化学发光法技术概要电子教案课件

化学发光法技术概要化学发光法反应模式

一步法（15min反应+15min显色）

夹心法

竞争法

两步法（15min+15min反应+15min显色）

间接法

捕获法一步法：夹心法一步法：竞争法两步法：间接法两步法：捕获法化学发光法反应介质固相介质：磁珠酶标记物：碱性磷酸酶（AP）发光底物：AMPPD磁珠基本材质：Fe3O4/Fe2O3，褐色磁性物质直径大小：1μm左右磁珠类型：

分为氨基磁珠、羧基磁珠、苯甲磺酰基磁珠和链霉亲和素磁珠等四种磁珠磁珠特性：

不同供应商的不同类型磁珠，亲水性不同，在溶液中的状态也不同，所需的磁吸时间也不同。磁吸时间过短，会造成丢磁；磁吸时间过长，会造成磁珠聚集，不宜分散。问题：如何确定磁吸时间？碱性磷酸酶（AP）及发光底物RLUs值范围板式发光范围1,000-20,000,000RLUs管式发光范围0-10,000,000RLUs分辨率要求对于测定不同浓度的标本，至少在试剂盒标准曲线范围内能明显区分两者的RLUs。问题：底物空白是否需要扣除？市场上主要全自动仪器机型及应用（1）雅培公司Axsystem:基于粒子的荧光偏振技术。Architect系列：基于磁分离的化学发光检测。拜尔公司ADVIACentaur：基于磁分离的化学发光检测。贝克曼公司Access系列：基于磁分离的化学发光检测。生物梅里埃公司Vidas系列：管式包被的酶促荧光检测。市场上主要全自动仪器机型及应用（2）德灵公司Dimension系列：多种技术的复合体，基于粒子的酶标检测及粒子增强与非增强的免疫比浊测定等。DPC公司Immulite系列：基于粒子离心分离技术的化学发光检测。强生公司Vitros系列：管式包被的化学发光检测技术。罗氏公司Elecsys系列：基于磁分离的电化学发光检测技术。各种全自动仪器主要技术参数HCG第一个结果报告时间（min）检测通量（T/hour）Axsym1068-120Architecti200015.6200Architectci8200<15.61200ADVIACentaur18240Access15100Access215100Vidas3060DimensionXpand16250DimensionRXL16165－700Immulite15120Immulite200035200Vitros2490Elecsys2010988Elecsys1010955全自动仪器实验流程要求（1）主要实验流程（1）——一步法样本+试剂1（或试剂1+试剂2），37℃孵育5－30分钟；洗涤3-5次；加入发光底物，5-15分钟检测。全自动仪器实验流程要求（2）主要实验流程（2）——一步半法样本+试剂1（或试剂1+试剂2），37℃孵育5－30分钟；加入试剂3，37℃孵育5－30分钟；洗涤3-5次；加入发光底物，5-15分钟检测。全自动仪器实验流程要求（3）主要实验流程（3）——两步法样本+试剂1（或试剂1+试剂2），37℃孵育5－30分钟；洗涤3-5次，加入试剂3（或试剂3+试剂4），37℃孵育5－30分钟；洗涤3-5次；加入发光底物，5-15分钟检测。全自动仪器其他要求样品加量10µl~200µl，试剂加量50µl~200µl，随检测项目不同而有所增减。洗涤液加量不小于350µl。发光检测恒温为宜。PMT能达到实验所需要求。带有内置计算浓度功能及校准功能。需要解决的关键点（1）洗涤模块：

洗涤次数？洗涤液种类？洗涤液体积？洗涤是否带超声？洗涤流速？是否预洗？加液速度？磁分离模块：

底吸还是侧吸？磁力大小的选择？磁分离时间？永磁还是顺磁？需要解决的关键点（2）混匀模块：

试剂架的混匀功能？混匀频率和混匀方式？反应槽是否带有混匀功能？样品针和试剂针：