罗氏试剂盒说明书 Anti-HAV

1、0485501900V7Anti-HAV甲肝病毒抗体PAGE 2 Elecsys 和cobas e 分析仪04854977 190 100测试 试剂盒适用于以下分析仪Elecsys 2010MODULARANALYTICS E170cobas e 411cobas e 601cobas e 602主要用途：用免疫学方法体外定量测定人血清或血浆中的甲型肝炎病毒的总抗体。抗-HAV检测用来检测过去的或目前存在的甲型肝炎感染,以及观察接种HAV疫苗之后的免疫反应。电化学发光免疫测定试剂，适用于罗氏Elecsys和cobas e免疫测定分析仪。临床应用: 甲型肝炎病毒是一种无包膜RNA病毒,属于小RN

2、A病毒科。目前只发现了一种人类血清型和7种基因型。病毒外壳体包含3种蛋白质(VP1-VP3),构成病毒颗粒表面免疫显性的结构,此结构在所有基因型中高度保守。1在接种疫苗或自然感染后,会发生针对该结构的免疫反应。甲型肝炎是急性病毒性肝炎中最常见的类型,经由粪-口途径传播,此病并不会转成慢性,病毒也不会持续存在肝中。2甲型肝炎病毒是爆发性肝炎最常见的原因之一(10-20%)。3感染甲型肝炎一旦发病,HAV总抗体即为阳性(IgM),在自然感染之后,通常终其一生都可以测到HAVIgG抗体并且可以在再次感染时使机体免于感染。4现今可以采用甲肝疫苗以及甲乙肝混合疫苗。5在接种甲肝疫苗二周之后可以测得HAV

3、IgG抗体阳性。在完全免疫的病例中,抗体的保护功效通常可以持续好几年。一般没有定义免疫保护的限定值,但通常认为1020 IU/l以上水平的HAV抗体才能够使机体免于感染。HAV抗体检测用于诊断过去或目前存在的甲型肝炎感染,以及观察接种HAV疫苗之后的免疫反应。原理：竞争原理:总检测时间:18分钟第1步 ：50 l的标本;标本中的HAV抗体和加入的HAV抗原相结合。第2步 ：加入生物素化的抗体和钌复合物a标记的HAV抗原特异性抗体以及链霉亲和素包被的磁珠微粒，HAV抗原上仍然游离的结合位点被占据。形成的免疫复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。将反应液吸入测量池中，通过电磁作用将磁珠

4、吸附在电极表面。未与磁珠结合的物质通过ProCell被去除。给电极加以一定的电压，使复合体化学发光，并通过光电倍增器测量发光强度。通过由2点校准生成的分析仪专有的校准曲线和通过试剂条码提供的主曲线来确定结果。a) 三羟甲基氨基甲烷(2,2-联吡啶) 钌(II)-化合物(Ru(bpy)2+3 试剂：M 链霉亲和素包被的磁珠微粒(透明盖),1瓶,6.5 ml:链霉亲和素包被的磁珠微粒, 0.72 mg/ml; 含防腐剂。R1HAV抗原 (灰盖),1瓶,10 ml:HAV抗原(人类) 40 U/ml(罗氏单位);HEPESb缓冲液 50 mmol/l, pH 7.2;含防腐剂R2生物素化的抗HAV抗

5、体;Ru(bpy)32+标记的抗HAV抗体（黑盖），1瓶，10ml；生物素化的单克隆抗HAV抗体(老鼠) 0.25 g/ml; 以钌复合物标记的单克隆抗HAV抗体 (老鼠) 0.15 g/ml; HEPES 缓冲液 50 mmol/l, pH 7.2; 含防腐剂Cal 1 阴性定标液（白盖），2瓶（冻干品），1.0ml/瓶 ：HAV抗体为阴性的人血清, 含防腐剂Cal 2 阳性定标液（黑盖），2瓶，1.0ml/瓶：含HAV抗体(人类)约46 IU/l的人血清,含防腐剂。警告和注意事项仅用于体外诊断。在使用本试剂盒时必需遵循所有试验室试剂操作的注意事项。所有废弃物必需按照当地法规进行处置。专业人

6、员可要求获得安全数据单。所有人来源材料必须视为有潜在感染性的物质。定标液(Cal1 and Cal2)由捐赠者血液单独特殊制备而成，并经检测HBSAg、HCV抗体、HIV抗体，均为阴性。所应用的检测方法经FDA认可或符合欧洲法令98/79/EC附件II列表A。含有HAV抗体的血清 (Cal2)和HAV抗原的血清(人类,R1)以-丙内酯和紫外线杀菌。但由于任何灭活方法和实验方法都不能绝对地排除潜在感染的危险，故该产品仍需视作病人标本一样仔细处理。接触者必须遵循健康专业机构相应的法规9.10。若试剂超过保质期，则不能再使用。避免试剂和标本（标本、校准液和质控液）产生泡沫。试剂处理试剂盒为即用型（除

7、外Cal1和Cal2），专用于配套系统。Elecsys HAV 抗体定标液1和2: 通过精确加入1.0mL的蒸馏水或去离子水小心溶解一个试剂瓶中的内容物，并封闭静置15分钟复溶。小心混合，避免起泡。将复溶定标液转移至提供的带拉环盖的空标记试剂瓶中。Elecsys 2010和cobas e分析仪:在2025C定标过程中，复溶的定标液Cal1和Cal2应放在分析仪上。使用后，应立即关闭瓶盖，并将其储存在28C。确保开启的带拉环盖上没有定标液。因为可能会发生蒸发，每瓶定标液定标次数不宜超过5次。MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601和cobase 602分析仪：除非需要

8、在分析仪上使用总量定标液定标，将分装即用型定标液转移至带拉环盖的空试剂瓶（定标液组小瓶）中。将提供的标签粘贴在这些额外的试剂瓶上。将这些分装定标液储存在28条件下备用每瓶分装定标液只可用一次。可通过各试剂条形码读入正确操作所需的全部信息。储存和稳定性：存放在2-8 C。请垂直摆放Elecsys HAV 抗体试剂盒(M, R1, R2)，以确保使用前仪器通过自动搅拌能够完全混匀磁珠微粒。稳定性：未开封试剂，28有效期内均可使用M、R1、R2开封试剂，288周放置分析仪上MODULAR ANALYTICS E170、cobas e 601和cobas e 602上，20258周放置分析仪Elecs

9、ys 2010 和 cobas e 411上，20258周冻干校准品保存至有限期末复溶校准品，286周放置分析仪Elecsys 2010 和 cobas e 411上，2025最多5小时放置分析仪上MODULAR ANALYTICS E170、cobas e 601和cobas e 602上仅使用一次注意:请垂直摆放定标品！请确保开启的带拉环盖上没有定标液。标本采集和准备：只有下列标本可以用来检测血清：使用标准标本管或含分离胶管采集。血浆：肝素锂、肝素钠、EDTA-K3、枸橼酸钠抗凝。标准:血清测量值的回收率在90-110%之内或斜率0.9-1.1+截距0.95。标本在28度可稳定7天，-20

10、度可稳定3个月。标本可冻融6次。选择合适的试管进行不同类型样本的采集，不是所有的试管均可用于检测。不同厂商的样本采集系统可能含有不同的物质，某些情况下会影响检测结果。如果使用原始管进行检测（样本前处理系统）时，应遵循生产商所提供的指导。注意：有沉淀的样本和冰冻样本检测前必须先作离心处理。不要使用加热灭活的标本。请勿使用叠氮化物稳定的标本或和质控品。确保患者标本、定标液和质控品在测定前预温至室温2025C。因为可能会发生蒸发，标本和定标液和质控品需在2小时内完成测定。提供的材料：参见“试剂工作液”章节 2 x 6 瓶标签 4 个空的带标签的有盖小瓶未提供的材料：货号 04855043190, P

11、reciControl Anti-HAV 规格 2x 4.0 ml, 各含PreciControl Anti-HAV 1和 2货号11361252122，稀释的甲肝病毒，2 x 15 mL样本稀释液货号11776576322，CalSet Vials，2 x 56空的带盖试剂瓶实验室基础设备Elecsys 2010 、MODULAR ANALYTICS E170或cobas e分析仪蒸馏水或去离子水Elecsys 2010和cobas e 411分析仪所需材料：货号11662988122,，ProCell, 6 x 380 mL系统缓冲液货号11662970122, CleanCell, 6

12、x 380 mL测量池洗液 货号11930346122, Elecsys SysWash, 1 x 500 mL 附加洗液货号11933159001, SysClean 适配器 货号11706802001, Elecsys 2010 分析杯, 60 x 60 反应管货号11706799001, Elecsys 2010 分析吸头, 30 x 120 移液管吸头 MODULAR ANALYTICS E170和cobas e 601分析仪和cobas e 602分析仪所需材料：货号04880340190,ProCell M, 2 x 2 L 系统缓冲液货号04880293190, CleanCel

13、l M, 2 x 2 L测量池洗液 货号03023141001, PC/CC杯, 12个用于在检测前预热Procell M及Cleancell M。货号03005712190,ProbeWash M, 12 x 70 mL 清洗液，用于在检测完毕后或更换试剂时清洗试剂针。货号12102137001,反应杯/吸头 组合装,84反应杯/吸头 组合装48盒,废物袋 货号03023150001, WasteLiner,废物袋 货号03027651001,系统清洁适配器 M所有分析仪需要：货号11298500316, Elecsys SysClean, 5 x 100 mL 系统清洗液 检测方法：要优化

14、检测性能，请遵照本说明书中有关分析仪的相关指导，并参照分析仪操作手册。试剂使用前分析仪自动搅拌磁珠微粒，使其处于悬浮状态。试剂相关信息可通过条形码自动读取，在特殊情况下，分析仪无法自动读取条码信息时，请输入条码标签上的15位数字序列。MODULAR ANALYTICS E170, Elecsys 2010 and cobas e分析仪： 将冷藏试剂预温到20 度后放置于仪器的试剂盘上(20 C)，避免产生泡沫。系统自动控制试剂温度和开/关试剂瓶盖。将复溶定标液Cal 1和Cal 2放在分析仪的标本测试区。只在定标时打开瓶盖。有关定标的所有必要信息都编码在试剂瓶条形码标签上并被自动读入。定标完成

15、后，将Cal 1和Cal 2储存在28下或丢弃(MODULAR ANALYTICS E170 and cobas e 601和cobas e 602分析仪）。定标：溯源性：该方法已经过NIBSC第二国际标准HAV抗体免疫球蛋白标准化，NIBSC编号97/646。定标频率：使用Elecsys HSV-2 IgG Cal1、Cal2对每批试剂和新鲜试剂（新试剂盒注册后在分析仪上放置不超过24小时）进行定标。另外，以下情况需要再次定标： 使用同一批号试剂，1月后（28天）7天后（同一试剂盒在分析仪上使用）根据需要：例如，Elecsys PreciControlHAV 抗体试剂质控结果超出范围时。根据

16、有关规章要求可增加定标频率。质控使用Elecsys PreciControl HAV抗体,进行质控。当此项检查有持续运作,质控液1和2每24小时至少应该单独测定一次,每个试剂组以及每次定标后也都要测定一次。质控区间和限制应该合乎每个实验室个别的需求。所取得的质控值应位于设定的范围内。若质控值在设定范围外，各实验室应采取相应的纠正措施。 若有需要,请重复测量。注意：请参阅assay/precicontrol试剂盒内附测定值参考表，并检查是否需要手工输入靶值。计算*分析仪会自动计算每个标本中HAV抗体的浓度,报告单位为IU/l。结果说明:在Elecsys HAV抗体试验中标本浓度 20 IU/l

17、表示目前存在或过去曾罹患甲型肝炎感染或在接种甲肝疫苗后, 出现了HAV抗体抗体。重要提示：依分析所使用方法的不同,所测得HAV抗体的值可能有所差异。当使用不同厂家的分析方法,所获得标本的结果会因此而不同,若在监控疫苗接种情况的期间,分析步骤有改变的话, 由新方法所得HAV抗体的测定值必须使用对照方法进行平行测定。干扰因素：该方法不受黄疸（胆红素855mol/L或50mg/dL）、溶血（血红蛋白 0.745 mmol/L 或1.2g/dl）、脂血（脂质1000mg/dl）和生物素（生物素5mg/天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。18种常用药物经试验对本测定无干扰。在罕见

18、病例中由于存在高滴度的分析物特异性抗体,链霉亲和素抗体和钌抗体可能会对结果有所干扰。通过合适的试验设计可最大程度的减少这些效应。重要！HAV抗体测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。如结果判定有困难，特别当测定值在cutoff值附近时，应考虑受测者曾注射甲肝疫苗。期望值*3.0060 IU/l (由主曲线的最低检测限及最大检测值来定义)低于最低检测限的测定值报告为 60 IU/l或必须稀释。在某些个例中,含有HAV IgM抗体的标本,稀释后的检测结果可能为非线性变化。检测方法低限：检测下限检测下限：20 IU/ml,结果要乘以稀释倍数。特异性参数：试剂在各分析仪上的性能试验

19、数据如下。各实验室得出的数据可能会稍有差异。精密度：应用Elecsys试剂盒、人血清样本和质控品检测精密度（可重复性n21,中间精密度n10）；按照CLSI（临床和实验室标准研究所）的改良协议（EP5-A）测定MODULAR ANALYTICS E170分析仪的中间精密度：每天测试6次,进行10天(n=60),结果如下所示: Elecsys 2010 and cobas e 411分析仪批内精密度c批间精密度样品均值IU/LSDIU/LCV%均值IU/LSDIU/LCV%HSd，阴性3.00.29-3.00.69-HS，cutoff附近17.60.221.218.40.744.0HS，阳性41

20、.90.481.242.31.232.9PCe A-HAV1 20.90.401.921.70.813.7PCe A-HAV135.80.842.336.51.022.8c)重复性=批内精密度d) HS=人血清e) PC = PreciControlMODULAR ANALYTICS E170和 cobas e 601和cobas e 602分析仪批内精密度批间精密度样品均值IU/LSDIU/LCV%均值IU/LSDIU/LCV%HS，阴性3.00.34- 20 IU/ml)。使用Elecsys HAV抗体以及商品化对照试验,检测165个来自46位接受甲肝疫苗受试者的标本。所有标本的抗HAV抗

21、体浓度都在各自的检测限值之上。临床特异性：为了检测检测临床特异性，1301例来自无HAV感染症状的献血者，住院病人，孕妇和透析病人标本经Elecsys 抗HAV和对照方法检测, 使用Elecsys 抗HAV检测，其中1286例检测结果小于20IU/L。该检测的临床特异性为98.85，95的置信区间为98.1199.35。参考文献：1. Robertson BH, Nainan OV. Genetic and antigenetic variants of hepatitis Avirus. In: Viral Hepatitis and Liver Disease. Eds: Rizzeto

22、M, Purcell RH,Gerin JL, Verme G, Edizioni Minerva Medica, Turin 1997;14-18.2. Koff RS. Hepatitis A. Lancet 1998;341:1643-1649.3. Lemon ML, Days SL. Type A hepatitis. In: Gorbach S, Bartlett JG, BlacklownNL (eds). Infectious Diseases. Saunders WB, Philadelphia, 1992;705-708.4. Stapleton JT. Host Immune Response to Hepatitis A Virus.JID 1995;171(Suppl 1):9-14.5. Ambrosch F, Wieder