[生物医药论文精品]氟尼康的高效液相色谱分析

氟尼康的高效液相色谱分析摘要目的建立了同时检测药物氟尼康中盐酸多西环素、氟苯尼考的高效液相色谱检测法。方法采用HYPERSILODS2（250MM46MM,5M）色谱柱，流动相为乙腈甲醇磷酸二氢铵（01MOLL1）101129，PH350，检测波长为254NM，流速为1MLMIN1。结果实现了氟尼康中盐酸多西环素、氟苯尼考的较好分离；盐酸多西环素在625GML1200GML1范围内线性关系良好，R09994,平均回收率为9929，RSD为051（N3）；氟苯尼考在625GML1250GML1范围内线性关系良好，R09999，平均回收率为9887，RSD为032（N3）。结论该方法快速简便，灵敏度高，重现性好，可作为药物氟尼康质量标准的测定方法关键词高效液相色谱，盐酸多西环素，氟苯尼考，氟尼康DETERMINATIONOFFUNICONBYHIGHPERFORMANCELIQUIDCHROMATOGRAPHYABSTRACTAIMAMETHODFORDETERMINATIONOFDOXYCYCLINEHYDROCHLORIDEANDFLORFENICOLINFUNICONWASESTABLISHEDMETHODSTHELIQUIDCHROMATOGRAPHYWASCARRIEDOUTBYAHYPERSILODS2（46MM250MM,5M）THEMOBILEPHASEWASACETONITRILE,METHANOLAND01MOLL1AMMONIUMPHOSPHATEMONOBASICOFPH35101129ANDTHEFLOWRATEWAS1MLMIN1FUNICONSAMPLESWEREMEASUREDWITHUVDETECTORAT254NMRESULTSTHISEXPERIMENTCANGETABETTERRESULTOFSEPARATIONBETWEENDOXYCYCLINEHYDROCHLORIDEANDFLORFENICOLINFUNICONTHELINEARRANGEOFDOXYCYCLINEHYDROCHLORIDEWAS625GML1200GML1ANDFLORFENICOLWAS625GML1250GML1R09999THEAVERAGERECOVERYOFDOXYCYCLINEHYDROCHLORIDEWAS9929,RELATIVESTANDARDWAS051N3THEAVERAGERECOVERYOFFLORFENICOLWAS9887,RELATIVESTANDARDWAS032N3CONCLUTIONTHEMETHODISSIMPLE,RAPIDANDSENSITIVEWITHGOODREPEATABILITY，CANBEUSEDFORCONTENTDETERMINATIONOFFUNICONKEYWORDSHPLCDOXYCYCLINEHYDROCHLORIDEFLORFENICOLFUNICON盐酸多西环素、氟苯尼考为我国兽药标准兽药国家标准兽药地方标准上升国家标准第一册中批准的内服药。盐酸多西环素（DOXYCYCLINEHYDROCHLORIDE）为四环素类光谱抗生素，主要用于革兰氏阳性和阴性菌感染1。氟苯尼考（FLORFENICOL）为氯霉素类G5203谱抗生素，主要用于G8847G11115G21072、G10494、G10287G2462家G12177类的G13466菌性感染2。我国G2462G8443G11443、G7097G7424G12573国G4557盐酸多西环素和氟苯尼考在动物G1319内G2559量G7389G1017G7696要G8726，G3252G8504G4557于G7389G8847G11115作用的氟尼康中盐酸多西环素和氟苯尼考的G2559量的测定，G19668G7389G1017G7696标准定量测定。药G1868中G2265G2559G1016G12193物质G2520G14270的检测方法，G13792G4557于G1016G12193物质的同时检测G8821G7389相G5224的G16280定。G3252G8504，建立盐酸多西环素和氟苯尼考的同时检测的方法，在药物生G1147和药G2709检G20576G17819G12255中G7509为重要。盐酸多西环素和氟苯尼考的检测方法多采用G15192G4630检测法、G8680相色谱法、液相色谱36G12573。G7424论G7003采用较为简G2345的G9354G2070作为流动相，建立了同时检测G1016G12193物质的高效液相色谱法，方法简便、G12946G11842、检测灵敏度高，分G7524时G19400G11713G12573G1260G9869，可G1209作为药G2709质量标准G2058定的G1393G6466和G2454考。1材料与方法11G1214G3132G994G16809G2070G1214G3132高效液相色谱G1214（LC10ATVPG7097G7424G4719G8953G1856G2508）G18209SPD10AVPG13055G3818检测G3132；TOP色谱G5049作G12461；G19036G12582G5347G5506G4392G9400G14192G17819G9400G3132045MG3837G8953G5078G14162G17810G17819G9400G3132G1226G2390；AL204G11017G4388G3837平（G7769G10317G2214G6188G2045多G1214G3132（上G9035）G7389G19492G1856G2508）；PHS3CPHG16757（上G9035G12946G4506G12197G4410G1214G3132G7389G19492G1856G2508），KQ3200BG3423G17241G3780波G9177G8939G3132（G7130G4677G5078G17241G3780G1214G3132G7389G19492G1856G2508）。G16809G2070盐酸多西环素、氟苯尼考标准G2709、氟尼康（G8839G2283G17840G5461药G1006G6564G1391）；甲醇（色谱G13443，G3837G8953康G12197G5515G1856G2508）；乙腈（色谱G13443，G3837G8953康G12197G5515G1856G2508）；磷酸二氢铵（G3837G8953G5078G2350G17854G2282G5049G7389G19492G1856G2508）；磷酸（G3837G8953G5078G2283方G3837G2319G2282G4410G16809G2070G2390）；G989G8437G14988G20323G8712。12色谱G7477G1226色谱柱G3835G17842G1393G2045G10317G1856G2508，HYPERSILODS2（46MM250MM5MID），流动相为乙腈甲醇磷酸二氢铵（01MOLL1）101129，PH350，检测波长为254NM，流速为1MLMIN1，柱G921330，进样量10L，灵敏度001AUFS。13储备G9354液G18209G2058分别G12946G4506称取盐酸多西环素、氟苯尼考标准G2709G252050MG，置于50ML棕色容量瓶中，用流动相G9354解并稀释至刻度，摇匀，作为储备液，4冰箱冷藏待用。14G1391G16809液的G2058备用研钵将氟尼康研碎后，称取50MG，置于50ML棕色容量瓶中，用流动相G9354解后并定容，作为G1391G16809液，4冰箱冷藏待用。2结果与讨论21流动相的选择实G20576中考察了乙腈G8712、甲醇G8712的不同比例的流动相G4557G1016者的分离效果，盐酸多西环素和氟苯尼考的出峰时G19400相同，不能够G17810到分离。G3252G8504将乙腈、甲醇G1209一定比例混合加入磷酸二氢铵的盐G9354液，G4557G989G12193G9354液比例进行了调节，实G20576中随着乙腈和甲醇比例的增加，G1016G12193物质出峰时G19400同时前移，分离效果渐差；当乙腈比例逐渐增G3835时，氟苯尼考的色谱峰G3423渐差；当甲醇比例逐渐增G3835时，盐酸多西环素的色谱峰G3423G6188尾G1017重；磷酸二氢铵盐G9354液比例增加时，G1016G12193物质出峰时G19400向后推移，且分离效果逐渐变G1260，但盐G9354液加入G17819多时二者保留时G19400较长，且分离不佳。G8504G3818PH值的G11842定也会同时影响二者的分离效果，适当减小PH值，可G1209G17810到较G1260的分离效果。实G20576通G17819调节得到乙腈甲醇磷酸氢二铵G9354液101129，PH350，为最佳比例。22检测波长的选择盐酸多西环素的G13055G3818吸收的最G3835波长为269NM，氟苯尼考的G13055G3818吸收的最G3835波长为220NM，盐酸多西环素和氟苯尼考结构G5347中均G2559G7389苯环，G3252G8504为了使得G1016者都能更好的检测，选定检测波长为254NM。药G2709氟尼康中盐酸多西环素和氟苯尼考的分离色谱图、标准G2709盐酸多西环素和氟苯尼考的分离色谱图分别如图1、2所示A11A2A0A3A4A5A6A7A8A9A10A11A12A13A3A14A4A15A16A17A18A19A20A1FIG1CHROMATOGRAMSOFSEPARATIONBETWEENDOXYCYCLINEHYDROCHLORIDEANDFLORFENICOLINFUNICONA11A22A21A0A7A8A9A10A11A12A13A3A14A4A15A16A17A18A19A20A1FIG2CHROMATOGRAMSOFSEPARATIONBETWEENDOXYCYCLINEHYDROCHLORIDEANDFLORFENICOL23标准曲线的绘G2058G12946G11842移取储备液适量，并将储备液置于容量瓶中，用流动相定容，由G8504逐级稀释得一系列的标准G9354液，用G4392径045M的G7389机系G5506G4392G9400G14192G9400G17819。在12G7477G1226下，进样分G7524，G1209其色谱峰面积（Y）作为纵坐标，G1209分G7524样G2709浓度（C）为横坐标，进行线性回归，绘G2058标准曲线。盐酸多西环素的标准曲线为A23A24A25A26A27A28A29A30A31A32A33A34A35A36A27A28A29A30A31A32Y1061135332106C，R09994在625GML1200GML1浓度范围内线性良好；氟苯尼考的标准曲线为Y29297199105C，R09999在625GML1250GML1浓度范围内线性良好。24回收率G16809G20576分别G12946G4506称量0080G、0100G、0120G的盐酸多西环素和氟苯尼考置于10ML容量瓶，加入适当流动相定容，并定量稀释成约80、100、120GML1的G9354液（每个浓度N3），G17241G3780G9354解，用G4392径045M的G7389机系G5506G4392G9400G14192G9400G17819。G12946G4506吸取上述G9354液10L，注入液相色谱进行分G7524，用标准曲线进行G16757算回收率。测定结果如表1、2所示。A371A38A39A40A41A42A43A44A45A46A47A48A49TAB1PERCENTRECOVERYOFDETERMINATIONOFDOXYCYCLINEHYDROCHLORIDEA50A51A52GA53A54A52GA45A46A47A55A56A57A58A59A60A61A55A56RSDA57A58A59A60A61008000802008009975992105799290510079900788986200803007979925010001004010051001994306501004009989940010030099198800120011950118499089922032012030119899580,1201011899900A622A63A64A65A66A67A59A60A61A68A69TAB2PERCENTRECOVERYOFDETERMINATIONOFFLORFENICOLA70A71A72GA73A74A72GA59A60A61A55A56A57A58A59A60A61A55A56RSDA57A58A59A60A610080008030079198519829020988703200797007829812008000078698250100010010099199009887015010020099198900100500992987101200120501207100179947061012010119199170,120101190990825G12946G4506度G16809G20576将盐酸多西环素和氟苯尼考储备液稀释10倍，分别量取G1016G12193G9354液G252025ML，均匀混合后，注入液相色谱进行分G7524，G17842续进样七G8437，G16757算该方法的G12946G4506度，得到盐酸多西环素的G12946G4506度为RSD087；氟苯尼考的G12946G4506度为RSD072。26稳定性G16809G20576G1391G16809G2709G9354液在G14270然光照射的G7477G1226下，在0、2、4、6、10、12H、24H时测定其主成分峰面积，盐酸多西环素和氟苯尼考二者峰面积基G7424不变，RSD分别为094和083，结果表明G1391G16809G2709氟尼康G9354液在24H内基G7424稳定。3小结经G17819反复G16809G20576，G4557检测方法中使用的G9354G2070、检测波长、流动相G12573分G7524G7477G1226进行了多G8437摸索，找到了一G12193在同一色谱G7477G1226下，实现G4557药物氟尼康中盐酸多西环素和氟苯尼考的同时检测。G7424方法简便、快捷，结果可G19764准G11842。该方法G1146可用G1582药物氟尼康的质量标准的测定方法，灵敏度高，G7186示出较好的分离效果，G2