河北地区汉族人群megsin基因多态性与糖尿病肾病的相关性研究

河北地区汉族人群MEGSIN基因多态性与糖尿病肾病的相关性研究河北医科大学学位论文使用授权及知识产权归属承诺本学位论文在导师或指导小组的指导下，由本人独立完成。本学位论文研究所获的研究成果，其知识产权归河北医科大学所有。河北医科大学有权对本学位论文进行交流、公开和使用。凡发表与学位论文主要内容相关的论文，第一署名单位为河北医科大学，试验材料、原始数据、申报的专利等知识产权均归河北医科大学所有。否则，承担相应的法律责任。研究生签名会娟导师签章揍二级学院领导盘章加LF年厂月罗。日河北医科大学研究生学位论文独创性声明本论文是在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名余捅导师签章例年R月；O日IIIFI删Y1900532目录中文摘要1英文摘要4研究论文河北地区汉族人群MEGSIN基因多态性与糖尿病肾病的相关性研究前言“”“”一“”一8日IJ舌”“”一”“”“”“”“”“”一”一毯材料与方法9实验方法11结果”一“14附图17附表”一20讨论一一“”一“一”25结论一”“一“”一”“28参考文献28综述糖尿病肾病易感基因研究进展3L致谢一“”“”“”“”40个人简历41中文摘要河北地区汉族人群MEGSIN基因多态性与糖尿病瞥病的相关性研究摘要目的糖尿病肾病DIABETIC衰竭ESRD的主要病因之一。近年来，糖尿病肾病的发病率逐年升高，给社会和家庭都带来的沉重的经济和精神负担。国内外多项研究表明，糖尿病肾病的发病与多元醇通路激活、蛋白激酶C激活、氧化应激、肾血流动力学改变、血管活性物质、细胞因子、易感基因背景等多方面因素有关，但糖尿病肾病的具体发病机制目前尚未确切明了。因此，探索DN的发病机制及防治策略成为目前国内外。肾脏病学者热切关注的课题。AWITHTOCELLPREDOMINANTGENEHOMOLOGYMEGSINMESANGIALSE叩IN是一种在系膜细胞优势表达的基因，属丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族。MEGSIN和7个内含子。研究证实MEGSIN在糖尿病肾病的肾组织中表达增强，与肾脏细胞外基质积聚、肾脏肥大及肾功能受损程度相一致，提示MEGSIN在糖尿病肾病的发生发展中起一定作用。本课题拟通过聚合酶链反应邛艮制性片段长度多态性探讨河北地区汉尿病肾病的诊断及防治提供分子遗传学的理论依据。科及内分泌科住院的2型糖尿病患者158例，按尿微量白蛋白将其分为单纯糖尿病组84例和糖尿病肾病组74例。在糖尿病肾病组中，又根据其尿蛋白及肌酐水平分为微量蛋白尿组42例、临床蛋白尿组15例和肾功能不全组17例。同时随机选取在我院进行体检的健康无糖尿病对照者80例作为正常对照组。分别取各受试者的肘静脉血3ML，用于提取基因组DNA及检测各项生化指标。用聚合酶链反应限制性酶切片段长度多态性法中文摘要油三酯、肌酐、尿素氮等生化指标，测量血压、身高、体重，计算体重指MASS数BODYC2093T各基因型分布频率进行检验。对所有计量资料均进行正态性检验，正态分布的资料以均数标准差叉S表示，非正态分布的资料采用中位数及四分位数间距表示，计量资料的组间比较用方差分析或秩和检验；计数资料组间比较用X为有统计学意义。结果L各组间的生化指标及临床指标分析与健康对照组相比，2型糖尿病组的BMI、收缩压、舒张压、肌酐、尿病组相比，糖尿病肾病组的收缩压、舒张压、肌酐、尿素氮明显升高白尿组相比，肾功能不全组的病程、收缩压、舒张压、肌酐、尿素、尿蛋白均明显升高PO05或O01。2PCR扩增产物电泳结果及对各基因型HARDYWINBERG平衡检验与限制性内切酶HAEIII反应后，经聚丙烯酰胺凝胶电泳，结果分为以下三2值分别为222、型分布频率符合HDARYWEINBGER平衡，三组研究对象的X334、287，P值均大于O05，说明该研究对象具有较好的群体代表性。3各组中基因型及等位基因的分布率均无明显差异。在糖尿病组中，单纯糖尿病组和糖尿病肾病组的C2093T基因型有显著性差异，糖尿病肾病组的CT基因型频率显著高于单纯糖尿病组4865VS肾病组中，微量蛋白尿组、临床蛋白尿组和肾功能不全组三组间C2093T中文摘要基因型及等位基因无显著性差异。4各基因型间的生化指标、临床指标和糖尿病。肾病发生率的分析。糖尿病患者的各基因型组间年龄、性别、病程、BMI、血压、血糖、HBALC、肌酐、尿素、甘油三酯、胆固醇、尿蛋白排泄率均无显著性差异P值均O05。在糖尿病患者中，糖尿病肾病发生率在CT基因型中为5806，显著高于TT基因型的25OOX肾病发病率的危险度0R_4145，95CI病肾病发病率的危险度OR_1938，95CIO9973770，即CT基因型的患糖尿病肾病的风险是CC基因型的1938倍。5糖尿病发生糖尿病肾病的危险因素分析型糖尿病发生糖尿病肾病的危险因素。结论1河北地区汉族人群存在MEGSIN基因C2093T多态性。2因型可能是2型糖尿病发生糖尿病肾病的易感基因。关键词糖尿病肾病；2型糖尿病；MEGSIN基因；基因多态性英文摘要ASSOCIATIONOFWITHDIABETICMEGSINGENEPOLYMORPHISMIN2DIABETESMEUITUSINTHENEPHROPATHYTYPEHANSOFHEBEIPR0VLNCEABSTRACTONEOFTHEMOSTCOMMONANDOBJECTIVEDIABETICNEPHROPATHYDNISCHRONICOFSERIOUSHASBEENONEOFTHECOMPLICATIONDIABETES，WHICHALREADYMAINFACTORSOFRENALDISEASEINRECENTTHEETIOLOGICALENDSTAGEYEARS，OFDIABETICINCREASEDHAVEMORBIDITYNEPHROPATHYYEARBYYE碣WHICHBROUGHTTHEFLNANCIALANDEMOTIONALBURDENTOMEANDNUMBERHEAVYSOCIETYF锄ILYAOFTHATDIABETICISSTUDIESINDICATEASSOCIATEDWITHACTIVATIONOFNEPHROPAMYANDKINASESTRESS，RENALPOLYOLPROTEINC，OXIDATIVEHEMODYN锄ICPAMWAYCHANGES，VASOACTIVEANDOTHERSUBSTANCES，CYTOKINES，SUSCEPTIBLEGENEMANYFACTORSHO、VEVER，THEOFDIABETICHASNOTBEENPATHOGENESISN印MOPATHYSTUDIEDTHEANDCONTROLOFCLE2URLYTHEREFORE，TOEXPLOREPATLLOGENESISSTRATEGIESDIABETICARENEPHROPATHYVE巧IMPORTANT。WITHATOAMEGSINMESANGIALCELLPREDOMINANTGENEHOMOLOGYSE叩INISTOINHIBITORMESANGIUMPREDOMINAMGENE，BELONGSSE印INSERINEPROTEASELOCATESONHUMANCHROMOSOME113，ABOUT8MEGSINGENE8Q220KB，INCLUDINGEXONSAND7INTRONSSTUDIESCONFIMEDTHATMEOFISEXPRESSIONMEGSINRENALENHANCEDINDIABETICWHICHISCONSISTWITHTHEOFNEPHROPAMMDEGREEEXTRACELLULARMATRIXANDRENALACCUMULATION，RENALHYP咖HYDYS如NCTIONTHESESTUDIESTHATANROLEINT11EMECHANISMSUGGESTEDMEGSINPLAYSIMPORCANTTHEOFOFOCCUNENCEANDDI2LBETICDEVELOPMENTNEPHROPATHYIN也ISWEOBSERVEDT11EBETWEENDIABETICSTUDMRELATIONSHIPNEPHR叩AMYANDOFLIVEDCHINESEHANSINHEBEIMEGSINGENEPOLYMO叩HISMPROLVINCEBYCHAINREACTIONRESTRICTIONUSINGFAGMENTLEN舒HPOLYMO印HISMPOLYMERASEWOULDTOBASISOFTHERESULTWHICHBETHETHEORETICALHELP缸LPROVIDEFOR仃EMOLECULARDIAGNOSIS，ANDATMENTOFDIABETICGENETICSPREVENTIONNEPHROP砒Y4英文摘要ANDMETHODS158WITH2DIABETESMELLITUSWERESUBJECTSPATIENTSTYPERECMITED行OMANDRANDOMLYNEPHROLOGYDEPARTMENTINTHIRDTHEOFHEBEIMEDICALPATIENTSDEPANMENTHOSPITALUNIVERSI够THESET、VOWEREDIVIDEDINTOTOTHEIREXCRETIONRATEGROUPSACCORDINGURINA巧ALBUMIN84WITHOUTAND74WITHDIABETICPATIENTSNEPHROPATHYPATIENTSNEPHROPATHYTHEPATIENTSINDIIBETICWEREDIVIDEDINTO3NEPHROPATHYGROUPGROUPSTOTHEIRLEVELSOFANDSERUMCREATININE42ACCORDINGURINA拶PROTEINPATIENTSWITH5WITHCLINICALAND17MICROALBUMINURIA，1PATIENTSPROTEINURIAPATIENTSWITHRENALTHESAMETIME，80WHOHADMEDICALINSUMCIENCYATPEOPLEEXAMINATIONINOURWERESELECTEDANDWERPENROLLEDASHOSPITALRANDOMLYTHEYNORMALCONTROLBLOODWERETAKENFROMTHEIRCUBITALVEINFORGROUP3MLDNAANDTHEBIOCHEMICALINDICATORSGENOMICDETECTINGEXTRACTINGREACTIONCHAINRESTRICTIONPOLYMERASE1JRAGMENTLEN舀HPOLYMO印HISMUSEDFORC2093TDETECTINGPCRRFLPWEREMEGSINGENETHESAMETIME，THELEVELSOF1C，SEMMUREAANDOTHERBIOCHEMICALMARKERSWERECREATININE，NITROGEN，GLUCOSEWEREMEASUREDANDMASSINDEXDETECTED，BLOODPRESSURE，HEIGHT，WEIGHTBODYWASUSEDFORBMIWASCOUNTEDCHISQUAREANALYSISTESTINGOFMEASUREMENTDA协WEREEQUILIBRIUMMEGSINGENOT，PE丘EQUENCYA11TESTINGFOROFNOMLALDISTRIBUTIONWASASMEAN士S协DARDNORNLALI吼DATAPRESENTEDDATAOFDISTRIBUTIONWASASNONNO咖ALDEVIATIONX士SANDPRESENTEDMEDIANANDOFINTERQUANILERANGEONEWAYANALYSISVARIANCEONEWAYDATATESTWAUSTOMEASUREMENTPERFO肌EDCOMPAREAN0、，AORNONPAR锄ETRICBETWEENWASUSEDTOENUMERATIONDATAGROUPSCHISQUAREANALYSISCOMPAREWASTORISKBETWEEN黟OUPSLOGISTICREGRESSIONANALYSISPE墒MEDANALYZEFACTORSOFDIDBETICIN2DIABETESALLWERECARRIEDNEPHROPATHYTRPEOPERATIONSWASCONSIDEREDTOBEOUTTHESPSS17OSTATISTICALSORWAREPVALUEO05BYSIGNIFICAMSTATISTICALLYRESULT1BIOCHEMICALANDCLINICALTHEPAURAMETERS锄ONGGROUPSCONTROLOFBLOODWITHTHELEVELSCOMPAREDHEALTHYGROUP，THEBMI，SYSTOLIC英文摘要_一BLOODCREATININE，UREAPRESSURE，SENJMPRESSURE，DIASTOLICINWITH2WEREHIGHERPATIENTSTYPESIGNI6CANTLYTRIGLYCERIDES，CHOLESTEROLOFBLOODOROO1THELEVELSDIABETESPO05SYSTOLICLMINWITHDIABETICBLOODCREATININE，UREANITROGENPATIENTSPRESSURE，SELLWITHOUTWERET112U1THOSEINDIABETESSIGNIFICANTLYHI曲ERNEPHROPATHYWITHMICROALBUMINURIAOROOGROUP，A_THYPO051COMPAREDNEPHROP一O，11BLOODURINEWASMCLMLCALSVSTOLICPRESSURE，PROTEINSLGNLNCANTLYHLGHERWITHANDRENALCOMPAREDPROTEINURIAGROUPINSU伍CIENCY铲OUPDISEASEANDCLINICALLEVELSOFMICROALBUMINURIAPROTEINURIA铲OUP，THEGROUPBLOODBLOODCREATMME，PRESSURE，SEMMDURATION，SYSTOLICPRESSURE，DIAST01ICWEREINCREASEDINRENALUREAPROTEINSIGNIFICANTLYNITROGEN，URINA巧OROO1INSUMCIENCYGROUPPO05OFANDTESTOFTHETHERESULTS2ELECTROPHORESISGENOTYPESOFAOF25THEREACTIONPCROFHADLENGM6BPARERMEGSINGENEFRAGMENTHAETHERESULTSOFRESTRICTIONENDONUCLEASEIII，PCRWITHPRODUCTSWEREMEONGELFOLLOWINGELECTROPHORESIS8POLYAC巧LAMIDE25TTTWOPRODUCESTT6BP；GENOTYPEONE行AGMEN昏OFPRODUCESONLYCTO士11AND1THREE厅AGMEN舀SOFPRODUCES行AGMEN鲈S4BP42BP；GENOTRPEANDOF11NLEGSINGEN吨，PE42BP256BPEACH4BP，1OFTHE缸EEWEREVALUESGROUPS222，334，287，PEQUILIBRIUMTHECHISQUARETHEWERESHOWSTHATREPRESEMATIVEVALUESO05THERESEARCHSUBJECTSINV撕OUSOFANDALLELESGROUPS3THEDISTRIBUTIONGENOTYPESOFC2093TDIFFERENCEGENO咖ESTHEREWASNOSIGNIFIC觚TMEGSINGENE2DIALBETICANDANDBETWEENGROUPHEALNLYTYPE行EQUENCIESALLELE仔EQUENCIES2DI2LBETICWASADIFIERENCEMESIGNIFICANTTYPEGROUP，THERECOMROL星RROUPINOFC2093TBETWEENDMANDDIABETICGENOTYPESGROUPINDIALBETICWASOFCTGROUPTHEGENOTYPENEPHROPATHY行EQUENCYIN也EDIABETICTHAN也E疳EQUENCYHI曲ERSIGNIFLCANTLYOFWASNOT3O95，PO05DIFFERENCEALLELE厅EQUENCYOFC2093TWASNODI行ERENCEDIABETICGROUP，THERESIGNIFICANTNEPHROPATHY英文摘要ANDA11ELESMICROALBUMINURIAGENOTYPESAMONGCLINICALGROUP，PROTEINURIAANDGROUPRENALINSU佑CIENCYGROUP。4BIOCHEMICALCLINICALANDA驻DTHEINCIDENCESOFPARAMETERSDIABETICTHENEPHROPATHYTHREEAMONGGENOTYPESINTHEDIABETICWASNOOFGROUP，THERESIGNIFICANTAGE，SEX，DISEASEDURATION，BMI，BLOODPRESSURE，GLUCOSE，SEMMCREATININE，UREA1THECHOLESTEROL，HBAC，URINETHLEEPROTEINVALUESAMONGGENOTYPESGROUPSPDIABETICWHOO05ININCIDENCEPATIENTSOFDIABETICCALTYGENOTYPECT，THEWAS5WAS806，WHICHTHANTHATNEPHROPATHYSIGNI6CANTLYIN25OOHI曲ERPATIENTS、HOCAR巧GENOTYPE7IT5806VS25OO，贮441O，PO05ANDGENOTYPEINCIDENCEOFDIABETICINCTIS4145TIMESTHANTHATNEPHROPATHYINGENOTYPEGENO锣PE10241193845，95CITIMESTHANTHATTT0R416855ANDINGENOTYPECC0R1938，95CIO99737705THERISKFACTORSOFDIABETICIN2DIABETESNEPHROPATHYTYPESHOWEDTHATC2093TLOGISTICRE妒ESSIONANALYSISMEGSINNUCLEOTIDESINGLEDISEASEDURATIONP01YMO巾HISM，ANDBLOODWERETHESYST01ICPRESSURERISKFACTORSOFINDEPENDENTDILBETICIN2DIABETESNEPHROPATHYTYPECONCLUSIONC2093TEXISTSINHEBEIHAN1MEGSINGENEPOLYMO印HISMPOPULATIONC2093TISASSOCIATEDWITH2MEGSINGENEPOLYMO印HISMDIABETICNEPHROPATHY2CTISAIN帅EOF2DIABETES，GENOTYPEPROBABLYSUSCEPTIBILITYGENETYPEDIABETICNEPHROPATHYWORDSDIABETIC2KEYNEPHROPATHY；够PEDIABETES；MEGSINGENEPO】YMO巾HISM7研究论文I河北地区汉族人群MEGSN基因多态性与糖尿病肾病的相关性研究前言糖尿病肾病DIABETICMELLITUS，DM的最常见和最严重慢性并发症之一。近年来，随着社会经济发展，饮食结构改变和社会老龄人群的比例增加，DN的发病率越来越高，已成为西方发达国家终末期肾衰竭的首位病因，也是我国维持性透析人群的主要病因之一。因此，探索DN的发病机制及其防治策略具有极其重要的意义。BASEMENT糖尿病肾病的病理特点为肾小球基底膜GLOMEML2URMATRIX，ECM沉积，最终导致肾小球硬化。DN的具体发病机理尚不清楚，目前认为，DN是多因素综合作用引起的疾病，其发病机制与糖代谢紊乱及由此所致的非酶糖化、多元醇通路激活、蛋白激酶C激活、脂代谢紊乱、高血压所致的肾血流动力学改变、氧化应激、血管活性物质及细胞因子、易感基因背景等方面有关。就其易感基因方面，目前国内外学者已经筛选出了一系列的糖尿病肾病遗传易感基因，如醛糖还原酶基因、载脂蛋白E基因、血管紧张素1转换酶基因、葡萄糖转运蛋白1基因等等。日本学者MIYATA等人从系膜细胞的基因表达库中分离出一种在系膜细胞优势表达的基因MEGSINMESANGIALCELL巾REDOMINANTGENEWITLLAHOMOLO西TOPROTEASE细胞外基质代谢，炎症反应，细胞分化、增殖和凋亡等。已有研究发现，MEGSIN基因在以系膜细胞增生、系膜基质积聚为主要病理改变的糖尿病肾病中水平显著上调，因此推测MEGSIN基因有可能是糖尿病肾病的候选基因。本研究拟通过聚合酶链式反应限制性片段长度多态性CHAINREACTIONRESTRICTION仔AGMENTPOLYMERASELENGTHPOLYMO印HISM，研究论文肾病的发病机制及防治提供分子遗传学的理论依据材料与方法1病例资料11糖尿病组从2009年10月2010年10月河北医科大学第三医院肾内科、内分泌科住院患者中随机选择2型糖尿病患者158例，均符合2010年美国糖尿病协会ADA的糖尿病诊断标准。全部患者按其尿微量白蛋白分为单纯糖尿病组和糖尿病肾病组。糖尿病肾病组又按尿蛋白排泄率及血肌酐水平分为微量白蛋白尿组、临床白蛋白尿组和肾功能不全组。所有研究对象均选择河北地区汉族人。其中男性81例，女性77例，年龄58081242岁。FPG126MDL7OMMOL1或4在伴有典型的高血糖症状或高血糖危象的MDL111患者，随机血糖200MDL111MMOL1。在无高血糖症状时，应通过重复检测来证实标准13。排除标准1妊娠期糖尿病2L型糖尿病3由其他病因导致的其他特殊类型糖尿病如P细胞功能遗传性缺陷、胰岛素作用遗传缺陷、胰腺外分泌疾病如囊性纤维化病及药物或化学品所致糖尿病如治疗AIDS或器官移植后。根据尿蛋白排泄率UAE和血肌酐水平将糖尿病组分为单纯糖尿病组和糖尿病肾病组1单纯糖尿病组在6个月内检测3次，每次间隔2周以上，UAE均20UMIN者为非糖尿病肾病组。入选病例84例，男性43例，女41例。年龄56631271岁。2糖尿病肾病组在6个月内检测3次，每次间隔2周以上，若2次或2次以上UAE20UMIN，且排除其他引起尿白蛋白增加研究论文的原因如糖尿病酮症酸中毒、泌尿系感染、运动、血尿、发热、妊娠等者为糖尿病肾病组。入选病例74例，男性39例，女35例。年龄59721196岁。根据尿蛋白排泄率及血肌酐水平将糖尿病肾病组分为微量蛋白尿组、临床蛋白尿组和肾功能不全组。尿蛋白定量持续在30300MG，且肌酐、尿素氮均在正常范围者。915638年。2临床蛋白尿组UAER持续200UMIN或24H小时尿蛋白定量持续300MG，且肌酐、尿素氮均在正常范围者。入选病例15例，3肾功能不全组BUN及CR连续2次高于正常者，除外酮症酸中毒的暂时性升高者。入选病例17例，男性7例，女10例。年龄60121313岁，病程1559731年。进行体检的无糖尿病者80例，所有入选者均为河北地区汉族人，其中男性43例，女性37例，年龄5649951岁。正常对照组的年龄及性别比例均与糖尿病组相匹配。排除标准有糖尿病、高血压、冠心病、妊娠、脑卒中病史者及心肝肾功能不全者有糖尿病家族史者空腹或餐后血糖异常但尚未达到糖尿病诊断标准者正在服用任何可以影响糖代谢的药物者2仪器及试剂21仪器全自动生化分析仪OLYMPUSAU600，日本OLYMPUS公司电子天平北京赛多利斯天平有限公司紫外分光光度计UV2550PCX型，宁波新芝生物科技公司压力蒸汽灭菌器博迅实业有限公司医疗设备厂超低温冰箱MDF382E，日本三洋公司电热恒温箱上海医疗器械七厂研究论文超纯水系统MILLIQS，美国MILLIPORE公司低温冰冻离心机LABOFUGE400R，德国HERAEUS公司台式小型高速低温离心机5417R型，德国EP公司PCR扩增仪MASTERCYCLEGRANDIENT，德国EP公司电脑三恒多用电泳仪DYVL2型，北京六一仪器厂凝胶成像分析系统BIOPROFIL，法国公司22主要试剂引物上海捷瑞生物工程有限公司DNA聚合酶普洛麦格北京生物技术有限公司TAQDNTP普洛麦格北京生物技术有限公司MARKER北京索来宝生物科技公司HAEIIIFEMLENTAS公司溴化乙锭上海生工生物工程有限公司丙烯酰胺上海生工生物工程有限公司亚甲双丙烯酰胺上海生工生物工程有限公司TEMED上海生工生物工程有限公司过硫酸铵上海生工生物工程有限公司实验方法1标本的采集抗凝，保存在80以下，用于抽提基因组DNA。其余2ML用于检测甘油三酯、胆固醇、血糖、血肌酐、尿素氮等生化指标。2基因组DNA的制备21全血基因组DNA的提取无菌重蒸水，颠倒混匀，使用离心机12000RMIN离心2MIN，弃上清，重复1次。212加饱和碘化钾溶液200“L，旋涡振荡混匀30S。研究论文振荡混匀30S。2141的EP管中；215加异丙醇1ML，颠倒混匀，直至DNA沉淀析出。10000RMIN离心1MIN，弃上清。216加70的冷乙醇溶液1OML洗涤，10000RMIN离心1MIN。弃去乙醇溶液。度水浴箱中将DNA溶液水浴10分钟。离心管中的液体即为基因组DNA，将DNA溶液置于4冰箱保存备用。22基因组DNA浓度及纯度测定值，并得出DNA的浓及纯度。纯度接近18时说明提取的DNA纯度较好。L，并将222根据测得的DNA浓度调整DNA溶液的浓度至LOONU调整好浓度的DNA溶液放置于20冰箱保存备用。3引物合成根据MEGSIN基因序列数据库资料，并且参照文献报道，由上海捷瑞生物工程有限公司合成，上游及下游引物序列分别为TTGACCTATGAAGATTTTAGAG3上游引物5TTGCTTATAAACTACACAGCATATGA3下游引物5AAA扩增片段长度为256BP。4U5UL，PCR反应PCR反应体系总体积为50L，包含LOBU仃ER25MMOLL5UUUL，10MMOLLL，上下游引物100MOLL各1MGCL2DNTPS1ULU4PL，5UUL模板DNAL，剩余量TAQ酶LL，100NU用超纯水补足。PCR反应体系10BU艉R5UL5ULMGCL225MMOLLUMOLL1UL上游引物100UMOL几LUL下游引物100DNTPS10MMOLL1UL研究论文L1ULTAQ酶5UUL4UL模板DNA100NU32L超纯水U合计50ULPCR反应在PCR扩增仪MASTERCYCLEGRANDIENT，德国EP公司退火15S，72延伸30S，进行35个循环，72延伸5MIN。电泳，溴化乙锭染色，BIOPROFIL凝胶成像系统中观察并照相。PL5限制性内切酶酶切取10PCR产物，加入限制性内切酶HAEIII1OPL2UL、10BU艉R2U8L、超纯水1UL，于37水浴箱中孵育6H，酶切产物行聚丙烯酰胺凝胶电泳，溴化乙锭染色，BIOPROFIL凝胶成像系统中观察并照相，判定基因型。酰胺凝胶电泳分离，在256BP处出现1条条带。2酶切产物电泳结果在256BP处出现L条带者为TT型纯合子，在114、142和256BP处各出现3条条带者为CT型杂合子。6临床与生化指标检测型全自动生化分析仪上进行。糖化血红蛋白玎ALC的测定采用上海罗氏公司糖化血红蛋白仪。62记录所有受试者的年龄、性别、病程，测量受试者身高、体重，静休息坐位时上臂肱动脉部位的血压，在不同的时段测量三次，取平均值。否具有群体代表性。对所有计量资料均进行正态性检验，符合正态性分布的资料用XS表示，不符合正态性分布的资料用中位数及四分位数间距表示。组间计量资料比较采用单因素方差分析或秩和检验。各组间基因型及等位基因频率比较采用X2检验，相对风险率采用比研究论文值比ODDS尿病肾病发病危险因素采用LOGISTIC回归分析。所有数据均输入计算机，使用SPSS17O统计软件进行统计分析，PO05为有统计学意义。结果L各组间的生化指标及临床指标分析正常对照组和2型糖尿病组的年龄、性别无显著性差异，说明两组资料具有可比性，与正常对照组相比，2型糖尿病组的体重指数、收缩压、舒张压、肌酐、尿素、血糖、甘油三酯、胆固醇均明显升高肾病组的年龄、性别、病程无显著性差异，说明两组资料具有可对比性，与单纯糖尿病组相比，糖尿病肾病组的收缩压、舒张压、肌酐、病肾病组中，微量蛋白尿组、临床蛋白尿组和肾功能不全组三组之间的年龄、性别无显著差异，与微量蛋白尿组相比，临床蛋白尿组和肾功能不全组的收缩压、尿蛋白明显升高，与微量蛋白尿组及临床蛋白尿组相比，肾功能不全组的病程、收缩压、舒张压、肌酐、尿素、尿蛋白均明显升高PO05或O01，具有统计学意义见表3。2PCR扩增产物电泳结果及各基因型HARDY、斫NBE玛平衡检验结果142BP的两条片断；2093T等位基因不含该酶切位点，不能被酶切。所研究对河北地区汉族健康人群、糖尿病、糖尿病肾病人群研究对象进均有C、T两种等位基因及TT、CC、CT三种基因型。各基因型分布频XK334，糖尿病肾病组X因是群体中稳定存在的基因，具有较好的群体代表性，可对该基因与糖研究论文尿病肾病的关联性做进一步研究。3各组中基因型及等位基因的分布2093CC基因型、CT基因型、TT基因型频率31健康对照组的MEGSIN2093CC基因型、CT基因型、TT基因型频率为30糖尿病组的MEGSIN基因频率均无明显差异基因型频率X频率X20407，PO523见图3，表5。2093CC基因型、CT基因32在糖尿病组中，单纯糖尿病组的MEGSIN2093CC为7381，T等位基因频率为2619，糖尿病肾病组的MEGSINC等位基因频率为7162，T等位基因频率为2838。两组间的C2093T基因型有显著性差异XCT基因型频率明显高于糖尿病组4865VS3095，等位基因频2O190率无明显差异XPO663见图4，表5。2093CC基因型、CT33在糖尿病。肾病组中，微量蛋白尿组的MEGSIN2093CC基因型、CT基因型、TT基因型频率分别为5333、40、2093尿病组的MEGSINCC基因型、CT基因型、TT基因型频率分别为因型频率X21245，PO87L；等位基因频率X图5，表5。4各基因型间的生化指标、临床指标和糖尿病肾病发生率的分析。糖尿病患者的各基因型组间年龄、性别、病程、BMI、血压、血糖、HBALC、肌酐、尿素、甘油三酯、胆固醇、尿蛋白排泄率均无显著性差异P值均O05见表6。在糖尿病病人中，糖尿病肾病发研究论文24410，PO05和CC基因型的4167X病的风险是TT基因型的4154倍。CT基因型和CC型基因相比，糖尿病3770，即CT基因型的患糖尿病肾病的风险是CC基因型的1938倍。5糖尿病发生糖尿病肾病的危险因素分析是2型糖尿病发生糖尿病肾病的危险因素，其LO西STIC回归系数分别为1872，1052，1038。见表8。256BPOFA25INTHEC2093TFIG1PCR锄PLICATION6BPEAGMENTMEGSINGENESMP01YMO印HI234567896OOBP50OBP4OOBPO3OBP256BP2OOBP142BP114BPLOOBPOFTHEPCRRESTRICTION行AGMENTLENGTHPOLYMO印HISMANALYSISFIG2MEGSINC2093TGENEP01YMO印HISMLANE1，DNALADDER；LANE24CT；7，GENOTYPELANE358，GENO够PECC；LANE6TT9，GENO勺，PE17DISTRIBUTIONOFOFTHEECTSINDMANDFIG4MEGSINGENOTYPESUBJGROUPDN鲈OUP18DISTRIBUTIONOFTHEINFIG5OFMEGSINGENOTYPESUBJECTSMICROALBUMINURIAANDRENALGROUP，CLINICALPROTEINURIAGROUPINSU伍CIENCY铲OUPBETWEENC2093TANDDIABETICFIG6RELATIONSHIPMEGSINP01YMO印HISMNEPHROPATHY研究论文附表1OFCLINICALINV撕OUSTABLECHARACTERISTICS锄ONGSUBJECTSCOMP撕SONGROUPS正常对照组糖尿病组例数男女8043371588L77年龄岁564995L58081242病程年83，1424512882625349群BMIKGM2收缩压咖HG123401270132781541群舒张压姗HG752674380OO856尿素氮衄OL154312558L501，713撑肌酐1LM011648613297260，87群血糖咖LL502O4785650，1096群胆固醇姗OLL468O99499116拳152109，209群甘油三酯衄01L127O90，143VSCONTROL1木PO05撑POOHEALTHYGROUPINDMOFCLINICALECTSTABLE2SUBJCOMPARISONCHARACTERISTICS锄10NGANDDNGROUPGROUP单纯糖尿病组糖尿病肾病组例数男女844341743935年龄岁5663127159721196病程年652，10LO5，16BMIKG225772792680409收缩压MMHG128451186137691745撑20一一研究论文舒张压衄HG78608178159877木血糖姗OLL908687，1118803637，1084HBALC829214833155尿素氮衄OL1564146619537，768群肌酐ILM01167401607786775，12625拌胆固醇衄01L499111499122甘油三酯衄01L155114，286136103，191VSDM1GROUP木PO05拌POO1ABLE3OFCLINICALCHARACTERISTICSINCOMPARISONAMONGSUBJECTSMICROALBUMINURIAANDRENALGROUP，CLINICALPROTEINURIAGROUPINSU伍CIENCY微量蛋白尿组临床蛋白尿组肾功能不全组2L一_I_一一一378296，563木J|J017O05O64O38，197木尿白蛋白ING24H一_VSMICROALBUMINURIAGROUP木PO05VSCLINICALGROUPFIPO05PIOTEINURIAHANANDOFINHEBEIPOPULATION4THEGENOTYPESTABLEMEGSINFKQUENCIES望竺塑里翌垒堡婴垒翌旦墨堡一_一一基因型CCCTTT一一观测频数422810正常对照组理论频数39233772X2222PO14观测频数49269理论频数45763248576单纯糖尿病组XPO072334观测频数35363糖尿病肾病组理论频数35963008596PO09X生287OFTHEECTSANDSUBJOFAUELE仔EQUENCIES5DISTRIBUTIONGENOTYPE曲IEMEGSIN正常对照组425250802835OO84531612759糖尿病组1586239248491071单纯糖尿病组263095495833研究论文RABLE6OFCLINICALWITHCOMPARISONCHARACTERISTICS锄ONGSUBJECTSDIFRERENTGENOTYPESTIABLE7BETWEENANDDIABETICRELATIONSHIPMEGSINGENEPOLYMO叩HISMNEPHROPATHY单纯糖尿病例糖尿病肾病例堑壅垒查一一L_一一CC495833354167CT264194365806TT97500325OO一_FATORSFOR2DIABETICOFRISKTYPETABLE8ANALYSISREGRESSIONLOGISTIC呈已坠2里堂Z一一BSEWALDDFSIGEXPB一基因型O627O29445791O0321872O0503746LO0531052病程O026收缩压O037O01288381O0031038L_一研究论文讨论糖尿病肾病是糖尿病最严重和最常见的慢性并发症之一，也是导致终末期肾衰竭的主要病因之一。随着社会经济的发展，糖尿病肾病的发病率逐年升高。糖尿病肾病的病理特点为肾小球基底膜增厚、肾小球系膜区细胞外基质沉积，系膜细胞增生，最终导致肾小球硬化。根据MOGENSEN建议，按照糖尿病肾病的发展及临床表现将糖尿病肾病分为五期I期，肾小球高滤过期，主要表现为肾小球滤过率增高及肾体