生物选修一DNA的粗提取与鉴定省公开课一等奖全国示范课微课金奖课件

DNA粗提取与判定1/121、鸡血细胞做试验材料，一是因为鸡血细胞核DNA含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀破。2、预冷乙醇溶液含有以下优点：一是抑制核酸水解酶活性，预防DNA降解，二是降低分子运动，易于形成沉淀析出，三是低温有利于增加DNA分子柔韧性，降低断裂；注意：2/12依据以上原理可设计提取和纯化DNA方案：方案一：30mL含DNA滤液＋2mol/LNaCl→同方向搅拌，DNA溶解→加入蒸馏水→DNA析出→过滤得到过滤物→放到2mol/LNaCl溶液中溶解→DNA-NaCl溶解液方案二：30mL滤液＋嫩肉粉（木瓜蛋白酶）→静置10～15分钟→DNA滤液方案三：30mL滤液→60～75℃恒温保温10~15分钟→过滤取得DNA滤液3/12两种材料DNA粗提取与判定过程以鸡血为材料以花菜为材料①释放组织细胞中DNA，②粗提取DNA，③将粗提取DNA深入纯化，④判定提取物是DNA4/12鸡血细胞液中DNA粗提取试验流程图5/122mol/L鸡血细胞液中DNA粗提取试验流程图6/125、过滤→取纱布上滤物纱布过滤6、再次溶解DNA2mol/LNaCl溶液取滤物鸡血细胞液中DNA粗提取试验流程图7/127、加冷酒精使DNA析出（纯化）冷酒精鸡血细胞液中DNA粗提取试验流程图8/12DNA判定9/12鸡血细胞植物组织１.0.1g/ml柠檬酸钠溶液,按1:2百分比与新鲜鸡血混合搅拌均匀。２.将血液置于冰箱中二十四小时,弃上部澄清液３.取烧杯中血细胞液约5~10ml加入到100ml烧杯中，向烧杯中加入20ml蒸馏水，用玻棒沿一个方向快速搅拌5分钟，加速血细胞在低渗溶液中破裂４.将2mol/L氯化钠溶液50ml缓缓倒入烧杯中，用玻棒沿一个方向搅拌，使DNA溶解于氯化钠溶液中，滤除杂质，取得粘稠状鸡血细胞DNA提取液５.将鸡血细胞DNA提取液置于较大烧杯中，沿烧杯内壁缓缓倒入蒸馏水，并不停搅拌，直到粘稠状DNA不再析出为止。用玻棒搅拌，使析出DNA缠绕于玻棒末端。６.将析出DNA再溶解于2mol/L氯化钠溶液中。７.在DNA氯化钠溶液中倒入95%酒精50ml（冷却过酒精效果很好），使DNA再次析出，用玻棒搅拌，使DNA再次缠绕于玻棒末端。８.DNA判定：取两支试管，各加入2ml0.015氯化钠溶液，将DNA溶解于其中一支试管中，另一支做为对照组。然后，在两支试管内加等量二苯胺试剂，水浴加热10min左右，冷却，观察试验现象。１.取新鲜植物组织（菜花）放置于冰箱中冷却1~2天２.取30克植物组织,切碎,置于研体中,倒入适量洗洁精,加入适量NaCl,充分研磨10分钟３.过滤研磨液，取上清夜置于冰箱中冷却几分钟４.取1倍体积上清液，加入2倍体积95%冷酒精当中，用玻棒轻轻搅拌，沉淀3~5分钟后可见白色絮状DNA缠绕于玻棒末端。５.DNA提纯同鸡血细胞为试验材料试验操作步骤6、7，详细数据有一定差异。６.判定10/12DNA粗提取与判定试验原理DNA在不一样浓度NaCl溶液中溶解度不一样DNA与其它细胞成份在酒精中溶解度不一样DNA和蛋白质对酶、高温和洗涤剂耐受性不一样DNA与二苯胺展现蓝色反应DNA粗提取选择适宜材料破碎细胞DNA溶解和析出DNA纯化判定DNA与二苯胺混合，沸水浴，展现蓝色反应总结：11/121.以下关于DNA粗提取与判定说法正确是A．氯化钠浓度越低，对DNA溶解度越大B．人血也可代替鸡血进行试验C．柠檬酸钠主要作用是加速血细胞破裂D．DNA不能溶于酒精2.在破碎鸡血细胞时，要先加入20ml蒸馏水，其作用是A.DNA溶解于水B．血细胞破裂，DNA释放C．稀释血液，预防凝固D．有利于搅拌3.若选择试验材料为植物细胞，破碎细胞时要加入一定量洗涤剂和食盐，加入食盐目标是A.利于DNA溶解B.分离DNA和蛋白质C.溶解细胞膜D.溶解蛋白质4.在DNA粗提取试验中，向在溶解DNANaCl溶液中，不停加入蒸