疾控中心食品微生物检测中的新技术-KingFisher磁珠纯化系统

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SciencePPT文档系列(PPT可编辑版)Thermo

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Science疾控中心食品微生物检测中的新技术--KingFisher磁珠纯化系统高莹博士产品专家Thermo

Fisher

Scientificying.gao@Thermo

Fisher

Scientific2006年11月9日–热电和飞世尔科学的合并完成，ThermoFisher

Scientific成立公司合并后的收入将使Thermo

Fisher

Scientific位列财富杂志全球前300强企业的行列新公司将成为高速增长的生命科学、实验室及卫生科学领域最重要的产品与服务供应商最为领先的产品与服务组合最广泛的全球商业网络最全面的产品种类Thermo

Fisher

Scientific

美国应用生物系统

安捷伦科技

贝克曼库尔特

碧迪医疗

通用电气医疗集团

Invitrogen

梅特勒托利多

珀金埃尔默

西格玛奥德里奇

瓦里安

公司我们是谁优

势为研究、分析、开发和诊断领域提供分析仪器及设备、试剂、耗材、软件与服务的首要供应商规

模90亿美元的年销售收入在38个国家拥有30,000名员工服务350000家客户产品遍及150个国家能

力完备的产品组合世界一流的技术广泛的业务网络150年的专业经验经

验品牌资产世界知名品牌帮助客户使世界更健康、更清洁、更安全我们使行业在发生改变两个瞩目的品牌+

所有均来自

Thermo

Fisher

Scientific

飞世尔——生物试剂和耗材热电——世界一流的分析技术新品牌代表着创新和品质原有的热电仪器加上新的试剂、耗材和设备更加完美的实验室解决方案著名的产品名录和供应链服务多样的选择和便捷的服务齐全的设备和用品一站式服务，全面实验室产品供应商帮助我们的客户获得成功在研究和分析领域在卫生保健和

临床实验室领域诊断工具、试剂和耗材临床实验支持和临床用品在制造业和户外作业领域安全产品和个人防护环保和过程控制仪表先进的分析仪器技术改进的实验室解决方案世界一流的分析技术和最完备的实验室产品与服务组合工厂–4浦东，上海–8300

平方米浦东，上海–2600

平方米南汇，上海–9000

平方米北京–1000

平方米销售–6浦东，上海–演示中心浦西，上海北京广州成都香港员工–820工厂员工–240

人销售人员–460

人其他服务人员–120

人财务人力资源IT服务采购物流产品线科学仪器生物科学实验室产品一体化技术方案实验室软件自动化产品诊断产品过程仪表环境仪器Thermo

Fisher

Scientific

在中国

–

主要表现在中国的制造能力世界一流的制造能力2004年12月投入使用8300平方米12

个产品线在此生产通过ISO

9001、13485和14001认证原热电工厂2000年投入使用2600平方米新桥路工厂金铭路工厂ISOCERTIFIED南汇工厂2006年6月投入使用9000

平方米生产载玻片北京工厂2006年投入使用1000

平方米生产培养基ISO认证泰瑞达供应商奖目前疾控中心检测的四种食品和环境中最常见的细菌大肠杆菌O157

（E.coli

O

157）李斯特菌（Listeria)沙门氏菌（Salmonella)军团菌（Legionella）手工分离细菌的方法传统方法先富集增菌，再放到培养皿培养和检测手工免疫磁珠法增菌后，使用Dynabeads和配套手工仪器进行富集，再放到培养皿培养和检测手工方法的缺陷需耗费大量手工劳作时间灵敏度低，对于10CFU（菌落形成数）/25mg的E.coli

O157样本，检出率只能达到40％，而对于1CFU

（菌落形成数）/25mg的E.coli

O157样本则无法检出。以上数据均通过荧光定量PCR验证。所耗费的时间长，难以应付突发检测。不能够更客观的反映自然界这些细菌存在的现实。自动化细菌分离方法：KingFisher+Dynabeads富集增菌后，使用

Dynabeads在KingFisher仪器上进行自动化操作，利用免疫磁珠的特异性和

KingFisher磁头超强的吸

力完美的结合来富集细菌，大大提高细菌捡出率。WashMix

bindelute自动化方法的优势极大减少手工劳作的强度和时间极大提高灵敏度，可检测低至1CFU/25g

E.coli

O157

样本，而对于10CFU/25g

E.coli

O157样本，捡出率可达到100％In

total

35

random

meat

samples

are

tested

for

E.Coli

O157

contamination…

.食品中O157，5

沙门氏菌，单增李斯特菌免疫磁珠检测流程Experiment

outline:25g

samples

+225mLTSB-YE

broth37℃6hListeriatake

1mlO157

SalmonellaTake

1ml take

1mlBeads

purification Beads

purificationBeads

purification37℃24h37℃24h37℃24h37℃24h37℃24h37℃24hO157

plateSalmonella

plateListeria

platePick

3-5

red

clonespick

3

dark

red

clonespick

3

blue

clonesSerum

coagulation

testAPI/VITEK

characterizationSerum

coagulation

testetc.β

hemolysis,API/VITEK

characterization数据来源于上海浦东疾控2006年10月上海浦东疾控应用实例结果…常规富集方法(平板培养法)35

个肉类样品E.coli

O157阳性捡出率为0DynaBeads

手工方法35

个肉类样品E.coli

O157捡出1个阳性DynaBeads

＋

KingFisher35

个肉类样品E.coli

O157捡出3个阳性结论…DynaBeads

＋KingFisher是富集E.coli

O157最有效的方法常规方法和手工方法的假阴性率非常高，因此对于常规的细菌分离并不合适数据来源于上海浦东疾控2006年10月疾控中心日常监测的样本量统计疾控一般从5－10月开展此三个细菌的检测，每个月样本量如下表所示：大肠杆菌O157E.coli

O157李斯特菌Listeria沙门氏菌Salmonella35个食品检材√√√50个鸡鸭粪检材√数据来源于上海浦东疾控2006年10月试剂盒用量及成本统计（以浦东疾控为例统计）用量/年试剂成本/样本耗材成本/样本总成本/样本大肠杆菌O157750个检测30元5－10元35－40元李斯特菌250个检测30元5－10元35－40元沙门氏菌250个检测30元5－10元35－40元ChargeSwitch(CTS)技术应用于定量PCR检测前的E.coliO157

DNA提取CTS（电荷迁移技术）同样也是Invitrogen公司基于免疫磁珠的分离技术，也可配合KF

ml

使用（详见Thermo

网站介绍）使用CTS技术提取O157细菌DNA

用于定量PCR检测因此KF

不仅可用于样品富集，还可用于细菌检测前的DNA提取把用于DNA提取的CTS技术与自动化免疫磁珠分离技术结合，将极大降低RT-PCR的Ct值，即大大提高检测灵敏度图摘自Invitrogen网站目前国内使用自动化免疫磁珠分离系统的用户共有6个CDC用户使用KingFisher+Dynabeads上海市