检验员应知应会知识及考核方法1

1、盐城XXX生化技术有限公司检验员应知应会知识及技能考核方法质检部2014430气相色谱法与液相色谱法的区别我们部紺道GC和LC是色谱迭中蜃直耍的悶种方法，并U都能够対复朵禅品进行分离和分析口那么GC相比LC有什么特点呢T气相色谱法是-种仪器分析方法，气相色谱仪器貓构（见图bl） -般由六 个部分组成：气略系统、进样系统.柱系统、检测系统、数据处理系统温控系 统。图1-1气相色诸裝禮图液相色i普法亦是-种仪器分析方法.液相色涪仪结构1-2） 一般由六 个部分细成：液路系统、迸样系统、柱系统、检测系统、数据处理系统、控制系 统。H L-2液新】色诺装迓圈诃以发现同星色谱冢族的成员.他们的某术給构星

2、十分相似的a从上面两味 对比圏中町以发现，GC fll LC的最大喳别上践在于流动相* I制疋相、分析对隊. 检测技术、収及制备分离方面农1-1 GC和LC的区别类别气柏色谱法液相色谱法流动相以气体为流动柏*常用毂气仃氮气， 氮气、氢气.钟娄少戲气jlfHHL 相不发生柞用f以腋体为流嘲柏+常用漩动扌【1仃掖 性洛制、训撥性濬剂以及耀冲盐等. 种类较冀.流动棚与固定和间可发 生祚用固龙林|尚定相种类第客不同的枠品祎往 色谱柱相IBX-GC 般依靠改变 色i普柱栢操作罄数*忧化条件周定相种类较少*同根林f可以 分析很梦样品” LC 般可収改变流 动村的种炎和纽分来优化条件分析对彖呵挥发、热和定性

3、好的样品，沸点 般办超过5D0CI前己知有机化 合物中20% -25%可用GC直捲曲芋易押发.且冋以溶斛于流动州屮 的样品日前已划存机化合物巧 可用LC甘析。检测技术检测器主噪存热导检髓器、碱火焰 离子化检测器S电了捕获检测器、 火焰光度楡测器、豚冲式火焰光度 检测器E检篙署主曼有養外可见光检测器* 旅差折比检测器、英朮检测器、-. 极管阵列检测器、蒸发光散射检测 器*制备分离柱容呈太低制备困难易实现制备分离分析方法和对较少.主要琵气固色谐气- 液色谱尊相对较埶正相芭谱、反相色谱, 液同色诸、液-液色i职 键汁色谐、 凝胶色谱.离子色if、亲和与手性 色谱等色谐法,即利用组分左体系中固定相与潦

4、动相的分配差异,将混合物组分班行分离和测定的方法 见下示意图毛细柱色谱系统示意图调节柱压力时，分流比、尾吹和隔膜吹扫流量同时会相应改变。 要想获得最 佳的分离效果，分析人员必须随时掌握各种流量大小变化情况。柱压 0.02-0.1(0.06MPa)气化尾吹分流毛细拄(200)ml/min30(10-100):180:1* FtD2-4ml/min气相色谱仪FID的开机程序1打开载气（N2）总阀，调节分阀压力到0.3Mpa，查看仪器面板上的柱前压力表并调节到所需要的压力，确认色谱柱已通载气；2. 开仪器电源开关和加热开关；3. 设置温度：柱箱温度：SE-54柱260C，FFAP柱210温度；注样器

5、温度：或者辅助I温度（气化室温度）250C检测器温度：SE-54柱260 J FFAP柱220 C4. 开启电脑和色谱工作站，点火前查看基线能走直，能调另，说明仪器电器部分正常5点火:打开氢气钢总阀，调节分阀压力到0.25Mpa，调节仪器面板上的氢气阀和空气阀，用电子点火器在检测器上方点火，如果点不着，可将氢气适当调大，空气适当调小，点着后再回到正常值；氮:氢:空 =1:1:10，正常值为 30:30:300ml/min;6准备分析：将柱箱温度调节到待测样品的温度，等温度稳定后，基线走直即可进样分析气相色谱仪FID的关机程序1. 关氢气和空气阀，灭火；2. 降温：关闭检测器和气化室加热电源of

6、，将柱温降至 50C以下，检测器和气化室降至100C以下；3. 关仪器电源开关；4. 最后再关载气！气相色谱仪TCD的开机程序1打开载气（H2）总阀，调节分阀压力到 0.25Mpa，查看仪器面板上的测量柱前压力表和参比柱前压力表，确认色谱柱已通载气；（用皂沫流量计从 TCD放空口可以测量）2开仪器电源开关；3设置温度：首先设置检测器温度，该温度比柱温实际最高使用温度高10 C即可；然后设置进样1和进样2温度，接参比柱的进样口可设置低点；最后设置柱温，为了防止检测器被污染，柱箱升温速度要比检测器慢；4. 开启电脑和色谱工作站，等温度恒温后，才可做下一步：5. 设置电流，开TCD放大器，按“过载”

7、按钮，“过载”灯灭了，表明电流已经加上；6准备分析：将柱箱温度调节到待测样品的温度，等温度稳定后，基线走直即可进样分析。气相色谱仪TCD的关机程序1. 关检测器电源开关；2 降温：关检测器和气化室加热电源，柱温降至50 C，检测器和气化室降至 100 C以下;5. 关仪器电源开关；6. 最后再关载气！（检测器温度必须降到 100C以下才能关载气）注意：检测器未通气时绝对不能加电流，否则检测器的核心部件铢钨丝会在短时间内烧毁；先升检测器温度，后升柱温.0毛细柱的正确使用和维护保养色谱仪是一种分离分析的工具，真正起分离作用的是色谱柱，它是色谱仪的“心脏”为了延长毛细柱的使用“寿命”，降低分析成本，

8、我们每一个人都必须掌握正确的使用方法和维护保养及注意以下事项：1. 一根色谱柱通常有 2个温度极限一一温度下限和温度上限；如果在低于温度下限的条件 实验，对色谱柱并不会受到任何损坏，只不过是不能发挥色谱柱的正常功能而已。a）温度上限一般有 2个固定的数值一一恒温极限和程升极限。c）在恒温极限下使用，对柱寿命不会受到影响，d） 在程升极限下使用，时间不能超过10min，但如果持续时间太长，会增加柱流失，缩短色谱柱寿命， 超过上限温度，会快速并且永久性地损坏色谱柱。规定：柱箱实际最高使用温度必须低于柱最高使用30-50 C以下使用！女口 FFAP -40C -250 C /260 C。（我们实际最

9、高使用温度只能在220 C以下使用或老化）SE-54 -60C -300 C /320 C （我们实际最高使用温度只能在280 C以下使用或老化）2. 必须在通载气的情况下，柱箱才可以升温，否则会严重损伤固定相！3. 换进样垫时，必须把柱箱温度降到 50 C以下、关掉载气后方可换进样垫！否则会使载气反吹，造成固定相分布不均匀，使柱效大大下降！4. 前处理样品，在取样时要防止酸水或碱水吸入而打进色谱柱内，造成对固定相的伤害；5. 仪器不做样品时应经常对色谱柱进行老化；或不进样走程序升温进行老化；6. 突发事件的处理：a）一旦发现载气钢瓶的气用完，应立即关闭柱箱加热电源，打开柱箱门，再去换钢瓶;b

10、）突然断电：GC-9790仪器只需要关闭电源开关，所有气源都不要关，等来电后，开仪器电源， 查看所有设置参数有无变化即可；安捷伦、岛津、GC-9720仪器一旦断电，仪器上所有气源全部自动关闭，应立即打 开柱箱门，关仪器电源。S E-3O ,dZ-1 01OX/-1 7OX/-62l3%OX/-1 70 17%山左科芋IH IWI圧才冃 介盘召场mm*二中斗屎確金I疑 吕o* 苹斗、吁 咗二屮 群左魏社 AH疑 窃丙皐”3嗨举皐旧斗嗨二中皐遼石圭f疑 弟丙斗.7%*企3% 二 I=P 幕确令疑 斥丙卓三弓嗨举-卓、与O嗨二匚尸耳基斜迺碓K疑谱图的分析数据处理由于中控分析室的仪器年代已久，都有不同

11、程度的污染，在不进样空走程序升温时，在几乎相同的位置上都会有或多或少的峰出现，我们把这些峰称之为 “鬼”峰；这些峰主要来自于分析系统（气化室、色谱柱等），见下面的放大图：色谱圉（E0709U ars8SE1I24&S10121416120时间（min）这些峰的面积大都在 1000uV*s,其中一个面积为 3964uV*s，我们平时在分析数据处理时会把所有峰的面积全积分出来，包刮鬼峰在内的所有峰都计算到待测样品中，这样就不能真 实反应样品的准确含量；根据仪器本身问题，样品分析结束后我们将按下列程序对分析数据 统一处理：要求：主峰面积大于 300mv以上，500mv左右为好。1. 将“最小峰面积”

12、设置为 1000-2000 ；2. 适当修正积分不规则的峰；3. 添加需要被监测的杂质峰，扣除能识别的“鬼”峰;4. 预览分析报告数据。例如：水洗样最小面积含量%峰个数10097.655750097.7337100097.8328150097.8527主峰峰高620mv从上数据可知，主峰峰高控制在主峰峰高200mv最小面积含量%峰个数10097.382850097.5019100097.809600mv左右，最小面积设置在1000 （扣除鬼峰），因为要把信号从本底噪声中识别出来，则组分的响应值就一定要高于噪声，分析结果才真实。分析误差分析误差主要分二种：1.过失误差 2.系统误差1. 过失误差

13、过失误差也称粗差。这类误差明显的歪曲测定结果，是由测定过程中犯了不应有的错 误造成的。例如，标准溶液超过保存期，浓度已经发生变化而仍在使用；器皿不洁；不 严格按照分析步骤或不准确地按分析方法进行操作；弄错试剂或吸管；试剂加入过量或 不足；操作过程当中试样受到大量损失或污染；仪器出现异常未被发现；读数、记录错 误及谱图处理不一致等，都会产生误差。过失误差无一定的规律可循，这些误差基本上 是可以避免的。消除过失误差的关键，在于分析人员必须养成专心、认真、细致的良好 工作习惯，不断提高理论和操作技术水平。2. 系统误差系统误差又称可测误差或恒定误差，往往是由不可避免的因素造成的在分析测定工作中系统误

14、差产生的原因主要有：方法误差:是由测定方法本身造成的误差，或是由于测定所依据的原理本身不完善而导致的误差。仪器误差：仪器误差也称工具误差，是测定所用仪器不完善造成的。人员误差：由于测定人员的分辨力，反应速度的差异和固有习惯引起的误差。环境误差：由于测定环境所带来的误差如室温湿度、电磁场、电压、震动等。随机误差：由测定过程中各种随机因素的共同影响造成的，在排除了系统误差的情况下,用增加测定次数的办法来减少随机误差。提高分析结果准确度的方法1选择合适的分析方法；2增加平行测定的次数；3消除测定中系统误差重复性：同一个人在同一台仪器上重复进样所得结果的一致性。重现性：同一方法在不同时间、地点、不同型

15、号仪器、不同操作人员应用时所得结果的一致性。回收率：方法测得的组分浓度与原来样品实有浓度之比。越接近100%越好。重复性容易实现，重现性更为重要。提高分析结果准确度的注意事项1. 取样：取样要有代表性，发现液体样品有沉定或分层，固体样品有机戒杂质应及时汇报，并在报告单上注明。2. 称样：内标法或外标法定量称量要准确，必须精确至0.0002g，发现天平不稳要及时汇报、修理；注意：标样必须放在磨口瓶中！内标物量取要准确、一致！3. 处理：样品用溶剂稀释必须完全溶解；中控样品必须按规定前处理并洗到中性。4. 进样：手动进样不能失真”，正确的进样方式是：a）进样要快（瞬间进样），否则会造成二次进样；b

16、）针拔到进样垫时要慢一点，否则会造成进样垫瞬间漏气，出 现气体倒流，而使样品主分比例“失真” ，造成峰型变差、拖尾，重复性差。5 平行测定：要在规定的误差范围，否则必须重新分析。6. 色谱峰处理：7计算：&污染：在分析过程中要防止交叉污染，如取样瓶、移液管、进样针等；仪器分析系统污染如气化室内衬管、进样垫、色谱柱、检测器等，这些都会给分析结果带来误差，甚至造成误分析，给生产和产品质量带来负面影响！9清洗：进样针：用干净的丙酮洗针数次，拔出针杆，用滤纸擦净，用专用洗耳球将针筒吹干，备用，保证注射器不留任何残液，对下次进样不会造成污染。取样瓶：先用工业酒精浸泡后，再洗2次，必要时再用水清洗，烘干，

17、备用。带刻度的玻璃器具如移液管、容量瓶、滴定管等用溶剂、蒸馏水清洗后晾干备 用。注意：不能烘干。仪器的日常维护保养1）关于使用的气体纯度：填充柱分析99.99% ,毛细柱分析 99.999%定期检查更换净化器的硅胶，分析筛和活性炭；用PEG柱时，必须除去载气中的氧；空气压缩机的空气净化；防止气路管道漏气，检漏方法。2）进样垫的维护一个进样垫进样次数理论上一般可达到100多次，应定期更换。出现以下几种情况，应考虑更换进样垫：保留时间、峰面积的重现性变差时；进样垫被污染，出现鬼峰时；换进样垫一般在室温或低于 50C以下，关掉载气才能更换；避免进样针头有倒刺损伤进样垫，进样垫碎屑掉入气化室；国产硅胶

18、垫一般只能在280 C以下的气化温度下使用，高于300 C使用，将大大缩短进样垫的寿命，并会出现鬼峰。3）玻璃衬管的维护与清洗内壁污染，有进样垫碎屑，或破损，是产生分析重复性差的原因之一。清洗方法：清除内衬管中的残渣，用丙酮清洗污垢，在250C下烘2h。注意：清洗前先将石墨压环卸下。4）石墨压环和O型密圭寸圈在多次拆卸玻璃衬管时，石墨压环密封性会变差，漏气，应及时更换。注意：o型密封圈只要卸下，就会有损伤，必须更换，否则会造成气密性不好。影响重复性的原因a）分流比波动，检查流速控制器。b）峰形不规则。或有一组色谱峰不能完全达到基线分离，处理机或工作站二次基线切割部位不一样所造成，尤其是对低含量

19、的组分影响很大，在工作站上，可用手动切割方式加以处理，或重新选择分离条件。c）样品中组分沸点相差太大，d）进样失真”。正确的进样方式：进样要快（瞬间进样）；针拔到进样垫时要慢一点，否则会造成进样垫瞬间漏气，出现气体倒流，而使样品主分比例“失真”，造成峰型变差、拖尾，重复性差。e）仪器分析系统污染，出现“鬼”峰。综上所述作为一名色谱分析人员，必须要掌握以下几点：a）除了要学习毛细管色谱的理论，实践中还真正理解和掌握毛细柱色谱的分流、尾吹、 隔膜清扫、线速度等术语的含义、作用和调试方法，学会分离条件的选择，真正发挥毛 细柱色谱三高一块”的特点和作用。b ）正确使用毛细柱，做到会安装、会调试、会选择

20、、会保养，从而达到延迟毛细柱的使 用寿命。c）提高仪器的灵敏度，控制进样量。d）避免进样针、气化室、检测器、色谱柱等污染。e）掌握进样技巧，选择合话的定量方法，做到分析数据的准确性、重复性和重现性。f）做好仪器的日常维护保养，掌握仪器故障排查和排除的方法。使自已真正成为一名色谱分析高手!对质检人员的技能考核方法为了提高质检人员的整体业务水平，在第一时间内及时准确的报 告分析数据，我们将开展比、学、赶、帮、超活动，来全面提升每一 位质检人员自身的业务水平，不断提高工作效率；在分析方法确定的 情况下，进样技术的水平高低对分析数据的重复性尤为重要；因此， 我们首先准备在进样技能方面通过对大家一段时间

21、的培训指导后，在适当的时间内对每一位质检人员进行逐个考核，考核内容为：校正因子的平行测定一. 要求：1手动进样，连续6针；2. 分别计算的校正因子f值；3. 按国家规定要求，连续6针的校正因子f值相对误差应小于1% ；二. 目的：使每一位质检人员都能掌握正确的进样技能和技巧，来确保分析 数据的可靠性、准确性。三. 奖罚办法：1. 合格人员按成绩给予一定的奖励（由质检部向公司领导申请）；2. 不达标人员，给一定时间继续练习，给予第二次补考，不过者将待岗处理。四.主考官：XXX沁园春雪北国风光，千里冰封，万里雪飘。望长城内外，惟余莽莽;大河上下，顿失滔滔。山舞银蛇，原驰蜡象，欲与天公试比高。须晴日，看红装素裹，分外妖娆。江山如此多娇，引无数央雄竞折腰。惜秦皇汉武，略输文米;唐宗宋祖，稍逊风骚。一代天骄，成吉思汗，只识弯弓射大雕。俱往矣，数风流人物， 还看今朝。沁园春雪北国风光，千里冰封，万里雪飘。望长城内外，惟余莽莽;大河上下，顿失滔滔。山舞银蛇，原驰蜡象，欲与天公试比高。须晴日，看红装素裹，分外妖娆。江山如此多娇，引无数央雄竞折腰。惜秦皇汉武，略输文米;唐宗宋祖，稍逊风骚。一代天骄，成吉思汗，只识弯弓射大雕。俱往矣，数风流人物， 还看今朝。丿克出师表两汉：诸葛亮先帝创业未半而中道崩殂， 今天下三分，益州疲弊，此诚危急存亡之秋也