五味子质量优劣对五味子甲素、乙素含量影响的研究 论文正文

毕业论文（设计）题目五味子质量优劣对五味子甲素、乙素含量影响的研究指导老师专业班级生物技术及应用0701姓名学号2010年5月30日摘要人工经验鉴别五味子质量优劣与现代分析手段检测所得结论间的相互关系。本文用高效液相的分析方法，甲醇超声处理五味子样品，甲醇乙腈水为流动相，检测波长为224NM，30个不同批次的五味子药材作为研究对象，对五味子中的有效成分甲素、乙素进行鉴定分析。结果发现不同批次的五味子中五味子甲素含量变化较大，并与人工经验判别有一定相关性，一等样品的五味子甲素含量在16MG/G以上，二等样品均低于05MG/G，中间较难判断等级的样品差别较大，高的甲素含量为415MG/G，低的甲素含量为018MG/G，而乙素含量基本比较稳定，在16MG/G20MG/G之间。因此经验判别对药材优劣的判断是一种可靠的方法，企业可以利用这种快速和直观的方法对药材进行初步而有效的筛选，提高企业生产效率，节省开支。关键词五味子；质量优劣；五味子甲素；五味子乙素目录引言11材料与方法111实验材料112实验试剂213实验仪器214实验方法315标准曲线的制备316供试品检测结果317线性关系42结果与分析53讨论6参考文献7引言五味子甲素和乙素是五味子中的一类主要有效成分，具有抗氧化、抗肿瘤、护肝降酶、抑制肿瘤细胞多药耐药性的产生、对抗心肌灌注性损伤等多种生物学活性。是诸多五味子药材及其制剂质量评价中的一个通常采用的质量指标，多种含有五味子的中成药用其作为指标性成分进行质量控制。本文研究五味子质量优劣对五味子甲素、乙素含量的影响。五味子甲素和乙素最常见的分析方法有薄层色谱扫描法1,2,反相高效液相色谱法35，高速逆流色谱法6等。五味子乙素在254NM处有最大的吸收峰，因此常采用254NM处的吸收波长进行测定。HPLC法是目前最常用的分析方法。据报道，最佳的两种样品的预处理方法是甲醇或乙醇回流法和甲醇或乙醇超声法。流动相体系采用甲醇水（酸水或盐溶液体系）7，乙腈水体系8，乙腈水甲醇体系9等。本研究采用甲醇超声处理五味子样品，甲醇乙腈水为流动相，检测波长选224NM。1材料与方法11实验材料实验材料为采购时间、采购地点以及质量等级不同的北五味子。共选取五味子30批，产地主要为黑龙江、吉林、辽宁等东北三省。采购时间为2008年6月2009年3月之间。被分析的五味子对象具体编号情况如表11。邀请企业与浙江省药检所有经验的药物鉴别人员按照北五味的外观进行分等，鉴别时采用双盲法，综合几位判定人员的意见进行结果判定。具体的参照标准为一等五味子呈不规则球形或椭圆形，表面紫红色或红褐色,皱缩,肉厚,质柔润，内有肾形种子12粒果肉味酸,种子有香气,味辛微苦干瘪脸不超过2；二等五味子表面黑红,暗红或淡红色,皱缩,肉较薄,干瘪粒不超过20，其它同一等。以油性大、紫红色、肉厚、气味浓者为质量最佳。表11北五味子的具体情况及编号编号采购地采购时间编号采购地采购时间1黑龙江2008年6月16吉林2009年3月2黑龙江2008年6月17吉林2009年3月3辽宁2008年6月18吉林2009年3月4吉林2008年6月19黑龙江2009年3月5吉林2008年6月20黑龙江2009年3月6北潮2008年6月21辽宁2009年3月7磐安2009年1月22黑龙江2009年3月8磐安2009年1月23辽宁2009年3月9磐安2009年1月24辽宁2009年3月10磐安2009年3月25苍南2009年3月11磐安2009年3月26苍南2009年3月12磐安2009年3月27长白山2009年3月13磐安2009年3月28长白山2009年3月14磐安2009年3月29长白山2009年3月15吉林2009年3月30长白山2009年3月12实验试剂乙睛色谱纯，德国MERCK公司甲醇色谱纯，德国MERCK公司哇哈哈矿泉水甲醇分析纯，衙州巨化试剂有限公司微孔滤膜油膜，04M五味子甲素对照品（0764200807，供含量测定用，中国药品生物制品检定所提供）五味子乙素对照品117065200707，供含量测定用，中国药品生物制品检定所提供13实验仪器电子分析天平梅特勒托利多AL204分析天平，称量范围001G200G戴安高效液相色谱仪；DIAMONSILC18柱250X46MM,5UMDIKMA超声波清洗器KQ100型超声波清洗器，昆山市超声仪器厂架盘药物天平（马头牌BPII型，称量范围05G一500G，上海医用激光仪器厂）150ML磨口具塞锥形瓶10ML的容量瓶14实验方法精确称取05G五味子样品粗粉过2号筛加入25ML甲醇后称重，超声30MIN后加甲醇补重，静置30MIN后取上清液用04M的微孔滤膜油膜过滤，取第三次的滤液作为供试液待测。检测与分析色谱柱为DIAMONSILC18柱（25046MM，5M），流动相为甲醇水乙腈70237，流速为10MLMIN1，柱温为25，检测波长为224NM，进样量10L，保留时间为30MIN。15标准曲线的制备五味子甲素乙素标准液制备精密称取68MG五味子甲素、82MG五味子乙素加入到10ML容量瓶中，用甲醇定容至刻度，超声溶解后于4条件下保存。分别将储备液稀释为34，68，102，136，170MG100ML1的甲素标准溶液和41，82，123，164，205MG100ML1的乙素标准溶液。将标准溶液用04M的微孔滤膜油膜过滤后进样量LL按上述分析条件进行HPLC分析。以五味子甲素和乙素的浓度为横坐标、峰面积为纵坐标作图，得浓度与峰面积关系的工作曲线图11。02406801201460182024062803203502046081021406180五味子甲素乙素25五味子甲素乙素2UV_IS1MAUMIN16753983196573914357461958172065WL24NM图11五味子甲素与五味子乙素标准品色谱图16供试品检测结果高效液相的分析方法，用甲醇超声处理五味子样品，甲醇乙腈水为流动相，检测波长为224NM，30个不同批次的五味子药材作为研究对象，对五味子中的有效成分甲素、乙素进行鉴定分析，其中一个供试品图谱，如图12。020460810201460182002460283020350215203756270851,2501,4五味子甲素乙素23五味子甲素乙素2UV_IS1MAUMIN1936071527639410956765135082461579183974691456WL24NM图12供试品色谱图17线性关系以五味子甲素和乙素的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标作图，得出五味子甲素和乙素峰面积与浓度的线性关系见图13、图14。五味子甲素标准溶液的线性方程Y80441X035，R209999，结果表明五味子甲素含量在0034到五味子甲素标准品五味子乙素标准品五味子甲素供试品五味子乙素供试品0170MGML1范围内与峰面积有良好的线性关系，见图13；五味子乙素标准溶液的线性方程Y33244X003，R209994，结果表明五味子乙素含量在0041到0205MGML1范围内与峰面积有良好的线性关系，见图14。图13五味子甲素的标准曲线图14五味子乙素的标准曲线2结果与分析表21经验鉴别样品的等级与样品中五味子甲素与乙素含量的关系表等级编号五味子甲素含量（MG/G）五味子乙素含量（MG/G）二等2023175二等3039168二等4043156二等6028188二等9046175二等12035186二等16026192二等20034169二等22026178二等27032186一等7195179一等11168182一等15183193一等17225178一等18278186一等19192195一等24356196一等25263188一等29212194一等30176172中间1018164中间5194178中间8218185中间10188184中间13164176中间14198186中间21264194中间23338183中间26314196中间28415186根据14的实验方法，对30种北五味子样品进行了五味子甲素和乙素含量的检测，结果见表21。总体上来说，不同批次的五味子中五味子甲素含量变化较大，并与人工经验判别有一定相关性，而乙素含量基本比较稳定，在16MG/G20MG/G之间，含量与人工经验判别的相关性不是很大。根据人工经验判别的30个样品中，归结为一等的10个样品的五味子甲素含量均在16MG/G以上；而归结为二等的10个样品的五味子甲素含量均低于05MG/G。而中间较难判断等级的样品的五味子甲素含量差别较大，高的28号样品五味子甲素含量为415MG/G，低的1号样品五味子甲素含量为018MG/G。3结论在分级明显的五味子样品中，人工经验鉴别的分级与五味子甲素含量呈现出一定的相关性，由于受人工经验判别的局限，对于有些药材的细分并不能真实反应药材的真实质量，因此五味子甲素含量的分级比人工经验鉴别的结果更加具有说服性。而五味子乙素由于含量变化不大不能反应出样品质量的等级区别。因此，五味子甲素含量可以作为五味子药材质量优劣评价的指标之一。根据已经测定的三十批五味子样品，建议将五味子甲素含量列入五味子的质量优劣评价指标体系中来。按照上文方法测定的结果，优等品的五味子甲素含量不得低于16MG/G，而五味子甲素含量低于05MG/G的五味子应该划入劣等品等级中。五味子甲素含量介于两者之间的需结合其他指标进行质量分级。参考文献1赵恒,徐景仁北五味子及其制剂三苓丹胶囊中五味子乙素的薄层光密度法测定J药物分析杂志1995,15133352王胜春,贺雪梅,樊亚萱薄层扫描法测定五灵胶囊中五味子乙素的含量J第四军医大学学报1998,44784793黄萍,王体强HPLC法测定护肝颗粒剂中五味子乙素含量的探讨J重庆医科大学学报2002,2721671704MEIJUANXU,GUANGJIWANG,HAITANXIEETALDETERMINATIONOFSCHIZANDRININRATPLASMABYHIGHPERFORMANCELIQUIDCHROMATOGRAPHYMASSSPECTROMETRYANDITSAPPLICATIONINRATPHARMACOKINETICSTUDIESJJOURNALOFCHROMATOGRAPHYB2005,82855615胡晓斌,李颖HPLC测定生脉胶囊中五味子甲素和乙素的含量J华西药学杂志2003,1821411426TIANHUIHUANG,PINGNIANGSHENETALPREPARATIVESEPERATIONANDPUIFICATIONOFDEOXYSCHISANDRINANDSCHISANDRINFROMSCHISANDRACHINENSISBAILLBYHI