翠莲解毒胶囊的制备工艺及质量标准初步研究 化学工程硕士论文

工程硕士学位论文翠莲解毒胶囊的制备工艺及质量标准初步研究PRELIMINARYSTUDYONTHEPREPARATIONTECHNOLOGYANDQUALITYSTANDARDOFCUILIANJIEDUCAPSULES作者王娟导师韩相恩教授中国矿业大学二一三年四月学位论文使用授权声明本人完全了解中国矿业大学有关保留、使用学位论文的规定，同意本人所撰写的学位论文的使用授权按照学校的管理规定处理作为申请学位的条件之一，学位论文著作权拥有者须授权所在学校拥有学位论文的部分使用权，即学校档案馆和图书馆有权保留学位论文的纸质版和电子版，可以使用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文；为教学和科研目的，学校档案馆和图书馆可以将公开的学位论文作为资料在档案馆、图书馆等场所或在校园网上供校内师生阅读、浏览。另外，根据有关法规，同意中国国家图书馆保存研究生学位论文。（保密的学位论文在解密后适用本授权书）。作者签名导师签名年月日年月日中图分类号R9学校代码10290UDC密级公开中国矿业大学工程硕士学位论文翠莲解毒胶囊的制备工艺及质量标准初步研究PRELIMINARYSTUDYONTHEPREPARATIONTECHNOLOGYANDQUALITYSTANDARDOFCUILIANJIEDUCAPSULES作者王娟导师韩相恩申请学位工程硕士专业学位培养单位化工学院学科专业化学工程研究方向药物分析答辩委员会主席评阅人论文审阅认定书研究生王娟在规定的学习年限内，按照研究生培养方案的要求，完成了研究生课程的学习，成绩合格；在我的指导下完成本学位论文,经审阅，论文中的观点、数据、表述和结构为我所认同，论文撰写格式符合学校的相关规定，同意将本论文作为学位申请论文送专家评审。导师签字年月日致谢在中国矿业大学学习的三年时间转瞬即逝，回忆自己的学习生活，感想颇多。有矿业大学老师的悉心教学，有学弟学妹的热情帮助，还有工作中领导和同事的鼎力协助，我要向老师和同学们表达深深的感谢。在导师韩相恩教授的悉心指导下，本论文得以顺利的完成，感谢韩相恩老师和王兴涌老师对于本论文选题的指导和帮助。在和韩老师接触的过程中，韩老师渊博的学识、严谨的工作作风、豁达乐观的心态都值得我学习。在专业课学习过程中，各位老师的教学态度和教学方法，对我今后的工作也给予了极大的启发，在此，我向韩老师致以深深的谢意，并感谢中国矿业大学化工学院的领导和各位老师的教育、关心和帮助。本论文的顺利完成也离不开我所在单位领导的支持，特别感谢我系张韧主任和我的校外导师袁绍丽副教授，在课题的完成过程中他们也给予了帮助和指导。最后，再次向所有关心和帮助我的老师、同学和朋友表达诚挚的谢意。摘要翠莲解毒胶囊是由翠云草、穿心莲、五指柑、岗梅、山芝麻、薄荷六味药材制成的中药制剂。本文中的翠莲解毒胶囊是依照国家药品注册管理办法中对于中药与天然药注册分类的要求中第八类（改变国内已上市销售药品剂型的制剂）的申报资料项目要求，在原有的翠莲解毒片制剂的基础上研制的新剂型。其原料提取工艺，成品有效成分含量、功能主治、服用剂量及给药途径均与原剂型翠莲解毒片一致。本课题中翠莲解毒胶囊的质量标准是按照2010年版中国药典的格式要求，并参照了翠莲解毒片的药品质量标准而起草的。本标准在片剂标准的基础上增加了穿心莲和山芝麻的薄层色谱鉴别项，并以脱水穿心莲内酯作为含量测定指标，对自制的三批翠莲解毒胶囊样品分别进行了质量检查包括了薄层色谱鉴别、崩解时限、重量差异、杂质检查、微生物限度研究。质量标准研究中建立了穿心莲、薄荷和山芝麻三味药材的薄层鉴别方法；并对胶囊剂进行了初步的质量评价，建立了在成品中以脱水穿心莲内酯作为指标性成分的含量测定方法。稳定性试验中，对三批产品进行了06个月的稳定性考察，结果表明质量基本稳定。研究结论表明该制剂的制备工艺简便可行，质量可控并稳定性良好。本试验所建立的翠莲解毒胶囊的质量标准草案，可作为该制剂的质量控制的参考。该论文有图6副，表28个，参考文献82篇关键词翠莲解毒胶囊；制备工艺；工艺研究；质量标准；脱水穿心莲内酯ABSTRACTCUILIANJIEDUCAPSULEISACHINESEMEDICINEPREPARATION,WHICHISMADEOFSIXTRADITIONALCHINESEMEDICINESINCLUDINGSELAGINELLA,ANDROGRAPHISPANICULATA,VITEXNEGUNDO,RADIXGIYCYRRHIZAE,HELICTERCSANGUSTIFOLIAANDMENTHOLUMCUILIANJIEDUCAPSULEISANEWPREPARATIONFORTHISPRESCRIPTION,ACCORDINGTOTHEEIGHTHREQUIREMENT,CHANGINGDOMESTICSALESOFDRUGSHAVEBEENLISTEDONDOSAGEFORM,OF“DRUGREGISTRATIONMANAGEMENTMEASURES“INCHINESEMEDICINEANDNATURALMEDICINEREGISTRATIONCLASSIFICATIONREQUIREMENTSITISASSOCIATEDWITHTHEORIGINALDOSAGEFORMFORCUILIANJIEDUTABLETINBOTHTHEEXTRACTIONPROCESSFROMRAWMATERIALSANDTHECONTENTOFEFFECTIVECOMPONENTS,FUNCTIONS,ADMINISTRATINGDOSEANDROUTEOFTHEPRODUCTTHEQUALITYSTANDARDOFCUILIANJIEDUCAPSULEISESTABLISHEDBYREFERRINGTOTHECHINESEPHARMACOPOEIA,2010EDITIONANDTHEQUALITYSTANDARDOFTHETABLETCOMPAREDWITHTHEQUALITYSTANDARDOFTHETABLET,TLCIDENTIFICATIONITEMS,CHROMATOGRAPHYTEST,WEREADDEDINTHEQUALITYSTANDARDOFTHECAPSULETHREEBATCHOFHOMEMADECUILIANJIEDUCAPSULERESPECTIVELY,WEREIDENTIFIEDBYTLCCHROMATOGRAPHY，WITHDEHYDROANDROGRAPHOLIDEASINDEXCOMPONENTFORCONTROLINGCONTENTLIMITBESIDES,THEDISINTEGRATIONTIMELIMIT,WEIGHTVARIATION,IMPURITYANDMICROBIALLIMITTESTWERESTUDIEDTHEQUALITYSTANDARDOFDEHYDROANDROGRAPHIS,MENTHOLUMANDHELICTERCSANGUSTIFOLIAWASESTABLISHEDBYHILLSESAMEHERBALTLCMETHODANDTHECAPSULESWEREPRELIMINARYQUALITYEVALUATION,ANDTHEESTABLISHMENTOFTHEFINISHEDPRODUCTTODEHYDROANDROGRAPHOLIDEASANINDEXOFCOMPONENTCONTENTDETERMINATIONMETHODTHREEBATCHESOFPRODUCTARE06MONTHSOFINVESTIGATIONBYSTABILITYTESTTHERESULTSSHOWEDTHATQUALITYWASREMAINEDSTABLERESEARCHDATASHOWTHATTHEPREPARINGPROCESSISREASONABLE,CONTROLLABLEQUALITY,GOODSTABILITYTHETESTSETFORCUILIANJIEDUCAPSULEQUALITYSTANDARD,CANBEREFERREDFORQUALITYCONTROLOFCUILIANJIEDUCAPSULESKEYWORDSCUILIANJIEDUCAPSULESPREPARATIONTECHNOLOGYPROCESSRESEARCHQUALITYSTANDARDDEHYDROANDROGRAPHOLIDE目录摘要I目录图清单表清单1绪论111立题依据112处方来源及组成213处方中主要药味的研究文献32制备工艺的研究1321前言1322实验试剂及仪器1323剂型的选择及工艺路线的确定1424成型工艺研究1925结论223质量标准研究2431前言2432实验试剂及仪器2433原料质量标准2534成品质量标准研究2635结论354翠莲解毒胶囊初步稳定性试验研究3741前言3742实验试剂及仪器3743试验方法3744考核项目3745结果3746结论385结果与讨论3951制备工艺3952质量标准3953创新点4054结束语40参考文献41附图45作者简历47学位论文原创性声明48学位论文数据集49CONTENTSABSTRACTCONTENTSLISTOFFIGURESLISTOFTABLES1INTRODUCTION111THEBASISESTABLISHSAPROBLEM112THESOURCEANDCOMPOSITIONOFPRESCRIPTIONS213THEPRESCRIPTIONOFMAININGREDIENTSINTHERESEARCHLITERATURE32THESTUDYOFPREPARATIONTECHNOLOGY1321INTRODUCTION1322EXPERIMENTALREAGENTSANDINSTRUMENTS1323THESELECTIONOFTYPESANDPROCESSROUTEDETERMINATION1424THESTUDYOFFORMINGPROCESS1925CONCLUSION223THESTUDYOFTHEQUALITYSTANDARD2431INTRODUCTION2432EXPERIMENTALREAGENTSANDINSTRUMENTS2433STUDYONTHEQUALITYSTANDARDOFMEDICINALMATERIALS2534STUDYONQUALITYSTANDARDOFFINISHEDPRODUCTPREPARATION2635CONCLUSION354THESTUDYOFCUILIANJIEDUCAPSULEPRELIMINARYSTABILITYTESTRESEARCH3741INTRODUCTION3742EXPERIMENTALREAGENTSANDINSTRUMENTS3743DETECTIONMETHOD3744INSPECTIONITEM3745RESULT3746CONCLUSION385RESULTSANDDISCUSSION3951PREPARATIONPROCESS3952QUALITYSTANDARD3953INNOVATIONPOINT4054CONCLUSION40REFERENCES41FIGURES45AUTHORRESUME47DECLARATIONOFTHESIS48THESIS/DISSERTATIONDATACOLLECTION49图清单图序号图名称页码图21拟定的工艺路线15FIGURE21THEPROCESSROUTE15图22平衡吸湿曲线图21FIGURE22EQUILIBRIUMMOISTUREABSORPTIONCURVE21图31穿心莲薄层鉴别色谱图27FIGURE31TLCCHROMATOGRAMSOFANDROGRAPHISPANICULATA27图32山芝麻的薄层鉴别色谱图28FIGURE32TLCCHROMATOGRAMMOUNTAINSESAME28图33薄荷的薄层鉴别色谱图29FIGURE33TLCCHROMATOGRAMMINT29图34脱水穿心莲内酯标准曲线33FIGURE34THESTANDARDCURVEOFTHEDEHYDROANDROGRAPHOLIDE33表清单表序号表名称页码表21实验的试剂13TABLE21EXPERIMENTALREAGENTS13表22实验的仪器13TABLE22EXPERIMENTALINSTRUMENTS13表23薄荷提取工艺的因素水平表16TABLE23THEFACTORLEVEOFPEPPERMINTEXTRACTIONL16表24L9（34）正交试验结果及数据分析16TABLE24L9（34）THERESULTSOFORTHOGONALTESTANDDATAANALYSIS16表25薄荷提取工艺正交试验方差分析表17TABLE25PEPPERMINTEXTRACTPROCESSVARIANCEANALYSISTABLEOFORTHOGONALTEST17表26水提工艺的因素水平表17TABLE26THEWATEREXTRACTIONOFFACTORLEVELTABLE17表27L9（34）正交试验结果及数据分析18TABLE27L9（34）RESULTSOFORTHOGONALTESTANDDATAANALYSIS18表28水提取工艺正交试验方差分析表18TABLE28WATEREXTRACTIONPROCESSVARIANCEANALYSISTABLEOFORTHOGONALTEST18表29半成品粉堆积密度的测定结果19TABLE29THERESULTSOFSEMIFINISHEDPOWDERDETERMINATIONOFBULKDENSITY19表210翠莲解毒胶囊填充物料休止角AN320TABLE210CUILIANJIEDUCAPSULEFILLINGMATERIALANGLEOFREPOSEAN320表211翠莲解毒胶囊填充物的吸湿百分率（）20TABLE211THEFILLERHYGROSCOPICITYOFCUILIANJIEDUCAPSULE（）20表212三批放大试验数据22TABLE212THEAMPLIFICATIONTESTDATAOFTHREEBATCHES22表213样品的一般质量检查结果22TABLE213THEGENERALQUALITYTESTRESULTSOFSAMPLES22表31实验的试剂24TABLE31EXPERIMENTALREAGENTS24表32实验的仪器25TABLE32EXPERIMENTALINSTRUMENTS25表33样品的水分检查结果30TABLE33THERESULTOFMOISTURECONNTENT30表34三批供试品重量差异检查结果装量（G）30TABLE34THERESULTOFWEGHTVARIATIONOFTHREEBATCHES（G）30表35崩解时限检查结果时间（MIN）31TABLE35THERESULTOFTHEDISINTEGRATIONTIME31表36三批样品重金属含量检查结果32表序号表名称页码TABLE36THERESULTOFHEAVYMETALELEMENTOFTHREEBATCHES32表37三批样品砷盐的检查结果32TABLE37THERESULTOFARSENICSALTOFTHREEBATCHES32表38微生物限度检查结果32TABLE38THERESULTOFMICROBIALLIMIT32表39标准曲线结果33TABLE39THERESULTOFSTANDARDCURVES33表310对照品溶液的精密度结果34TABLE310THERESULTOFPRECISIONOFCONTROLSOLUTION34表311稳定性测定结果34TABLE311THERESULTOFSTABILITY34表312重复性测定数据表34TABLE312THERESULTOFREPRODUCTIONQUALITY34表313回收率测定数据表35TABLE313THERESULTOFRECOVERYTEST35表314供试品含量测定数据表35TABLE314THERESULTOFSAMPLEDETERMINATION35表41制剂初步稳定性试验报告38TABLE41THETESTREPORTOFTHEPREPARATIONFORPRIMARYSTABILITY381绪论1INTRODUCTION11立题依据THEBASISESTABLISHSAPROBLEM风热感冒是临床常见的疾病，是风热之邪侵袭人体所引起的以发热重、恶寒轻或汗出不畅等为主要临床表现的常见外感病。风热感冒一年四季均可发生，而以春季更为多见。其临床表现为发热，微恶风寒，头痛，无汗或有汗鼻塞，流黄浊涕，咳嗽，咽红干痛1。临床上治疗风热感冒中医理论主张服用清热解毒药物，而西医采用抗炎抗病毒的综合疗法。由于服用化学药品可引起胃肠道等系统的不良反应及药物相互作用的影响，一定程度了增加了服药的副作用及安全隐患，抗生素的长时间服用还会产生耐药性，在应用中受到了一定的限制。作为我国文化瑰宝的中药，大多来源于植物，品种较多、资源丰富，可供选择的余地较大，并且使用历史较为悠久，自古以来有“药食同源”之说。因为中药副作用较小，作为临床应用较为安全，所以越来越多的人青睐于中药制剂。翠莲解毒片被收载于中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第五册中，该制剂是由翠云草、穿心莲、岗梅等六味中药材经提取而制成的中药片剂，本处方还收载于伤寒杂病论及金匮要略，是长久以来使用的验方。本品具有清热解毒，表散风热。用于风热感冒，高热，头痛，咽喉肿痛及咳嗽等症。经文献检索，目前在上市的药品中只有翠莲解毒片一种剂型。糖衣片剂是一种最基本、最常用的剂型，其药理作用的发挥和治疗效果的好坏往往容易受赋形剂、崩解时间等多种因素的影响。而糖衣片中更含有大量的滑石粉及糖粉，这些亦为药理活性物质，尤其是滑石粉，滑石粉性味甘淡、寒，易人胃膀胱经。功效主要有清热、渗湿、利窍，脾胃虚寒者及孕产妇要慎用2，含有糖粉的药物糖尿病人不宜服用，这些都大大限制了翠莲解毒片的使用范围。糖衣片由于制备工艺等原因导致在贮存过程中会出现斑点、褪色、变黑或暗无光泽等变色现象，严重影响了药品的质量3。在翠莲解毒片现行使用的标准中，只有薄荷脑一味药材的薄层色谱鉴别,对其他药材的鉴别没有规定，且把毒性较大的苯作为展开剂,且无相应质量控制标准，需要对其进行修订完善。胶囊剂作为一种口服制剂，在生产过程中不添加粘合剂和矫味剂，和片剂相比具有掩盖药物的不良气味；生物利用度高、起效快；可提高药物稳定性，药物装入不透光的胶囊壳中，避免了湿气、空气中氧和光线对药品质量的影响。12处方来源及组成（THESOURCEANDCOMPOSITIONOFPRESCRIPTIONS）121处方来源翠莲解毒制剂处方被收载于中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂第五册，是治疗风热感冒的临床验方。122处方组成表11翠莲解毒制剂处方TABLE11PRESCRIPTIONOFCUILIANJIEDU名称翠云草穿心莲山芝麻岗梅五指柑薄荷剂量（G）1140380570570285190123功能主治本方以清热解毒、表散风热立法，主治由风热感冒引起的高热，头痛，咽喉肿痛及咳嗽等症。本方以翠云草为君药，穿心莲为臣药，山芝麻、岗梅、五指柑、薄荷为佐药配伍组方而成。方中翠云草味微淡、苦，性寒；归肺经。具有清热利湿，止咳，止血的功效。可用于急性黄疸型肝炎，痢疾，胆囊炎，肠炎，肾炎水肿及泌尿系感染，对于风湿关节痛，肺结核咯血也有一定的功效；外用并可治疖肿，烧烫伤，外伤出血，跌打损伤等。植物名实图考亦云“翠云草生山石间，绿茎小叶，青翠可爱。群芳谱录之，人多种于石供及阴湿地为玩，江西土医谓之龙须，滇南谓之剑柏，皆云能舒筋活络。”处方中的穿心莲味苦，性寒。归于心、肺、大肠及膀胱经。具有清热解毒、凉血、燥湿及消肿的功效。临床上主治细菌性痢疾、尿路感染、急性扁桃体炎、肠炎、咽喉炎、肺炎和流行性感冒等，外用可治疗疮疖肿毒、外伤感染等。山芝麻味苦、微甘，性寒。有小毒。有一定的清热解毒和止咳的功效。临床常见用于感冒高烧，扁桃体炎，咽喉炎，腮腺炎，麻疹，咳嗽，疟疾；外用可治毒蛇咬伤，外伤出血，痔疮，痈肿疔疮等症。岗梅味苦、微甘，性凉。具有清热解毒、生津止渴的功效。用于感冒，高热烦渴，扁桃体炎，咽喉炎，气管炎，百日咳，肠炎，痢疾，传染性肝炎，野蕈、砒霜中毒。叶外用治跌打损伤，痈疖肿毒。五指柑微苦，辛，平，归肺经。具有解表清热，利湿除痰，止咳平喘，理气止痛，截疟杀虫之功效。临床可用于感冒咳喘，肝病、脘满腹痛，泄泻痢疾，疟疾，蛲虫，外用治痈肿和疮癣。薄荷味辛，性凉，归肝、肺经。具有宣散风热，清利头目，利咽，透疹之功效。用于治疗风热感冒，风温初起，头痛，目赤，喉痹，口疮，风疹，麻疹，胸胁胀闷等症。外用可治神经痛、皮肤瘙痒、皮疹和湿疹等。本草纲目云“薄荷主治贼风伤寒发汗，恶气心腹胀满，霍乱，宿食不消，下气，煮成汁服用，能发汗”。13处方中主要药味的研究文献（THEPRESCRIPTIONOFMAININGREDIENTSINTHERESEARCHLITERATURE）131翠云草翠云草来源于卷柏科（SELAGINELLACEAE）植物翠云草SELAGINELLAUNCINATADESVSPRING的全草，临床以全草入药。全年可采，鲜用或晒干入药。翠云草别名为剑柏、蓝地柏、地柏叶、伸脚草、绿绒草、烂皮蛇。分布于浙江、福建、台湾、广西、广东、湖南、贵州、云南、四川等省地。1311化学成分13111酚性成分4用60的乙醇提取翠云草,从提取液中分离得到了阿魏酸棕榈酸16醇酯（16FERULOYLOXYPALMITICACID）、对羟基桂皮酸（PHYDROXYCINNAMICACID）、对羟基苯乙酮（14HYDROXYPHENYLETHANONE）、香草醛（VANILLIN）、香草酸（VANILLICACID）、丁香酸（SYRINGICACID）、对羟基苯甲酸（PHYDROXYBENZOICACID）七种酚性成分。13112双黄酮成分5穗花杉双黄酮（AMENTOFLAVONE）、2种色酮苷（UNCINOSIDEA和UNCINOSIDEB），穗花杉双黄酮（AMENTOFLAVONE）、罗波斯塔双黄酮（ROBUSTAFLAVONE）、垫状卷柏双黄酮（PULVINATABIFLAVON）、扁柏双黄酮（HINOKIFLAVONE）等。13113其他成分6文献资料表明与翠云草同属的其他卷柏植物中含有棕榈酸，硬脂酸、莽草酸、大叶菜酸、阿魏酸、咖啡酸等有机酸及熊果苷、鸟苷、卷柏苷B、腺苷、卷柏苷C等其他成分。1312药理作用13121抗病毒作用药理研究证明7翠云草具有抗病毒的作用，起抗病毒作用成分的主要为其中的黄酮类成分。这一作用的发现是经过抗滤过性病毒实验研究，证明了黄酮类成分具有较强的抗柯萨奇病毒B3作用；而且还可以对抗普通HSV1及HSV2病毒。据报道8穗花杉双黄酮可以抑制呼吸道合胞体病毒RSV，其中色酮苷A和色酮苷B也表现出对呼吸道合胞体病毒RSV强烈的抑制作用。13122抑菌和抗炎作用陈国佩9等发现了翠云草类植物的炮制品卷柏炭对绿脓杆菌有一定的抑制作用。并且卷柏烟熏法对感冒杆菌和奈氏菌有抑制作用，而且抑菌效果和其烟熏时间有一定的关系，并成正比，且与空白对照组比较，差异显著，表现出了良好的抑菌作用。13123降血糖作用吴奕富等10通过动物模型试验，发现了翠云草类植物对链脉菌素诱发的糖尿病大鼠，有显著的降低血糖、升高胰岛素浓度的作用。苗乃全等11研究了翠云草类植物对四氧嘧啶诱发的大鼠实验性糖尿病的动物模型，发现了该类植物可以升高血清胰岛素浓度并降低血清过氧化脂质含量，并对四氧嘧啶所致胰岛B胞损伤有一定的修复作用。13124平喘作用应华忠等12通过对致敏豚鼠的平喘试验研究，证明了翠云草具有一定的平喘作用。给致敏豚鼠灌胃给药，结果表明翠云草的水提物比醇提物有显著地平喘效果,而且可延长引喘潜伏期,有预防组胺、乙酰胆碱引起的豚鼠药物性哮喘的作用。通过对使抗原攻击后引起的哮喘豚鼠症状好转的观察，发现翠云草还可以延缓哮喘发作时间和减轻发作程度,并能有效预防和治疗哮喘病。乔家法等13采用酚红排泌量法、氨水及枸橼酸引起豚鼠的咳嗽，研究翠云草水提液的祛痰和止咳作用，结果表明高剂量组和对照组比较，小鼠气管的酚红排泌量有所增加，有效的减少了浓氨水引起的咳嗽次数，显现出较好的祛痰和止咳作用。13125抗肿瘤作用孙颖祯等14通过把翠云草的乙醇提取液作用于对数生长期的结肠癌细胞HT29,用倒置显微镜观察后，发现24H内肿瘤细胞形态萎缩，细胞增殖被抑制。用RTPCR方法检测经药物干预后的COX2MRNA水平的变化，发现翠云草中总黄酮含量在1040G/ML的浓度范围内能显著抑制COX2MRNA水平，随药物浓度的增加COX2MRNA抑制作用越明显。实验表明翠云草是通过抑制COX2的表达来抑制结肠癌细胞HT29的增殖，具有一定的抗结肠癌作用。132穿心莲药用穿心莲来源于爵床科植物穿心莲（ANDROGRAPHISPANICULATA（BURMF）NEES）的全草或其叶。又名一见喜、榄核莲、苦胆草、金香草、金耳钩、印度草，苦草等。秋初茎叶茂盛时采割，晒干。主产于广东、福建等省，华中、华北、西北等地也有引种。1321化学成分13211二萜内酯类成分穿心莲中的内酯类化合物主要含于穿心莲叶中,也作为穿心莲的主要成分，经资料报道现已分离鉴定的有穿心莲内酯、新穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、8甲基新穿心莲内酯、去氧穿心莲内酯及新穿心莲内酯苷元等成分。陈丽霞等15研究了穿心莲的从地上部分，并从85乙醇提取物中分离得到一些新的二萜内酯类化合物，分别为穿心莲新苷，3,14二去氧穿心莲内酯,14去氧11,12二去氢穿心莲,14去氧穿心莲内酯,异穿心莲内酯,双穿心莲内酯，14去氧11,12二去氢穿心莲内酯苷，穿心莲内酯苷等。13212黄酮类成分黄酮类成分也作为穿心莲的主要有效成分。陈丽霞等16经研究从穿心莲中又分离得到新的黄酮类化合物。主要有5羟基7,8二甲氧基二氢黄酮，5羟基7,8二甲氧基黄酮,2甲氧基黄芩新素,二氢黄芩新索,5,7,8三甲氧基二氢黄酮等成分。靳鑫等17首次从穿心莲中分离得到了芹菜素7OD葡萄糖醛酸丁酯，芹菜素7OD葡萄糖醛酸苷，芹菜素7OD葡萄糖苷，异高黄芩素80D葡萄糖醛酸苷等。徐冲等18首次从穿心莲的乙醇提取液中分离得到了5羟基7,8,2,6四甲基黄酮，2羟基5,7,8三甲氧基黄酮等成分。1322药理作用13221抗肿瘤作用RAJAGOPALS研究小组研究了穿心莲内酯在动物体外对多数癌细胞有一定的抗癌活性，并能通过增强淋巴细胞从而影响癌细胞的细胞毒活性19。穿心莲内酯的衍生物对乳腺肿瘤细胞的生长有抑制作用，且抑制作用随剂量的变化的呈现一定的线性变化20。徐立春等21通过动物实验，针对动物模型的胃癌、肝癌、肺癌及乳癌等，注射了穿心莲内酯亚硫酸氢钠加成物的注射剂。结论表明了穿心莲内酯成分有明显的抗癌作用。穿心莲制剂并能明显延长荷瘤鼠的生存时间，使荷瘤鼠脾、胸腺指数恢复正常水平，有明显保护胸腺和恢复脾损伤的作用22。其制剂莲必治能抑制人恶黑荷瘤裸鼠皮下肿瘤结节形成，并对人恶黑肿瘤肺转移抑制率达5152（PA2A3,B3B2B1,C1C2C3,D3D1D2。通过直观分析结果可判定为A1B3C1D3为最佳提取工艺。为了进一步验证结果，并将数据进行方差分析，结果见下表25。表25薄荷提取工艺正交试验方差分析表TABLE25PEPPERMINTEXTRACTPROCESSVARIANCEANALYSISTABLEOFORTHOGONALTEST方差来源离差平方和自由度均方F值显著性（P）A00908200454378333B000252000121C0011620005848333D00516200258215误差00025200012注B因素影响较小，可视为误差处理。F005（2,2）190；F001（2,2）9900由方差分析判定的结果和直观分析结果一直，确定薄荷油提取的最佳工艺条件为由正交实验结果判定薄荷挥发油提取工艺的优化条件为A2C1D2，即浸泡时间为15H，提取时间为4H,加水量为600ML。2332水提取工艺的考察根据原有的制备工艺，60的穿心莲、五指柑、山芝麻、岗梅和翠云草采用水提工艺提取。以水提后水体液的出膏量为指标，通过采用L9（34）正交实验，考察提取的加水量、浸泡的时间、提取的时间及提取的次数四个因素考察对加水煎煮提取效果影响。从生产实际、现有条件等因素考虑，选择因素水平设计表26。表26水提工艺的因素水平表TABLE26THEWATEREXTRACTIONOFFACTORLEVELTABLE因素水平A用水量倍B浸泡时间（H）C提取时间（H）D提取次数（次）1610101281520231020303精密称取翠云草1150G、穿心莲220G、岗梅570G、山芝麻570G、五指柑280G，按正交试验设计的提取方案进行提取，提取的浸膏浓缩至比重为125126（60），在室温下称定浸膏的质量，试验结果见表27。表27L9（34）正交试验结果及数据分析TABLE27L9（34）RESULTSOFORTHOGONALTESTANDDATAANALYSIS影响因素实验号ABCD浸膏质量（G）111113221222433133352421235052231566231246731325083213409332138K1127132118126K2152139131139K31281361581422506463436463K3426453526473极差R832313353因素顺序CADB优水平A2B2C3D3优组合A2B2C3D3经直观分析比较表25中各因素的极差值R的大小,可以分析出出各因素对提取效果影响的主次顺序为CADB。比较每个因素在3个水平下实验指标的平均值K1,K2,K3的大小顺序得到水平优势为A2A3A1,B2B3B1,C3C2C1,D3D2D1。直观分析结果为A2B2C3D3最佳提取工艺。为了进一步验证，将数据进行方差分析，结果见表28。表28水提取工艺正交试验方差分析表TABLE28WATEREXTRACTIONPROCESSVARIANCEANALYSISTABLEOFORTHOGONALTEST方差来源离差平方和自由度均方F值显著性（P）A131562657813289B82241828C27757213878528037D5122225615174注F005（2,2）190；F001（2,2）9900由方差分析判定的结果和直观分析结果一直，确定水提取的最佳工艺条件。由正交实验结果判定水提取工艺的优化条件为A2B2C3D3,即用水量为8倍,提取次数为3次且每次提取3H，因为浸泡时间影响较小可浸泡1H。通过正交实验法对翠莲解毒胶囊中薄荷油的提取和水提的方面进行了考察和优化，通过正交实验的数据分析，使薄荷油提取工艺和药物的水提工艺进一步明确、规范，使药物的有效成分能最大获得。24成型工艺研究（THESTUDYOFFORMINGPROCESS）241半成品的制备74按处方量称取六味中药材，薄荷经蒸馏提取挥发油，其余药材依上述优化的工艺提取、过滤将得到的浸膏干燥至稠膏，加入穿心莲的细粉充分混合均匀后，干燥，粉碎，喷入薄荷挥发油制成翠莲解毒胶囊半成品。242堆积密度的检查取一定量的的半成品粉末，将其填充于20ML的量筒中，置于平整的桌面上微振动，静止后，量得半成品细分的容积，通过细粉的质量和容积计算该半成品的堆积密度，结果见表29。表29半成品粉堆积密度的测定结果TABLE29THERESULTSOFSEMIFINISHEDPOWDERDETERMINATIONOFBULKDENSITY序号粉末质量（G）体积ML堆积密度（G/ML）均值（G/ML）115220076215020075314820074075243填充物流动性的测定为了满足胶囊制备过程中对于制剂均一性的要求，填充物料流动性是否良好为其满足均一性的基本条件，药剂学中通过测定粉末的休止角来考察填充物料的流动性。本实验中通过三联漏斗法测定翠莲解毒胶囊半成品的流动性。取3只漏斗并串联，将底部放置于坐标纸15CM处，将半成品粉末分别沿顶端的漏斗内壁慢慢将物料倒入，直到下部漏斗所形成的物料圆锥体尖端接触到漏斗的下口为止，采用坐标纸的刻度即可测出圆锥底部的直径长度，从而计算出休止角的值TGA2H/R，结果见表210。表210翠莲解毒胶囊填充物料休止角AN3TABLE210CUILIANJIEDUCAPSULEFILLINGMATERIALANGLEOFREPOSEAN3试验号测定结果平均值138323863377382测定结果表明翠莲解毒胶囊半成品的粉末的休止角均小于40，流动性较为良好，能够满足胶囊剂的生产要求。244临界相对湿度测定原料药分装的环境因素会直接影响药品的质量，所以需对原料药的分装环境湿度条件进行考察。在生产实践中主要是相对湿度的影响，故采用吸湿平衡曲线测定法对填充物进行平衡吸湿性试验。取翠莲解毒胶囊的填充物料六份，每份20G，分别置于己清洁、干燥的称量瓶中，精密称定后，将称量瓶的瓶盖打开，按照临界湿度测定要求分别置于不同饱和盐溶液的不同湿度环境中，并置于25的恒温培养箱内放置24H后，取出称量瓶，加盖后进行精密称定，分别计算其原料药的吸湿百分率，并以相对湿度作为横坐标，吸湿百分率则为纵坐标，绘制吸湿平衡曲线图，分析临界湿度值，判定分装条件。试验结果见表211、图22。表211翠莲解毒胶囊填充物的吸湿百分率（）TABLE211THEFILLERHYGROSCOPICITYOFCUILIANJIEDUCAPSULE（）饱和盐溶液的种类相对湿度（）吸湿百分率（）CH2C00K15H2O20118MGCL26H2O33210K2C032H2O43287NABR2H2O60520NACL751220KNO3922225图22平衡吸湿曲线图FIGURE22EQUILIBRIUMMOISTUREABSORPTIONCURVE由图2可见，胶囊填充物在不同的相对湿度环境下，其湿度量变化较为明显，通过平衡吸湿曲线可判定该原料药的临界相对湿度为600，所以要控制粉末分装时的相对湿度，以保障药品质量应在600以下，贮藏要密闭和防潮。245最佳制备工艺按处方量取六味中药，将穿心莲40粉碎成细粉，并过80目筛；薄荷用12倍量的水，浸泡1H，用水蒸气蒸馏法提取薄荷挥发油4H。将剩余药渣水溶液及处方中的翠云草、山芝麻、岗梅、五指柑和60的穿心莲合并，按药材量8倍补足水，提取三次，每次提取3H，合并水煎液，并过滤，将滤液浓缩至浸膏，加入穿心莲细分，等吸收均匀后，于60烘干，并粉碎成细粉，过80目筛，取薄荷挥发油用15ML95的乙醇均匀分散稀释后，把薄荷挥发油喷入到细分中，使之均匀混合后，并装入0号胶囊，即得成品。246日服剂量的确定及囊壳的选择本方每粒相当于原生药材3135G，其中以原药的粉末入药部分为0152G，水提部分入药的为2793，按13的出膏率计算，相当于浸膏0363G；出油率按07计算，薄荷挥发油总量为0001ML，可忽略不计。浸膏和原药共计0515G。因此可选用0号胶囊，每粒装量确定为05G。用法用量确定为口服，一日3次，每次服用3粒。和原翠莲解毒片剂量相当。247放大试验及一般杂质检查按上述的工艺进行数批放大试验考察，对期中的三批进行了数据分析和一般质量的检查结果见表212和表213。表212三批放大试验数据TABLE212THETHREEBATCHOFAMPLIFICATIONTESTDATA批号投料量（KG）出膏量（KG）总出粉量（KG）成品量（粒）理论粒数201203012565030053106010002012030225650310541080100020120303256503005310601000由放大试验的结果分析可知，本品的拟定的制备工艺路线基本稳定，具有可行性，具备了生产的基本条件。表213样品的一般质量检查结果TABLE213SAMPLESOFTHEGENERALQUALITYTESTRESULTS批号水分（）崩解时限（MIN）质量差异微生物限度检查脱水穿心莲内酯含量MG/粒2012030160210441392符合规定1312012030259512432381符合规定1322012030360511431372符合规定132由三批放大实验数据和样品的一般质量检查结果可知，三批试样，均按照胶囊剂的制剂通则及和样品的质量检查项均符合要求，因此可推断出所拟定的工艺是合理的、可行的。25结论（CONCLUSION）251在制备工艺的研究中依据药物的特性，拟定了翠莲胶囊制备的初步工艺，在翠莲解毒片原有的提取工艺基础上，本章研究对薄荷和药物的水提工艺通过正交试验进行了验证。薄荷挥发油的提取采用了水蒸气蒸馏法，并以浸泡时间、超声时间、提取时间和加水量为考察因素，确定了薄荷最佳的提取工艺。其余的五味药采用了水提法并对水提工艺的条件进行了验证，并以加水量、浸泡的时间、提取的时间及提取的次数作为考察因素，以出膏量为指标，确定了60的穿心莲、五指柑、山芝麻、岗梅和翠云草的水提工艺。252在以上基础上确定了翠莲解毒胶囊半成品的制备工艺，并对半成品的成型工艺进行了初步的研究，测定了半成品的堆积密度、物料的流动性以及物料的吸湿性，结果均符合制剂上产的要求，为最佳制备工艺的确定及日服剂量的选择提供了理论依据。253通过放大实验和以水分检查、崩解时限、质量差异、微生物限度检查和脱水穿心莲内酯的含量测定进一步验证了该制备工艺的可行性和合理性。3质量标准研究3THESTUDYOFTHEQUALITYSTANDARD31前言（INTRODUCTION）药品的质量标准是指把反映的药品质量特性的技术参数，指标明确规定下来，形成技术文件，规定药品质量规格及检验方法。通常通过测定药品的纯度、有效成分含量、生物的有效性、毒副作用、物理化学性质等来保证药品的质量。目前所使用的药品质量标准可分为法定标准和企业标准两种。法定标准最常用的是中国药典和部颁标准。中华人民共和国药品管理法规定药品的生产一律以药典为准，若未收入药典的药品以行业标准为准。如果无法定标准或达不到法定标准的药品不准生产、销售和使用。在药品的生产研究中对药品生产的方法学进行验证，药品质量验证内容有准确度、精密度、重现性、专属性、检测限、定量限、线性、范围和回收率等。通过验证证明制备方法的可行性、合理性。32实验试剂及仪器（EXPERIMENTALREAGENTSANDINSTRUMENTS）321实验试剂表31实验的试剂TABLE31EXPERIMENTALREAGENTS试剂纯度生产企业甲醇色谱纯北京化工厂实验用水蒸馏水自制氯仿分析醇北京化工厂乙酸乙酯分析纯北京化工厂石油醚分析纯北京化工厂硫酸分析纯青岛海洋化工厂环己烷分析醇青岛海洋化工厂硝酸分析醇青岛海洋化工厂脱水穿心莲内酯对照品中国药品生物制品检定所薄荷脑对照品中国药品生物制品检定所谷甾醇对照品中国药品生物制品检定所322实验仪器表32实验的仪器TABLE32EXPERIMENTALINSTRUMENTS仪器型号生产企业高效液相色谱仪LCL0AVP日本岛津恒温干燥箱DZF6120中新医疗器械有限公司电子天平FA20413上海精密科学仪器有限公司崩解仪紫外分析仪ZB1型ZF2型天津市新天光分析仪器有限公司上海安灵分析仪器有限公司实验所用的对照品均由中国药品生物制品检定所提供。所使用的药材均符合中华人民共和国药典（2010版）及广东省中药材标准标准的相关规定，药材购于亳州贺林饮片厂。33原料质量标准STUDYONTHEQUALITYSTANDARDOFMEDICINALMATERIALS参考文献翠云草为卷柏科（SELAGINELLACEAE）植物翠云草SELAGINELLAUNCINATADESVSPRING的全草，临床以全草入药。全年可采，鲜用或晒干入药。翠云草别名为剑柏、蓝地柏、地柏叶、伸脚草、绿绒草、烂皮蛇。分布于浙江、福建、台湾、广西、广东、湖南、贵州、云南、四川等省地。应符合广东省中药材标准翠云草项下的有关规定。穿心莲为爵床科植物穿心莲（ANDROGRAPHISPANICULATA（BURMF）NEES）的全草或叶。又名一见喜、春莲秋柳、榄核莲、苦胆草、金香草、金耳钩、印度草，苦草等。秋初茎叶茂盛时采割，晒干。主产于广东、福建等省，华中、华北、西北等地也有引种。应符合中国药典（2010）一部穿心莲项下的有关规定。山芝麻为梧桐科山芝麻属植物山芝麻（HELICTERCSANGUSTIFOLIAL）以根或全株入药。于夏、秋采挖，洗净切片晒干药用。别名又叫大山麻、石秤砣、山油麻、坡油麻等。生于丘陵、路边、荒山、荒坡。分布于江西、福建、广西、广东及西南等地。应符合广东省中药材标准山芝麻项下的有关规定。岗梅为冬青科冬青属植物梅叶冬青ILEXASPRELLA（HOOKETARN）CHAMPEXBENTH的根。以根、叶入药。全年可采，洗净切片晒干。为岭南地区习用中药，也是凉茶的主要成分。岗梅又称为点称星、称星树、土甘草、山梅根、假青梅、白点秤、天星木、秤星树、百解茶、苦梅、山梅、点秤星、梅叶冬青、土甘草等。主产于广东、广西、湖南、江西、福建、台湾等地。应符合广东省中药材标准岗梅项下的有关规定。五指柑为马鞭草科植物黄荆VITEXNEGUNDOL的干燥全草。四季均可采收，除去泥沙，根茎洗净，干燥。又叫做黄荆、黄荆条、黄荆子、布荆、荆条、五指风等。五指柑始载于图经本草牡荆条下，其俗名为黄荆。主产于我国长江以南，北达秦岭、淮河；生于路旁、山坡、水溪边及小灌丛中。应符合广东省中药材标准五指柑质量标准项下的有关规定。薄荷来源于唇形科（LABIATAE）多年生宿根性草本植物薄荷属（MENTHA）的地上部分。又称为南薄荷，水薄荷，鱼香菜、狗肉香、水益母、接骨草，土薄荷，仁丹草，野仁丹草、见肿消，苏薄荷，蕃荷菜等。广泛分布于我国各地。应符合中华人民共和国药典（2010）一部薄荷项下的有关规定。34成品质量标准研究（STUDYONQUALITYSTANDARDOFFINISHEDPRODUCTPREPARATION）341性状通过对三批翠莲解毒胶囊样品性状的观察，可确定翠莲解毒胶囊的性状为本品为胶囊，内容物为棕褐色粉末；气略香，味苦、微辛、凉。342鉴别3421穿心莲穿心莲中含有二萜内酯、黄酮类、多糖类成分，所以我们采用了脱水穿心莲内酯作为对照品对其进行鉴别34211供试品溶液的制备取翠莲解毒胶囊的内容物1G，并精密称定，置于具塞锥形瓶内，加入50ML的甲醇后,密塞，浸泡24H,超声30MIN,过滤后，弃取初滤液、精密量取20ML的续滤液后，加于中性的氧化铝柱上，用20ML的甲醇洗脱，置于水浴上挥干甲醇，残渣加入甲醇溶解，并定容至10ML,用045M滤膜过滤后作为供试品溶液。34212对照品溶液的制备精密称取脱水穿心莲内酯对照品，加入甲醇制成每