农药残留量测定法标准操作规程

农药残留量测定法标准操作规程ZLSOP002400农药残留量测定法标准操作规程执行日期起草审核批准部门质量管理部质量管理部质量负责人姓名郑亚敏白静史修强签名日期分发部门质量管理部目的：建立农药残留量测定法的操作规程，以规范操作过程，确保检验结果准确可靠。适用范围：饮片中的农药残留量测定责任人：质量管理部主任，检验员内容：一、有机氯类农药残留量测定简述有机氯类农药是农药史中使用量最大，使用历史最长的一类农药，其中化学性质稳定，脂溶性强，残效期长（可达30~50年之久），易在脂肪组织中蓄积，造成慢性中毒，严重危及人类健康。本法通过提取、净化和富集等步骤制备供试品溶液，采用气相色谱法，电子捕获检测器测定。仪器与用具气相色谱仪，带有63Ni—ECD电子捕获器，载气为高纯氮（纯度＞99.9999%）,必须安装脱氧管。超声仪。离心机。旋转蒸发仪。色谱柱：SE-54或DB-1701弹性石英毛细管柱（30mX0.32mmX0.25um）具塞刻度离心管（10m］），刻度浓缩瓶，具塞锥形瓶（100ml），移液管等。3、试药与试液丙酮、石油醚（60~90℃）和二氧甲烷均为分析纯，且全部经过全玻璃整流装置重蒸馏，经气象色谱法确认，符合农残检测的要求。（或使用进口的农残级的试剂）无水硫酸钠和氯化钠均为分析纯，硫酸为优级纯。农药对照品：六六六（BHC）［包括a-BHC、B-BHC、Y-BHC、6-BHC四种异构体］，滴滴涕（DDT）［包括PP'-DDE,PP'-DDD,OP'-DDT和PP'-DDT四种异构体］及五氯硝基苯（PCNB），由国家标准物质研究中心提供标示含量（浓度）的农药标准品，也可以采用国际认可的用药标准品自行配置。4、色谱条件与系统适用性试验SE-54色谱柱：进样口温度：230℃，检测温度：300℃，不分流进样。程序升温；初始温度100℃，每分钟10℃升至220℃，再以每分钟8℃升至250℃，保持10分钟。DB-1701色谱柱：进样口温度：220℃，检测器温度：300℃，不分流进样。程序升温：初始温度140℃，保持1分钟，每分钟10℃升至210℃，再以每分钟20℃升至260℃，保持4分钟。按上述条件操作，理论板数以a—BHC峰计算应不低于1X106,两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5.5、操作方法对照品储备液的制备精密称取六六六（BHC）、滴滴涕（DDT）及五氧硝基苯（PCNB）农药对照品适量，用石油醚（60〜90℃）分别制成每1ml约含4〜5ug的溶液，即得。混合对照品储备液的制备精密量取上述各对照品储备液0.5ml,置10ml量瓶中，用石油醚（60~90℃）稀释至刻度，摇匀，即得。混合对照品溶液的制备精密量取上述混合对照品储备液,用石油醚（60~90℃）制成每1L分别含0ug、1ug、5ug、10ug、50ug、100ug、250ug的溶液,即得。供试品溶液的制备药材或饮片取供试品于60℃干燥4小时，粉碎成细粉，取约2g,精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加水20ml浸泡过夜，精密加丙酮40ml,称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用丙酮补足减失的重量，再加氯化钠约6g,精密加二氯甲烷30ml,称定重量，超声处理15分钟，再称定重量，用二氯甲烷补足减失的重量，静置（使分层），将有机相迅速移入装有适量无水硫酸钠的100ml具塞锥形瓶中，放置4小时。精密量取35ml,于40℃水浴上减压浓缩至近干，加少量石油醚（60~90℃）如前反复操作至二氯甲烷及丙酮除净,用石油醚（60~90℃）溶解并转移至10ml具塞刻度离心管中，加石油醚（60〜90℃）精密稀释至5ml,小心加入硫酸1ml,振摇1分钟，离心（3000转/分）10分钟，精密量取上清液2ml，置具刻度的浓缩瓶中，接旋转蒸发仪，40℃下（或用氮气）将溶液浓缩至适量，精密稀释至1ml，即得。制剂取供试品，研成细粉（蜜丸切碎，液体直接量取），精密称取适量（相当于原药材2g），以下按上述供试品溶液制备法制备，即得供试品溶液。测定法分别精密吸取供试品溶液和与之相对应的混合对照品溶液各1ul，分别连续进样3次，取3次平均值，按外标法计算供试品中9种有机氯农药残留量。6注意事项本实验所用器皿应严格清洗（不能残存卤离子）供试品溶液制备时，有机相减压浓缩务必至近干，避免待测成分损失。为防止假阳性结果，可选择不同极性的色谱柱进行验证，有条件的可采用气质联用予以确认如样品中有其他成分的干扰，可适当的改变色谱条件，但需要进行空白验证。二、有机磷类农药残留量测定法1、简述很多有机磷类农药具有毒性，其残留严重危及人体健康。中国药典（2010版一部）收载了有机磷类农药（对硫磷、甲基对硫磷、乐果、氧化乐果、甲胺磷、久效磷、二嗪弄、乙硫磷、马拉硫磷、杀扑磷、敌敌畏、乙酰甲胺磷）的测定方法本法通过提取、净化和富集等步骤制备供试品溶液，采用气相色谱法，氮磷检测器测定2仪器与用具气象色谱仪，带有氮磷检测器（NPD），载气为高纯氮（纯度＞99.9999%）。超声仪旋转蒸发仪多功能真空样品处理器、活性炭小柱（120~400目，石墨碳填料0.25g，内径0.9cm）氮吹仪色谱柱：DB—17MS或HP—5弹性石英毛细管柱（30mX0.25mmX0.25um）或类似极性的毛细管柱塞锥形瓶、250ml平底烧瓶、棕色量瓶、移液管等3、试药与试液无水硫酸钠为分析纯乙酸乙酯、正己烷（农残级或分析纯试剂经过全玻璃蒸馏装置重蒸馏，经气相色谱法确认，符合农残检测的要求）。农药对照品硫磷、甲基对硫磷、乐果、氧化乐果、甲胺磷、久效磷、二嗪弄、乙硫磷、马拉硫磷、杀扑磷、敌敌畏、乙酰甲胺磷，由国家标准物质研究中心及农业部环境保护科研检测所提供，其纯度大于99%；也可以使用国际认可的、纯度要求等符合规定的进口标准物质。4色谱条件与系统适用性试验进样口温度220℃，检测器温度300℃，不分流进样。程序温度：初始120℃，每分钟10℃升至200℃，每分钟5℃升至240℃，保持2分钟，每分钟20℃升至270℃，保持0.5分钟，理论板数按敌敌畏峰计算应不低于6000，两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。5操作方法对照品储备液的制备精密称取硫磷、甲基对硫磷、乐果、氧化乐果、甲胺磷、久效磷、二嗪弄、乙硫磷、马拉硫磷、杀扑磷、敌敌畏、乙酰甲胺磷农药对照品适量，用乙酸乙酯分别制成每1ml含100ug的溶液，即得。混合对照品储备液的制备精密量取上述各对照品储备液1ml，置20ml棕色量瓶中，加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，即得。混合对照品溶液的制备精密量取上述混合对照品储备液，用乙酸乙酯制成每1ml分别含0.1ug、0.5ug、1ug、2ug、5ug的溶液，即得。供试品溶液的制备药材取供试品粉末（过二号筛）约5g，精密称定，加无水硫酸钠5g，加入乙酸乙酯50〜100ml，冰浴超声处理3分钟，放置，取上层滤液，药渣加乙酸乙酯30〜50ml，冰浴超声处理2分钟，放置，滤过，合并两次滤液，用少量的乙酸乙酯洗涤滤纸及残渣，与上述滤液合并。取滤液与40℃下减压浓缩至近干，用乙酸乙酯转移至5ml量瓶中，并稀释至刻度，精密量取1ml，置活性炭小柱（120〜400目，0.25g，内径0.9cm，用乙酸乙酯5ml预洗）上，置多功能真空样品处理器上，用正己烷一乙酸乙酯（1：1）的混合溶液5ml洗脱，收集洗脱液，置氮吹仪上浓缩至近干，精密加入乙酸乙酯1ml使溶解，即得。同法制备空白样品。测定法按上述色谱条件操作，分别精密吸取供试品溶液和与之相对应浓度的混合对照品溶液各1ul分别连续进样3次，取3次平均值，按外标法计算供试品中12种有机磷农药残留量。6、注意事项所用玻璃仪器不能用含磷洗涤剂洗涤，应用洗液浸泡洗涤，使用前用丙酮荡洗并挥干溶剂。乙酸乙酯提取液减压浓缩时，水浴温度不能高于40℃，且减压浓缩务必至近干，避免待测成分损失。为防止假阳性结果，可选择不同极性的色谱柱进行验证，有条件的可采用气质联用予以确认。本项方法的加样回收率应为70%—110%。如由于具体实验要求对本操作规程的色谱条件及操作步骤进行了修改，应在原始记录上予以记录.三、拟除虫菊酯类农药残留量测定法1、简述拟除虫菊酯类农药与DDT同属轴突毒剂，其引起的中毒征象十分相似。拟除虫菊酯类农药的毒理作用迅速，比DDT复杂，严重危及人体健康。中国药典2010年版一部收载了拟除虫菊酯类农药（氯氰菊酯，氰戊菊酯，溴氰菊酯）残留量的测定方法。本法通过提取、净化和富集等步骤制备供试品溶液，采用气相色谱法，电子捕获检测器测定。2、仪器与用具气象色谱仪，带有63Ni—ECD电子捕获器。载气为高纯氮（纯度＞99.9999%）。，必须安装脱氧管。超声仪离心机旋转蒸发仪色谱柱SE—54或DB—5弹性石英毛细管柱（30mX0.32mmX0.25um）具塞锥形瓶、圆底烧瓶、量瓶、移液管等。3、试药与试液3.1、丙酮、石油醚（60~90℃）和乙醚均为分析纯，且全部经过玻璃蒸馏装置重蒸馏，经气相色谱法确认，符合农残检测的要求（也可使用进口的农残级的试剂）。3.2、无水硫酸钠氧化铝（80—100目）微晶纤维素为分析纯3.3、弗罗里硅土3.4、农药对照品：氯氰菊酯，氰戊菊酯，溴氰菊酯对照品（由农业部农药检定所提供），纯度大于98%。4、色谱条件与系统实用性试验进样口温度220℃，检测器温度300℃，分流进样或不分流进样。分流比：20：1：5：1.程序温度：初始160℃，保持1分钟，每分钟10℃升至278℃，保持0.5分钟，每分钟1℃升至290℃，保持5分钟，理论板数按敌敌畏峰计算应不低于1X105,两个相邻色谱峰的分离度应大于1.5。注：操作中可根据样品实际情况，选择1分钟后分流进样，初始50℃（低于溶剂沸点10℃），以每分钟30℃升至160℃，保持1分钟，以每分钟10℃升至178℃保持0.5分钟，再以每分钟1℃升至290℃，保持5分钟。5、操作方法对照品储备液的制备精密称取氯氰菊酯，氰戊菊酯，溴氰菊酯对照品适量，用石油醚（60〜90℃）分别制成每1ml含20〜25ug的溶液，即得。混合对照品储备液的制备精密量取上述各对照品溶液储备液1ml，置10ml量瓶中，用石油醚（60~90℃）稀释至刻度，摇匀，即得。混合对照品溶液的制备精密量取上述混合对照品储备液，用石油醚（60〜90℃）制成每1L分别含0ug、4ug.8ug.40ug200ug的溶液，即得。供试品溶液的制备药材取供试品与60℃干燥4小时，粉碎成细粉（过五号筛），取约1〜2g,精密称定，置100ml具塞锥形瓶中，加石油醚（60〜90℃）一丙酮（4：1）混合溶液30ml,超声处理15分钟，滤过，药渣再重复上述操作2次后，合并滤液，滤液加入适量的无水硫酸钠脱水后，置100ml圆底烧瓶中，与40〜45℃减压浓缩至近干，用少量的石油醚（60~90℃）反复操作至丙酮除净，残渣用适量的石油醚（60〜90℃）溶解，置玻璃层析柱［混合小柱（内径1〜1.5cm的玻璃柱），从下至上依次是无水硫酸钠2g、弗罗里硅土4g、微晶纤维素1g、氧化铝（100目）1g和无水硫酸钠2g,用加石油醚（60〜90℃）一丙酮（4：1）混合溶液20ml预洗］上，用加石油醚（60〜90℃）一丙酮（4：1）混合溶液90ml洗脱，收集洗脱液，于40〜45℃减压浓缩至近干，再用石油醚（60〜90℃）3〜4ml重复操作至乙醚除净，残渣用石油醚（60〜90℃）溶解