螺传寄生虫病及螺类感染检测课件

螺传寄生虫病及螺类感染检测寄生虫病研究所陆绍红ZHEJIANGACADEMYOFMEDICALSCIENCES

创新服务螺传寄生虫病血吸虫病广州管圆线虫病华支睾吸虫病并殖吸虫病布氏姜片虫病……螺类感染检测病原学检测：分子检测：PCRLAMP一、螺传寄生虫病一、螺传寄生虫病吸虫主要特点虫卵必须入水才能发育；生活史复杂，第一中间宿主多为淡水螺。成虫背腹扁平，具口、腹吸盘，寄生于人及哺乳动物体内。囊蚴为感染期，经口感染。吸虫基本发育过程：卵→多种幼虫（毛蚴→胞蚴≡﹥雷蚴≡﹥尾蚴→囊蚴）→成虫。毛蚴胞蚴雷蚴尾蚴囊蚴流行现状：全球有76个国家和地区有血吸虫的流行，在我国主要分布在长江流域及以南12个省/自治区/直辖市，湖沼地区是我国目前最主要的血吸虫病流行区。

2008年底,卫生部、农业部等联合组织的全国血吸虫病疫情现状考评结果显示,全国454个血吸虫病流行县(市、区)人畜血吸虫感染率均已降至5%以下,全部达到疫情控制标准。2010年全年急感报告病例数在50万例以下，目前病人总数已降至40万以下。防治策略：以传染源控制为主的综合防治流行因素：传染源：病人、病牛等。传播环节：含虫卵的粪便污染水源；水体中的钉螺；接触含尾蚴的疫水。治疗药物：吡喹酮、青蒿素、蒿甲醚六种寄生于人体的血吸虫

日本血吸虫（S．japonicum）曼氏血吸虫（S．mansoni）埃及血吸虫（S．haematobium）间插血吸虫（S．intercalatum）湄公血吸虫（S．mekongi）马来血吸虫（S．malayensis）日本血吸虫曼氏血吸虫埃及血吸虫间插血吸虫湄公血吸虫血吸虫中间宿主—钉螺山丘型钉螺水网型钉螺湖沼型钉螺拟钉螺细钻螺方格短沟卷烟管螺华支睾吸虫Clonorchissinensis病原：成虫寄生在人体的肝胆管内，又称肝吸虫。病变：主要表现为肝受损，胆管呈腺瘤样病变，出现胆管炎、胆囊炎或阻塞性黄疸。严重时在门脉区出现纤维组织增生和肝细胞的萎缩变性，继发肝硬化。分布：主要分布在亚洲，我国有25个省、市、自治区有不同程度流行。其中，广东省感染率相对较高。感染方式：食入生的或半生熟的含活囊蚴的淡水鱼、虾而感染；不良卫生习惯，如抓鱼后不洗手或用口叼鱼；盛过生鱼的器皿盛熟食物品等。治疗：吡喹酮、阿苯达唑

华支睾吸虫生活史并殖吸虫Paragonimus病原：世界报道有50多种，中国有32个种2个型，以卫氏并殖吸虫为代表的人兽共患型和以斯氏狸殖吸虫为代表的兽主人次型。分布：世界性分布，在我国27个省、市、自治区均有报道。

感染方式：以各种方式食入生或半生的含活囊蚴的溪蟹或蝲蛄等。临床表现:

1、亚临床型（隐性感染）

2、急性并殖吸虫病，常表现为全身过敏反应、高热、胸腹痛、气促、肝大并伴有荨麻疹等。3、胸肺型并殖吸虫病最典型临床表现：咳嗽、胸痛、咯血、痰带腥味

并殖吸虫致病肺部虫囊切片肺吸虫病人常误诊为肺肿瘤

并殖吸虫中间宿主放逸短沟蜷方格短沟蜷川蜷螺布氏姜片吸虫生活史成虫童虫虫卵毛蚴胞蚴两代雷蚴尾蚴囊蚴在人或猪体内在水中（小肠内）扁卷螺水生植物随粪排出经口食入布氏姜片吸虫中间宿主——扁卷螺

广州管圆线虫

AngiostrongyluscantonesisFemaleadultMaleadult流行：主要流行于东南亚、太平洋岛屿、日本和美国等30多个国家和地区；我国的自然疫源地主要分布在浙江、福建、江西、湖南、广东、广西、海南和台湾地区，多数呈散在分布。目前全世界已有3000多病例报道，2006年在北京市发生的广州管圆线虫病暴发中，从6月24日发现首例病人至9月24日，北京市各医院共确诊160例病人，其中138系因食凉拌福寿螺肉所致，此次本病暴发成为北京市的重大突发公共卫生事件。我国已有9个省（自治区/直辖市）报告了广州管圆线虫病例，2008年底共计报告380多例，其中90%发生于群体感染。中间宿主：56余种，在我国发现的要有褐云玛瑙螺、福寿螺和铜锈环棱螺。2006~2007年全国广州管圆线虫病自然疫源地调查发现，福寿螺、褐云玛瑙螺和蛞蝓的平均感染率分别为6.8%、13.4%和6.5%。传染源：最主要的是鼠类，以褐家鼠和黑家鼠较为普遍。经口感染：1）生食或半生生食螺类、鱼、虾、蟹等：爆炒或麻辣福寿螺、凉拌螺肉等为主要原因；2）幼虫污染手或食物：用螺类喂养家禽或加工螺类的人员；3）生食蔬菜：陆地蜗牛或蛞蝓爬过蔬菜时含幼虫的分泌物可能粘在蔬菜上；4）饮生水：含幼虫的中间宿主分泌物也可排入水中。广州管圆线虫

Angiostrongyluscantonesis广州管圆线虫生活史螺内寄生虫的病原学检测

压片法：逸蚴法：将单只钉螺置于指形试管内，加脱氯水至试管口，用尼龙纱盖好管口。置20～25℃、光照条件下，4～8h后用放大镜或解剖镜在灯光下观察指管水面有无血吸虫尾蚴，必要时可用白金耳取表面水滴于载玻片，在镜下观察。病理切片法：消化法：将螺体软组织剪碎，按1g组织加25ml消化液（7g胃蛋白酶，7mlHCl，1LddH2O）的比例置于37℃孵育1h，适当孔径的分子筛过滤后镜检。组织匀浆镜检法：螺肺囊镜检法：将福寿螺压碎剔壳，沿外套膜的左侧至后侧的基部剪开，将外套膜向右翻开取外套膜的后半部分的约为24mm×l6mm大小的椭圆形囊状结构“肺囊”。然后剪开囊袋(双层)两边沿，翻开囊袋呈单层后铺平．光镜观察幼虫结节（0.07mm*0.13mm~0.24mm*0.34mm大小，圆形或椭圆形的白色结节）。若囊袋层壁较厚，尽量拉平，或用解剖针拨动等手段观察囊壁组织的幼虫结节。福寿螺肺囊镜检法幼虫结节1.KumagaiT,Furushima-ShimogawaraR,OhmaeH,WangTP,LuS,ChenR,WenL,OhtaN:DetectionofearlyandsingleinfectionsofSchistosomajaponicumintheintermediatehostsnail,Oncomelaniahupensis,byPCRandloop-mediatedisothermalamplificationassay.

AmJTropMedHyg2010,83:542-548.2.ChenJH,WenLY,ZhangXZ,ZhangJF,YuLL,HongLD:[DevelopmentofaPCRassayfordetectingSchistosomajaponicum-infectedOncomelaniahupensis].

ZhongguoJiShengChongXueYuJiShengChongBingZaZhi2006,24:204-207.3.VidigalTH,MagalhaesKG,KissingerJC,CaldeiraRL,SimpsonAJ,CarvalhoOS:AMultiplex-PCRapproachtoidentificationoftheBrazilianintermediatehostsofSchistosomamansoni.

MemInstOswaldoCruz2002,97Suppl1:95-97. 4.WeiFR,LiuHX,LvS,HuL,ZhangY:[MultiplexPCRassayforthedetectionofAngiostrongyluscantonensislarvaeinPomaceacanaliculata].

ZhongguoJiShengChongXueYuJiShengChongBingZaZhi2010,28:355-358.5.魏纪玲,周卫川,邵碧英,余书生,王寿昆,陈文炳,陈寿铃:PCR检测螺类感染广州管圆线虫方法的建立与应用.

中国人兽共患病学报2008,24:1136-1140.螺内广州管圆线虫、血吸虫的PCR检测野外采集小管福寿螺172只，肺检法检测后，进行多重PCR扩增。多重PCR的敏感性为93.8%(45／48)，特异性为80.6％(100／124)。多重PCR法的阳性检出率为40.1％(69／172)；肺检法的阳性检出率为27.9％(48／172)，差异具有统计学意义。小管福寿螺中广州管圆线虫III期幼虫的PCR检测Loop-MediatedIsothermalAmplification（LAMP）methodTargetgene(DNAorRNA)Primers（FIP,F3,BIP,B3）DNAPolymerasewithstranddisplacementactivitydNTPsBuffersolutionRTase(forRNA)65℃,15–60min.DetectionSimpleRapid(highefficiency)Specific(highspecificity)CosteffectiveAugust,2011PapersaboutLAMPintheworldAugust,2011LAMPdevelopedinparasitesstudy螺内广州管圆线虫、血吸虫的LAMP检测1. KumagaiT,Furushima-ShimogawaraR,OhmaeH,WangTP,LuS,ChenR,WenL,OhtaN:DetectionofearlyandsingleinfectionsofSchistosomajaponicumintheintermediatehostsnail,Oncomelaniahupensis,byPCRandloop-mediatedisothermalamplification(LAMP)assay.

AmJTropMedHyg2010,83:542-548.2. ChenR,TongQ,ZhangY,LouD,KongQ,LvS,ZhuoM,WenL,LuS:

Loop-mediatedisothermalamplification:rapiddetectionofAngiostrongyluscantonensisinfectioninPomaceacanaliculata.

ParasitVectors2011,4:204.3.LiuCY,SongHQ,ZhangRL,ChenMX,XuMJ,AiL,ChenXG,ZhanXM,LiangSH,YuanZG,etal:SpecificdetectionofAngiostrongyluscantonensisinthesnailAchatinafulicausingaloop-mediatedisothermalamplification(LAMP)assay.

MolCellProbes2011,25:164-167. DesignofprimersfortheLAMPmethodTarget

DNA5'3'5'3'FIPPrimerF25'3'F1cF3PrimerF1cF2cF3cB1B2B3B1cB2cB3cF1F2F35'F33'BIPPrimerB3Primer3'B2B1c5'5'3'B3TargetDNA:Sj28SrDNA

Primers:FIP、BIP、F3、B3ProtocaloftheLAMPmethodDetection

DNApurification:

AddNaOH(50mM)Crushsnails,boiledat95℃for30minCentrifugeat10000rpmfor5minandtake50ulsupernatantAdd50ul1MTris-HClpH8.0Mixwithvotexandspindown

2×ReactionBuffer10μlPrimer:FIP32pmolBIP32pmolB38pmolF38pmolBstDNApolymerase0.8μlIntercalatingdye0.8μlTotal

20μl65℃,60minDetectionResultofSensit