不同预处理对发酵虫草菌粉甘露醇含量测定的影响 论文正文

毕业论文（设计）题目不同预处理对发酵虫草菌粉甘露醇含量测定的影响指导老师专业班级生物技术及应用0701姓名学号2010年5月30日摘要本实验为提高测定结果的准确性，对甘露醇含量测定前常用的两种预处理方法（加热水浸提和乙醇回流抽提）进行多重分析比较。以经典的氧化还原滴定法为基础，对加热水浸提和乙醇回流抽提进行直接比较，交叉比较，综合比较，相对误差分析。结果表明加热水浸提的测出量达到发酵虫草菌粉甘露醇实际含量的95以上，相对误差很小，准确性高；乙醇回流抽提的测出量则不足实际含量的70，相对误差较大，准确性低。所以在发酵虫草菌粉甘露醇含量的测定中，样品预处理采用加热水浸提更好。关键词发酵虫草菌粉；甘露醇；预处理；含量测定目录引言11材料、试剂和仪器111材料112试剂113仪器214实验方法2141供试品制备2142测定方法2143计算公式2144乙醇回流抽提3145加热水浸提3146交叉验证42结果与分析521两种不同预处理对甘露醇检测效果的影响522对两种不同的预处理方法的分析53结论5参考文献7引言D甘露醇1是天然虫草2主要药理成分之一，但天然虫草是名贵中药，价格昂贵，而发酵虫草菌粉价格便宜，且化学成分及药理作用与天然虫草非常相似，具有广阔的开发价值。近来的临床3、药理研究报道，甘露醇3不但具有利尿脱水、治疗便秘4、镇咳、祛痰和平喘之功效，而且能清除人体内毒性最强的羟自由基，并对众多疾病具有明显疗效，这与冬虫夏草具有补肺益肾、止血化痰、强身健体的作用是一致的。甘露醇的测定方法有氧化还原滴定法、薄层扫描法、分光光度法等，但在实际应用中多采用药典规定的氧化还原滴定法。以往多使用95乙醇对发酵虫草菌粉样品做回流提取57处理，但是乙醇提取不够经济，提取率低，不够稳定。据此本文比较了乙醇回流抽提和加热水浸提两种预处理方法，并以甘露醇含量提取得率为指标，确定最佳预处理方法。1材料、试剂和仪器11材料发酵虫草菌粉杭州雪域生物技术有限公司提供12试剂高碘酸钠国药集团化学试剂，分析纯硫酸汕头市西陇化工厂有限公司，分析纯乙醇汕头市西陇化工厂有限公司，分析纯碘化钾汕头市西陇化工厂有限公司，分析纯可溶性淀粉汕头市西陇化工厂有限公司，分析纯硫代硫酸钠汕头市西陇化工厂有限公司，分析纯高碘酸钠溶液取5硫酸溶液90ML与01高碘酸钠母液110ML混合制成13仪器高速中药粉碎机武义县屹立工具有限公司，型号QE250克电热鼓风恒温干燥箱上海市崇明实验仪器厂，型号101A1电光分析天平上海精科厂，型号TG328AS电热恒温水浴锅上海东星建材试验设备有限公司，型号HHS24台式电动离心机金坛市科兴仪器厂，型号80014实验方法141供试品制备将发酵虫草菌粉供试品在65下烘干、粉碎、过20目筛。取发酵虫草菌粉约05G，精密称定。分别用95乙醇和蒸馏水进行浸提，用蒸馏水定容至50ML，得到浓度为10MG/ML的供试品液，再按测试需要用蒸馏水稀释成所需浓度待测。142测定方法参照药典方法精密量取5ML待测液于250ML碘量瓶中，精密加入高碘酸钠溶液250ML，置沸水浴上加热15MIN，放冷，加入碘化钾试液（1650）50ML，密塞，置暗处5MIN，即用浓度为00210MOL/L的硫代硫酸钠滴定液（浓度经基准重铬酸钾标定）进行滴定，滴定至接近终点时，加淀粉指示液（050）10ML，再滴定至兰色消失即停。滴定结果用空白对照校正后，得出滴定液净消耗量。根据净消耗10ML滴定液相当于含03826MG甘露醇，计算出供试品中甘露醇的含量。143计算公式120386VMBAC）（式中C甘露醇的百分含量；A空白所消耗硫代硫酸钠标准溶液体积ML；B样品滴定消耗的硫代硫酸钠标准溶液体积；M样品质量G；V1样品处理定容体积ML；V2测定时所用的体积ML；03826每1ML01000MOL/L硫代硫酸钠标准溶液相当于038262G甘露醇。144乙醇回流抽提取发酵虫草菌粉约05G5份，精密称定。用定量滤纸包好，另取2张定量滤纸作空白对照，分别置入250ML索氏抽提器中，用150ML95乙醇在80条件下回流抽提10H（实际情形是抽提至45MIN时，抽提液已呈无色状态），趁热蒸馏去乙醇至余液约20ML时，加入25ML蒸馏水，继续蒸馏出残留乙醇，余液无损转移至50ML容量瓶中，用蒸馏水定容，得到乙醇提取法的供试品液。根据本测量系统的线性范围，取上述供试品液10ML分置各碘瓶中，各补加蒸馏水40ML，按142所述方法得到测定结果，见表11。表11乙醇回流抽提测定发酵虫草菌粉甘露醇的含量编号发酵虫草菌粉（G）滴定液消耗量（ML）甘露醇含量（）平均值（）RSD123456（空白）7（空白）050030500405005050030500200000000002069207320702075207422662264749734745727730737130145加热水浸提取发酵虫草菌粉约05G5份，精密称定。分置50ML三角瓶中，再取2个空三角瓶作对照，各加入25ML蒸馏水，置80水浴锅中浸提10H，浸提液经离心沉淀后，无损转入50ML容量瓶中，残渣用蒸馏水洗涤2次，离心沉淀后，将上清液无损转入容量瓶中，定容得到水提取法供试品液。精密量取上述供试品液10ML分置各碘瓶中，再各补加40ML蒸馏水，按142所述方法得到测定结果，见表12。表12加热水浸提测定发酵虫草菌粉甘露醇的含量编号发酵虫草菌粉（G）滴定液消耗量ML甘露醇含量平均值（）RSD8910111213（空白）14（空白）0500205001050030500105000000000000019971994199519961995226422661025103710321029103310326044146交叉验证将前述乙醇回流抽提产生的药渣，分置玻璃表皿上65烘干，放入50ML三角瓶中，并设2个空白对照，按加热水浸提制备7个供试品液。各精密量取20ML供试品液于碘瓶，再补加30ML蒸馏水，按145所述方法测出乙醇回流抽提药渣甘露醇的残留含量。同法，将加热水浸提产生的药渣和2个空白对照按乙醇回流抽提制备7个供试品液，按144所述方法测出加热水浸提残渣甘露醇的残留含量，见表13。表13交叉验证供试品药渣中甘露醇的残留量先乙醇，后水提取组先水，后乙醇提取组编号滴定液消耗量ML甘露醇含量编号滴定液消耗量ML甘露醇含量120893371224903122087340222480323207534432247034420833384225002952081352522510276（空白）22656（空白）22657（空白）22667（空白）2265平均甘露醇残留量（）3422；RSD144平均甘露醇残留量（）0306；RSD8832结果与与分析21两种不同预处理对甘露醇检测效果的影响对于同一发酵虫草菌粉供试品，经乙醇与水先后交叉提取后。测得的甘露醇含量之和，应当最逼近其真实含量，但因两次交叉提取的程序不同，其测定结果仍有差异，见表21。表21发酵虫草菌粉甘露醇实际含量逼近值先乙醇,后水提取组先水,后乙醇提取组编号甘露醇含量编号甘露醇含量11086810562107491069310891010664106511105851082121060平均甘露醇含量10792RSD090平均甘露醇含量10618RSD052由表可得出乙醇回流抽提的提取得率仅为发酵虫草菌粉甘露醇6829，而加热水浸提的提取得率则达到9568。22对两种不同的预处理方法的分析在发酵虫草菌粉甘露醇含量测定中，测量方法相同，但预处理方式不同，其测定结果差异很大。无论直接实验对比，还是在交叉实验对比中，加热水浸提测定结果的RSD均小于乙醇回流抽提。3结论以经典的氧化还原滴定法为基础，对加热水浸提和乙醇回流抽提进行直接比较，交叉比较，综合比较，相对误差分析。结果表明加热水浸提的测出量达到发酵虫草菌粉甘露醇实际含量的95以上，相对误差很小，准确性好，精确性高；乙醇回流抽提的测出量不足实际含量的70，且相对误差较大，准确性差，精确性低。所以在发酵虫草菌粉甘露醇含量的测定中，加热水浸提优于乙醇回流抽提。参考文献1刘极健甘露醇的应用和生产J化学工程师,2000,7741422吕瑞棉,杨永春,杨云鹏等冬虫夏草化学成分的研究J药学通报,1981,169553孙成秀,永录,龙小慧等甘露醇的临床新用途J新医学19