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文档简介
ICS07.080
A40
T/CRHAXXX—XXXX
团体标准
T/CRHAXX—XXXX
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神经系统变性疾病生物样本与数据库建设规范
第3部分:死亡供者脑组织样本的采集与处理
Specificationforbiobankconstructionofneurodegenerativediseases
Part3:Collectionandprocessingofbraintissuebiomaterialfromdeceaseddonors
(征求意见稿)
XXXX-XX-XX发布XXXX-XX-XX实施
XXXXXXXX发布
T/CRHAXXX-XXXX
目次
前 言.............................................................错误!未定义书签。
引 言.............................................................错误!未定义书签。
1范围................................................................................4
2规范性引用文件......................................................................4
3术语和定义..........................................................................4
4总则................................................................................4
5死亡供者脑组织采集操作规程..........................................................5
6死亡供者脑组织处理操作规程..........................................................5
7质量控制............................................................................6
附录A(资料性附录)新鲜半脑取材内容..................................................8
参考文献...........................................................................9
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神经系统变性疾病生物样本与数据库建设规范
第3部分:死亡供者脑组织样本的采集与处理
1范围
本部分规定了死亡供者脑组织生物样本和信息的采集、处理和质量控制等要求。
本部分适用于死亡供者捐献的脑组织样本的采集、处理与质量控制的生物样本库,以及开展神
经系统变性等相关疾病研究的机构。
2规范性引用文件
下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中注日期的引用文
件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)
适用于本文件。
GB/T22576.1-2018医学实验室质量和能力的要求第1部分通用要求;
GB/T37864-2019生物样本库质量和能力通用要求;
GB/T39767-2021人类生物样本管理规范。
3术语和定义
下列术语和定义适用于本文件。
3.1
脑brain
中枢神经系统的主要部分,位于颅腔内。人脑包括端脑(大脑)、间脑、小脑、脑干(脑干包
括:中脑、脑桥和延髓),其中分布着很多由神经细胞集中而成的神经核团或神经中枢,并有大量
上、下行的神经纤维束通过,连接大脑、小脑和脊髓,在形态和机能上把中枢神经各部分联系为一
个整体。
4总则
4.1脑组织来源于神经系统变性疾病患者或正常人(对照)的遗体捐献,采集与处理前应确认捐
献知情同意书签署情况,并评价危险因素(如感染性疾病等)。
4.2死亡供者脑组织样本的采集与处理应遵循神经系统变性疾病生物样本与数据库建设规范第1
部分:通用要求及GB/T39767-2021、GB/T22576.1-2018、GB/T37864-2019的要求。
4.3死亡供者脑组织样本的采集与处理宜在24小时内完成,尽量减少死亡后延迟时间,以确保
尽可能体现脑组织的生前状态。采集脑组织样本前要对所采集的死亡供者按要求进行筛选。
4.4脑组织采集地点应选择医院病理解剖室或遗体志愿捐献接收站的专用解剖室,若不能及时采
集,应将遗体保存于低温环境中。
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4.5脑组织处理常规行大脑半脑固定,优势半脑取新鲜组织速冻,特殊情况下左右脑轮流固定与
冻存。以下情形需双侧脑全部固定:
a)供体死亡时间>24h;
b)两侧大脑半球可能受疾病影响不同,需要双侧脑组织病理诊断者;
c)有人类免疫缺陷病毒(HIV)、克雅病、活动性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌
(methicillin-resistantstaphylococcusaureus,MRSA)感染等患者。
4.6应完整记录采集与处理过程及供者相关信息,如脑组织样本标准分析前变量(standard
PRE-analyticalcode,SPREC)、供者的死亡时间、原因和死亡前(濒死)表现等。
5死亡供者脑组织采集操作规程
5.1查人脑组织样本采集前,应审查和确认捐献知情同意书签署情况以及供者姓名、身份信息与
知情同意书的一致性,并确认取脑组织的时间。
5.2应提前准备取材所需的医疗器械与辅助设备,如无菌解剖刀、穿刺针、手套、纱布、消毒物
品及摄像设备等。
5.3观察并判断是否有颅脑外伤,如有大范围损伤,应放弃进行脑组织样本的采集。
5.4采集时,沿两侧耳后至颅顶,冠状切开头皮,翻折、暴露颅骨,沿眉弓到枕外隆突水平环行
线上约1cm锯开颅骨,避免切口过深损伤脑组织。
5.5用解剖刀小心剥离硬脑膜,离断脑与颅骨联系,完整取出大脑、小脑、脑干以及相连的部分
颈髓,全脑称重,测量体积、长度并拍照,置入冷等张盐水,碎冰中暂时保存。
5.6沿大脑、小脑、脑干中线矢状切开,将全脑等分为左右两部分,一部分置入6%甲醛溶液固定,
另一部分进行速冷处理。
5.7采集完成后使用超级粘合胶重新连接骨骼,并用手术针和不可吸收的缝合线缝合头皮,清洁
脸部,擦干头发,由技术人员重新组合尸体。
6死亡供者脑组织处理操作规程
6.1冷冻处理
6.1.1将冷冻的新鲜半脑称重,测量并拍照。
6.1.2沿上丘脑水平或乳头体后方去除中脑及相连接的脑干、小脑部分,沿小脑脚分离脑干、小
脑。
6.1.3将新鲜大脑半球冠状切开,每片厚1cm;小脑半球沿矢状平行切面切开,脑干按水平横断面
切开。
6.1.4按照附录A中取材内容和部位分别顺序取材后按次序排列摄片。
6.1.5将组织速冻后装入标记好的自封袋,放入冻存盒,置于液氮中保存。
6.2固定处理
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6.2.1将拟固定的半脑或全脑置入6%甲醛溶液固定3天后,固定液置换为4%甲醛溶液固定2周以
上;2周后取出固定好的半脑或全脑,去除所有脑膜及血管,注意基底动脉及颈动脉的动脉硬化或
其他疾病及其病变程度。
6.2.2沿上丘水平或乳头体后方去除中脑及相连接的脑干、小脑;沿小脑脚分离脑干、小脑。
6.2.3小脑半球按矢状平行切面切片,由额叶至枕叶顺序编号,并摄片;脑干和脊髓按横断面切
片,按顺序编号并摄片。
6.2.4取材切片前应对大体标本进行病理检验,观察是否有损伤、出血、梗塞、软化灶或肿瘤等
异常情况,若在附录A中要求的常规神经病理组织取材部位的基础外,发现明显病灶则取病灶处用
于神经病理检查。
6.2.5按附录A中取材内容分别取大脑及脑干各部位组织,脱水包埋用于病理诊断与科研;其余
组织继续保存于4%中性福尔马林固定液(NBF)中,并且固定液每2年更换一次。
6.3衍生物的提取与保存
6.3.1DNA
6.3.1.1脑组织进行DNA提取时应控制组织的体积约0.5×0.5×0.5cm3。
6.3.1.2新鲜脑组织应用流水及预冷生理盐水快速将手术样本表面/腔面的血液、粘液以及污物冲
洗干净。
6.3.1.3提取的DNA应置于聚丙烯材质(polypropylene,PP)冻存管中并完整标识,长期保存于
气相液氮罐中。
6.3.2RNA
6.3.2.1脑组织进行RNA提取,厚度应小于0.5cm。
6.3.2.2手术切除后尽快将样本组织浸入装有RNAlater溶液的冻存管中,RNAlater体积至少
是组织块体积的5-10倍,容器大小应满足组织完全浸没于RNAlater溶液中。
6.3.2.3浸泡在RNAlater中的组织应放置于2-8℃环境中过夜。不同的RNAlater试剂操作应根
据厂商给出的建议使用方法进行。
6.3.2.4提取的RNA应置PP冻存管中并完整标识,于气相液氮中长期保存。
7质量控制
7.1应建立和实施脑组织样本质量控制程序,并保留质控过程和结果的记录,确保样本及相关数
据满足预期的要求。
7.2脑组织经过多步处理可获得复杂衍生物,如DNA、RNA等,应针对影响这些衍生物质量的关键
因素制定控制措施,用于评估衍生物的重要质量特性,如稳定性、完整性、浓度与纯度等。
7.3死亡供者脑组织采集完成后,用pH计测量新鲜脑脊液pH和每个脑叶和小脑切片上组织的pH,
pH值达到6以上即为质量较好,可用于后续研究。
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7.4冻存后的脑组织RNA完整值(RNAintegritynumber,RIN)达到6以上即为质量较好,可用于
后续研究。
7.5应分析质量控制数据,若不能满足既定要求,应对不合格生物样本及相关数据进行有效标识,
并采取相应措施控制其报告和分发范围。
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附录A
(资料性附录)
新鲜半脑取材内容
(注:共45个脑区、125个新鲜组织块,*为基本神经病理检测必须用到的部位,括号内的数字代表各脑区所取组
织块的序号,通常按照从额叶到枕叶,从上到下的顺序排列)
序号脑区序号脑区
1三叉神经节(1,2)24角回
2垂体25顶上小叶*(lps1,2,3)
3视神经26岛叶(1,2,3)
4嗅球27枕上回(gos1,2,3)
5松果体28脉洛丛(1,2,3)
6额极(1,2)29海马*(头1,2,3,4,5,6,7,8,9,10)
7枕极(1,2)30杏仁体*(1,2)
8小脑*(前叶1,2,3,后叶1,2,3,蚓部1,2,3)31室旁区(1,2,3)
9颞极(1,2)32上丘
10延髓*(1,2)33下丘
11脊髓(1,2)34下丘脑
12黑质*(1,2)35底丘脑
13蓝斑*36丘脑
14脑膜*(1,2,3)37尾状核*(1,2)
15中央前回(gpc1,2,3,4,5)38壳核(1,2)
16中央后回(1,2,3,4,5)39苍白球*(1,2)
17额上回(gfs1,2,3,4,5)40内囊(1,2)
18额中回*(gfn1,2,3,4,5)41伏隔核
19额下回(gfi1,2,3)。42缰核
20颞上回*(gts1,2,3,4,5)43灰质(1,2,3)
21颞中回(gtn1,2,3,4,5)44白质(1,2,3)
22颞下回(gti1,2,3,4,5)45扣带回(前1,2,3,后1,2,3)
23缘上回46
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