流式细胞术在白血病诊断中的应用课件

流式细胞术在白血病诊断中的应用5/9/20241流式细胞术在白血病诊断中的应用课件一简介

FCM：集激光、电子、光电测量、计算机、荧光化学、单抗的高科技仪器。对处在快速直线流动状态中的单个细胞或生物颗粒进行多参数的、定量分析和分选的技术。分两类：台式机（临床型）大型机（cellsorting).科研用。5/9/20242流式细胞术在白血病诊断中的应用课件5/9/20243流式细胞术在白血病诊断中的应用课件BDFACSVantageSE

5/9/20244流式细胞术在白血病诊断中的应用课件FCM的结构FCM的结构细胞流动室；光源；聚光系统；信号检测器；电子计算机；细胞分选装置。5/9/20245流式细胞术在白血病诊断中的应用课件光源细胞流动室聚光系统信号监测器5/9/20246流式细胞术在白血病诊断中的应用课件5/9/20247流式细胞术在白血病诊断中的应用课件数据的存储、显示与分析数据的存储：listmode显示：单参数直方图(histgram);：常用于分析DNA等；双参数：二维点图等（dotplot)；等高图：(contour)三维等高图：3Dplot设门（gating):5/9/20248流式细胞术在白血病诊断中的应用课件DataAcquisition-Listmode5/9/20249流式细胞术在白血病诊断中的应用课件一定条件下，荧光强度与细胞内DNA含量成正比。只反应一个参数与细胞数量间的关系，不能显示两个独立参数与细胞的关系。5/9/202410流式细胞术在白血病诊断中的应用课件Immunofluorescence

FlowCytometrycont.DatadisplayedGreenFluorescenceIntensityNumberofCellsUnstainedcellsFITC-labeledcellsOneParameterHistogramRedFluorescenceIntensityGreenFluorescenceIntensityTwoParameterHistogram5/9/202411流式细胞术在白血病诊断中的应用课件Contourplot5/9/202412流式细胞术在白血病诊断中的应用课件3Dplot:细胞多的地方，山峰高。5/9/202413流式细胞术在白血病诊断中的应用课件FCM检测常用参数

内部参数—散射光测定前向角散射(forwardscatterFSC):与激光束平行的信号。与被测细胞大小有关。侧向角散射（sidescatterSSC):与激光束呈90°的光信号。与细胞内结构和颗粒物质多少有关。采用FSC、SSC组合，可区分淋巴细胞、单核细胞、粒细胞等群体。5/9/202414流式细胞术在白血病诊断中的应用课件5/9/202415流式细胞术在白血病诊断中的应用课件FCM常用参数

外部参数—荧光测量荧光素探针标记的细胞所发荧光。荧光信号强弱、多少与细胞的抗原量、内含物多少有关。常用的荧光显色剂：FITC：

PE：藻红蛋白PerCP；PI：碘化丙啶，测定DNA含量。临床常用三色荧光检测，现有四色分析。5/9/202416流式细胞术在白血病诊断中的应用课件5/9/202417流式细胞术在白血病诊断中的应用课件CD45vsSSC设门CD45为造血细胞（红系除外）的共同抗原。避免杂质细胞的沾染。CD45:淋巴细胞>单核细胞>成熟粒细胞>原幼细胞5/9/202418流式细胞术在白血病诊断中的应用课件在FCM分析时特别注意：细胞的分化成熟、细胞内部结构及其分化抗原的逐渐增减是渐进过程，非突变。故同时获知一个细胞的多种参数方能正确判断细胞属性。当细胞发生克隆增殖后，可出现抗原量变、丢失和错译表达。细胞抗原的阳性率及荧光强度是同等重要的指标。5/9/202419流式细胞术在白血病诊断中的应用课件FCM可采用的标本单个细胞，新鲜标本，抗凝保存：PB；BM；（有时BM活检标本）LN（包括FNA）；CSF；组织浸润FNA或活检标本；5/9/202420流式细胞术在白血病诊断中的应用课件5/9/202421流式细胞术在白血病诊断中的应用课件5/9/202422流式细胞术在白血病诊断中的应用课件5/9/202423流式细胞术在白血病诊断中的应用课件5/9/202424流式细胞术在白血病诊断中的应用课件急性白血病FCM分析白血病细胞的抗原表达一定程度遵循正常细胞抗原表达的规律。白血病细胞为肿瘤性生长，可出现正常细胞表达以外的异常现象，如缺失、错译表达等。目前未发现白血病特异性抗原，须多参数分析。临床原/幼细胞群定性比定量更为重要。5/9/202425流式细胞术在白血病诊断中的应用课件抗体的选择：常用抗体选择：核心McAbs:确定淋系或髓系（系特异性）髓系：CD33、CD13、CD14，cMPOB-cell:CD19、CD10、cCD22CD20T-cell:CD7、CD2、CD5、cCD3

红系：GlyA

巨核细胞：CD41、CD61

非系列特异性：CD34、DR、CD455/9/202426流式细胞术在白血病诊断中的应用课件ALpanelCD7/CD117/CD45---protocalHLA-DR/CD13/CD45CD14/CD2/CD45CD19/CD5/CD45CD33/CD34/CD45CD20/CD10/CD45CD64,117,13,33,14,64—myeloid19,10,20—Blineage7,2,5—TlineageDR,34immature5/9/202427流式细胞术在白血病诊断中的应用课件AML常见CD表达FABSubtypeCommonPhenotypeComments/VariationsM0DR.CD13,CD33,CD34,CD7,cMPO*GenerallynegativeforlymphoidmarkersM1SimilartoM0exceptCD15M2DR,CD13,CD33,moreCD15,lessCD34CD19(+)--t(8;21)favorableprognosisM3DR(-)*,CD13,CD15,CD33,CD34-/+,CD2(+),DR(-)inmaturingAML,considerM3.Myeloid/naturalkillercellALCD56(+).M4/M5DR,CD15,CD14,CD33,CD13,CD4weakCD2(+),considerM4EoM6DR,CD13-/+,CD33+/-,CD34,CD45weakMatureformsexpressglycophorinM7DR-/+,CD33+/-,CD34,CD41,CD61Bewareofplatelet.adhesion5/9/202428流式细胞术在白血病诊断中的应用课件正常骨髓的FCM二维点图5/9/202429流式细胞术在白血病诊断中的应用课件5/9/202430流式细胞术在白血病诊断中的应用课件5/9/202431流式细胞术在白血病诊断中的应用课件5/9/202432流式细胞术在白血病诊断中的应用课件5/9/202433流式细胞术在白血病诊断中的应用课件Diagnosis:AML-M1

AntigenProfile:positive:DR,CD13,CD34,CD38;partiallypositiveforCD7,negativecCD3.5/9/202434流式细胞术在白血病诊断中的应用课件5/9/202435流式细胞术在白血病诊断中的应用课件5/9/202436流式细胞术在白血病诊断中的应用课件Diagnosis:Acutemyeloidleukemiawithdifferentiation(AMLM2)withfeaturesconsistentwitht(8;21)

AntigenProfile:PositiveforCD33(dim),CD34,CD13,CD15CD11b(partial)withCD19.NegativeforCD56,CD10,CD25/9/202437流式细胞术在白血病诊断中的应用课件72,female.Abonemarrowexaminationwasperformed.5/9/202438流式细胞术在白血病诊断中的应用课件5/9/202439流式细胞术在白血病诊断中的应用课件Diagnosis:AML-M5

AntigenProfile:PositiveforCD33,CD38,CD34,HLADR,CD4(dim),CD64,CD13,CD14,CD11bandCD15.5/9/202440流式细胞术在白血病诊断中的应用课件Diagnosis:Erythroleukemia(FABM6)

AntigenProfile:BlastspositiveforCD33,CD71,CD34,CD38,CD13;5/9/202441流式细胞术在白血病诊断中的应用课件5/9/202442流式细胞术在白血病诊断中的应用课件5/9/202443流式细胞术在白血病诊断中的应用课件Diagnosis:Acutemegakaryoblasticleukemia(FABM7)

AntigenProfile:PositiveforCD33,CD71,CD34,CD615/9/202444流式细胞术在白血病诊断中的应用课件ALL常见CD表达SubtypeCommonPhenotypeComments/VariationsB-precursorALLDR,CD19,CD20-/+,CD10+/-,CD34,TdT,sIg(-)InfantsCD10(-)MultilemyeloidAg—t(9;22)Pre-BALLDR,CD19,CD20+/-,CD10,CD34(-),cIgM(+),TdT+/-t(1;19)--CD34(-)—poorprognosis.B-ALLDR,CD19,CD20,CD22,CD24,CD10+/-,CD34(-),SIgL3T-ALLcCD3,CD5,CD7,CD1,CD2,dualCD4/8,CD10+/-CD34-/+FrequentlyloseT-cellAg.5/9/202445流式细胞术在白血病诊断中的应用课件6y.Girl,Hb:100g/LWBC:10X10G/L,LC80%Plt.85X10G/L5/9/202446流式细胞术在白血病诊断中的应用课件5/9/202447流式细胞术在白血病诊断中的应用课件5/9/202448流式细胞术在白血病诊断中的应用课件Diagnosis:ALL,B-precursortype(commonALL)

AntigenProfile:PositiveforCD71,CD19,CD10,CD22,HLADR,CD34;dimlypositiveforCD335/9/202449流式细胞术在白血病诊断中的应用课件A15yearoldgirlwhoplayedforherhighschoolsoccerteamnotedtohavedifficultybreathingduringherworkouts.Achestx-rayrevealedalargemediastinalmass,andshewasfoundtohaveanemiaandanelevatedwhitebloodcount5/9/202450流式细胞术在白血病诊断中的应用课件5/9/202451流式细胞术在白血病诊断中的应用课件Diagnosis:ALL,T-cellAntigenProfile:PositiveforCD7,CD5,CD3,CD34,CD10;partlypositiveforCD4andCD85/9/202452流式细胞术在白血病诊断中的应用课件5/9/202453流式细胞术在白血病诊断中的应用课件5/9/202454流式细胞术在白血病诊断中的应用课件5/9/202455流式细胞术在白血病诊断中的应用课件5/9/202456流式细胞术在白血病诊断中的应用课件Diagnosis:B-PrecursorALL(commonALL)Antigenprofile:PositiveforCD19,CD10,CD34,HLADR;negativeforCD20,CD45,smIg5/9/202457流式细胞术在白血病诊断中的应用课件未分化和双标白血病AUL：仅占1%典型的AUL：DR+，CD34+withnolineage-specificantigens.Biphenotypicleukemia(mixed):仅有7%能严格符合此型。过度诊断是由于：未排除非白血病细胞；非特异性结合；某些抗体缺乏系特异性；特异性抗原为：

B—cCD22;T—CD3;M—MPO;5/9/202458流式细胞术在白血病诊断中的应用课件ScoringsyetemforthedefinitionofbiphenotypicALPointsB-淋巴T-淋巴髓系2cCD79acCD3cMPOCD22TCRabcIgMTCRrd1CD19CD2CD117CD10CD5CD13CD20CD8CD330.5TdTTdTCD14CD75/9/202459流式细胞术在白血病诊断中的应用课件5/9/202460流式细胞术在白血病诊断中的应用课件5/9/202461流式细胞术在白血病诊断中的应用课件5/9/202462流式细胞术在白血病诊断中的应用课件Diagnosis:Acutemixedlineageleukemiawitht(4;11)

AntigenProfile:OnepopulationCD19+CD22+DR+CD20-CD10-;anotherCD33+DR+CD64+CD14+5/9/202463流式细胞术在白血病诊断中的应用课件B-LPD常见CD表达DisorderCommonPhenotypeComments/VariationsCLLDR,CD19,CD20,CD5,CD22(-),

CD23,CD10(-).clonalSIgM,FMC7(-)CD20dimPLLDR,CD19,CD20.CD5(-),CD22,CD23(-),CD10(-),brightclonalSIgCD20bright。CLL/PLL(>30%幼淋细胞)MCLDR,CD19,CD20,CD5,CD22,

CD23(-),CD10(-)FMC7(+)SIgbrightCyclinD1overexpressedFCClymphomaDR,CD19,CD20,CD5(-),CD22,C23+/-,CD10CD10negative<20%HCLDR,CD19,CD20,CD5(-),CD22,CD23(-),CD10(-),CD11c,CD25,CD103SIgDcommon,verybrightCD22andCD11cPlasmacelldyscrasiasDR(-),CD19(-),CD20(-),CD22(-),CD38,CD45,clonalcIg,BrightCD38,dimCD455/9/202464流式细胞术在白血病诊断中的应用课件

73,woman,mildsplenomegaly,WBCnormal,withslightrelativelymphocytosis,aPBspecimenwassentforflowcytometry5/9/202465流式细胞术在白血病诊断中的应用课件Diagnosis:Chroniclymphocyticleukemia

AntigenProfile:PositiveforCD19,CD22,CD5,kappa,CD23,dimlypositiveforCD20;5/9/202466流式细胞术在白血病诊断中的应用课件MCLAgprofile:positiveforCD19,CD5,lambda(bright),CD20（bright),FMC7.negativeforCD10,CD23,CD11c.CD103.C