干扰测定，说明本实验的样品处理方和色谱条件可行，通过3P87药动学软件处理数据，北豆根碱在家兔体内符合二室模型，可做为人体药动学研究的参考。【参考文献】1徐国钧，徐珞珊，何宏贤，等中国药材学M北京中国医药科技出版社，19962GUODL,ZENGFD,HUCJEFFECTSOFDAURICINE,QUINIDINE,ANDSOTLOTONACTIONPOTENTIALDURATIONOFPAPILLARYMUSCLESINVITROJACTAPHARMACOLSIN，1997，183843刘俊田，邱培伦，高小利山豆根碱对实验性血精品文档2016全新精品资料全新公文范文全程指导写作独家原创7/7栓形成的影响J西安医科大学学报，1991，121334何丽娅，李立中，吴基良，等蝙蝠葛碱的抗氧化研究J中草药，1997，28（8）4795叶祖光，王金华，孙爱续，等粉防已碱、甲基莲心碱、蝙蝠葛碱增强长春新碱诱导人乳腺