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文档简介

单B细胞克隆技术：优势、技术流程及应用单克隆抗体（mAbs）作为医学领域中的“神奇子弹”，具有高度特异性，是诊断和治疗的重要工具。自1986年美国FDA批准首个用于肾移植排斥的抗CD3mAb（OrthocloneOKT3）以来，已有超过100种单抗药物获得FDA批准。尤其在免疫肿瘤学领域，单抗及其衍生物（如抗体偶联药物ADCs、双特异性抗体、纳米抗体等）正成为领先的生物药物。单B细胞技术的发展传统的杂交瘤技术是首个用于分离单克隆抗体的技术，但其存在一些局限性，如培养时间长和通量低。为了克服这些问题，研究人员开发了多种新技术和方法。其中，单B细胞技术作为一项突破性进展，利用了B细胞的单一特异性，通过单细胞PCR技术从单个B细胞中直接获取抗体基因，随后在体外表达出单克隆抗体。这种方法显著缩短了抗体开发周期，并能够获得全人源化的单克隆抗体，从而增强了抗体的临床应用潜力。单B细胞技术的优势高效率：相比传统的杂交瘤技术，可以更快速地获得单克隆抗体，尤其在应对新型病原体时，可以迅速从免疫动物或康复患者体内分离出特异性B细胞。高亲和力：保留了B细胞的天然VH和VL配对，抗体的亲和力高。多样性：从多种不同的B细胞中获取广泛的抗体多样性，有助于发现新的治疗性抗体。全人源性：能够获得全人源的单克隆抗体，降低抗体的免疫原性。少量细胞需求：仅需单个B细胞即可进行抗体开发，降低了对细胞数量的依赖。单B细胞技术的技术流程单B细胞技术的开发流程包括动物免疫、单B细胞分离、抗体基因的扩增和克隆等5个环节，具体如下。动物免疫：选择一种抗原来免疫小鼠或兔等动物，刺激其产生特异性抗体，并对效价进行检测。单B细胞分离：通过各种方法如流式细胞分选(FACS)、微流控技术等从外周血或淋巴组织中分离出抗原特异性的单B细胞。抗体基因的扩增和克隆：利用单细胞PCR技术扩增B细胞中的抗体基因，然后通过测序和分析选择有潜力的抗体基因。重组抗体表达：将选定的抗体基因在哺乳动物细胞表达系统中表达，产生重组抗体。抗体功能验证：利用ELISA、流式细胞术、BLI、SPR等各种生物学实验，验证重组抗体的特异性和生物活性。单B细胞克隆技术作为一种新兴的抗体发现平台，因其独特的优势，在抗体药物开发领域展现出广泛的应用前景。随着技术的不断进步和优化，预期该技术将在未来的生物医药研究中扮演更加重要的角色。本篇文章由义翘神州编辑整理，同时义翘神州提供Beacon®单B细胞分选平台，详情点击查看！参考文献：PedrioliA,OxeniusA.SingleBcelltechnologiesformonoclonalantibodydiscovery.TrendsI

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