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文档简介
ICS07.080
A20/39
中华人民共和国国家标准
GB/TXXXXX—XXXX
生物产品降解拟除虫菊酯农药功效评价
技术规范
Technicalspecificationsforefficacyevaluationofdegradationof
pyrethroidsbybiologicalproducts
(征求意见稿)
201X-XX-XX发布201X-XX-XX实施
中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局
中国国家标准1化管理委员会
发布
2
生物产品降解拟除虫菊酯类农药功效评价技术规范
1范围
本标准规定了生物产品降解拟除虫菊酯类农药的功效评价原理、试剂与材料、仪器设备
与器具、分析步骤和结果分析。
本标准适用于微生物和酶生物产品降解拟除虫菊酯类农药降解效果评价。
2规范性引用文件
本标准内容引用了下列文件和其中的条款,凡是注日期的引用文件,仅所注日期的版本
适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。
GB23200.85拟除虫菊酯农药气相色谱方法
GB/T6682分析实验室用水
GB/T15818培养基配置方法
NY/T761-2008降解产物拟除虫菊酯农药的提取方法
NY/788-2018相对标准偏差要求
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文本。
3.1
生物产品biologicproducts
利用生物技术获得的产品。
3.2
拟除虫菊酯类农药pyrethroids
模拟天然除虫菊素合成的含有多个苯环结构的农药。
3.3
降解效果degradationeffect
生物产品降解拟除虫菊酯类农药的能力。
4原理
3
用生物产品对拟除虫菊酯类农药进行处理,采用液液萃取法萃取生物制品降解反应结束
后反应体系中拟除虫菊酯农药,用气相色谱测定拟除虫菊酯含量,计算生物产品对拟除虫菊
酯类农药的降解率,评价生物产品降解拟除虫菊酯农药的降解效果。
5试剂和材料
所有试剂除另有说明外,均为分析纯,水为符合GB/T6682中规定的一级水。
5.1拟除虫菊酯农药
拟除虫菊酯农药纯度均≥99%。
5.2基础液体培养基
按照GB/T15818中方法配制
5.30.01mol/L磷酸盐缓冲液,pH8.0
分别配制0.2mol/L的Na2HPO4和0.2mol/L的NaH2PO4,量取Na2HPO461mL,NaH2PO439
mL,用3mol/L的稀盐酸和1mol/L的氢氧化钠调节溶液pH备用。
6仪器和设备
6.1气相色谱仪:配有电子轰击源(EI)。
6.2分析天平:感量为0.0001g。
6.3离心机:转速不低于4000r/min。
6.4氮吹仪
6.5涡流混匀机
6.6生化培养箱
6.7气浴恒温振荡器:转速范围,起动-300r/min;温控范围,室温-100℃。
6.9低温冷冻多管离心机:转速可达10000rpm以上。
6.10旋转蒸发仪:转速范围:20-280rpm;恒温锅最高温度:185℃。
7分析步骤
7.1试验设计
4
不同类型生物产品降解拟除虫菊酯农药效果试验设计应符合表1要求。
表1生物产品降解拟除虫菊酯类农药效果试验设计
产品种类
项目
微生物产品酶产品
1.供测样品
处理设计2.失活样品
3.空白对照
按照结构选择4种:环丙烷羧酸类:甲氰菊酯;卤
拟除虫菊酯农药选择代环丙烷羧酸类:氯氰菊酯;非环丙烷羧酸类:氟氰菊
酯;非羧酸酯类:肟醚菊酯。
拟除虫菊酯农药标准品用正己烷配制成储备溶液,
农药处理4℃保存备用,试验时稀释成一定浓度的工作液,现用
现配。
重复次数不少于3次
降解反应条件按正交试验结果确定
7.2供试微生物产品试验实施
7.2.1培养基制备
选择基础培养基,或根据微生物特殊生长需要对培养基进行改良。
7.2.2供试样品处理
块状固体产品应进行研磨处理。
7.2.3失活样品处理
取供试的固体或液体微生物样品进行121ºC,30min杀菌处理。
7.2.4最佳反应体系确定
设计正交试验,影响因素宜选取微生物添加量、反应温度、反应转速、反应时间、底物
浓度等,确定最佳反应体系条件。
7.2.5降解试验
取250mL三角瓶9个,空白样3个,供试样品瓶3个,失活样品瓶3个。按照最佳反
应体系确定的底物浓度,制备底物溶液,灭菌后备用。然后根据微生物添加量,制备成反应
体系为100mL的培养液,在最佳反应体系条件下进行降解反应。
5
7.3供测酶试验实施
7.3.1供试样品处理
固体酶产品应进行研磨处理,称取一定质量的供测固体酶粉,采用不同pH的磷酸盐缓冲
液按要求稀释为不同浓度(g/mL)备用;若供测样品为液体,用不同pH的磷酸盐缓冲液按要
求稀释为不同浓度(mL/mL)备用。
7.3.2失活样品处理
取供试的固体或液体酶样品在100ºC环境下进行30min的去酶活处理。
7.3.3最佳反应条件确定
设计正交实验,影响因素宜选择酶浓度、底物浓度、反应温度、反应时间、pH值等,
确定最佳反应体系条件。
7.3.4降解试验
取25mL离心管9个,空白样3个,供试样品瓶3个,失活样品瓶3个。按照最佳反
应体系确定的微生物添加量、底物浓度,制备成反应体系为10mL的反应液,在最佳反应
体系条件下进行降解反应。
7.4浓度测定
反应液按照NY/T761要求进行处理,然后按照GB23200.85要求进行测定。
8分析分析
8.1结果计算
降解率按照式(1)计算::
..............................(1)
(��−𝑋)−��−𝑋−(��−𝑋)
�=��×100%
式中:
R——降解率(%);
Xi——底物原始浓度(mg/L);
Xa——为供试样品降解反应终点底物浓度(mg/L);
Xb——为失活样品降解反应终点底物浓度(mg/L);
Xc——为空白样品降解反应终点底物浓度(mg/L)。
以平行样的平均值为最终的降解率值,计算结果保留到小数点后两位。
8.2结果判定
以降解率的大小评价被测试生物产品的降解功效:降解率大于等于80%,小于100%时,
6
降解效果为好;降解率大于等于60%,小于80%时,降解效果为良好;降解率大于等于40%,
小于60%时,降解效果为
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