重组蛋白质药物纯化清洁验证PPT.ppt

1、a、精制清洗验证、a、目录、清洗验证的定义法规是将要求清洗验证的前提设备限定于清洗成分的采样方法的采样点的选择检查方法特殊设备的清洗验证再验证偏差和变更控制情况分析、a、清洗验证的定义、清洗验证以书面证据所认可的清洗顺序有效地对设备进行清洗的设备可以应用于产品的制造和包装，即设备内面的残留物和微生物指标达到清洗要求中规定的标准。 在通常的清洁验证中，应该包含1、从生产结束到清洁开始的最长时间(也称为清洁时间)这三个方面2 .被清洁的设备被用于到下一次生产为止的最长保管时间(也称为清洁有效期间) 3、连续生产最长的时间(阶段性生产、大a、对法规清洁验证的要求、中国GMP的要求(2010年版)第1

2、43条清洁方法应当经过验证，证实其清洁效果，有效地防止污染和交叉污染。 清洁验证必须综合考虑设备的使用情况、使用的洗涤剂和消毒剂、取样方法和位置以及相应的取样回收率、残留物的性质和限度、残留物检测方法的灵敏度等因素。 a、法规对清洁验证的要求、GMP附件的确认和验证第38条为了确认与产品直接接触的设备的清洁操作规程的有效性，应当进行清洁验证。 必须根据有关材料，合理确定活性物质残留、洗涤剂和微生物污染的限度标准。 第三十九条清洁验证不得采用反复清洁的方法。 目视检查是重要的标准，但通常不能作为单一的容许标准使用。 第四十条清洁验证的次数应根据风险评价确定，通常至少连续进行三次。 清洗验证计划完

3、成需要很长时间，必须马上确认验证中的每批清洗效果。 根据需要，企业在清扫验证后，必须继续确认设备的清扫效果。 a、法规对清洁验证的要求、GMP附件的确认和验证第41条的验证必须考虑清洁方法自动化的程度。 在采用自动清洁方法时，使用的清洁装置必须验证设定的正常工作范围的人工清洁步骤时，必须评价影响清洁效果的各种因素。 例如，作业者、清扫顺序的详细度(例如，淋浴时间等)，若人工操作中可变要素明确，则必须在清扫验证的过程中考虑最佳条件。 第四十二条活性物质的残留限度标准应当根据毒性试验数据或者毒理学文献资料的评价而建立。 使用洗涤剂时，必须确认其去除方法和残留量。 可接受的标准必须考虑过程设备链中多

4、个设备的潜在累积效应。 第四十三条在清洁验证过程中，必须评价潜在的微生物污染，必要时还必须评价细菌内毒素污染。 必须考虑设备从使用到清洁的间隔时间，以及设备清洁后的保存时间对清洁验证的影响。 a、法规对清洁验证的要求、GMP附件的确认和验证采用第四十四条阶段性生产组织方式的，应当综合考虑阶段性生产的最长时间和最大批量数，作为清洁验证的评价依据。 第四十五条用最坏条件产品的方法进行清洁验证模式的，评价最坏条件产品的选择依据，生产线引进新产品的，需要再次进行评价。 在多用途设备中没有单一最坏条件的产品的情况下，最坏条件的确定必须考虑产品毒性、可接受日期接触量和溶解度等。 每个使用的清洗方法都需要进

5、行最坏的条件验证。 在同一流程中，使用多种同种设备进行生产，企业可以在评价后选择有代表性的设备进行清洁的验证。 第四十六条清洁验证方案应当详细描述采样位置、所选采样位置的理由和允许标准。a、法规对清洗验证的要求、GMP附件的确认和验证第四十七条必须采用清洗最终阶段的清洗液的采样或者根据采样位置确定的其他采样方法。 擦拭用的材料不能影响结果。 如果采用淋浴方法的话，在清洗工序的最后淋浴时必须进行采样。 企业必须评价抽样方法的有效性。 第四十八条对研发阶段的药物或不太生产的产品，可以采用各批生产后确认清洁效果的方式代替清洁验证。 各批生产后的清洁确认应根据本附录的相关要求进行。 第四十九条不能用清

6、洁验证方式评价设备清洁效果的，产品应当用专用设备生产。 a、法规对清洁验证的要求、EUGMP的要求36 .为了确认清洁规程的效力，进行清洁验证。 应根据有关材料合理确认产品残留、洗涤剂和微生物污染的限度标准。 这个限度标准应该可以达到，可以证实。 37 .必须使用已证实的、敏感的检测方法来检测残留或污染物。 各分析方法和机器的检测灵敏度必须能够检测出设定的合格限度水平的残留和污染物。 38 .通常，只有接触产品设备表面的清洁规程需要验证。 有时还需要考虑不直接接触产品的部分。 验证设备的使用和清洁之间的间隔时间以及清洁设备能够保持的时间，来验证清洁的间隔时间和清洁方法。 a、法规对清洁验证的要

7、求、EUGMP的要求39 .对于类似产品和类似技术，可以从类似产品和技术中选择代表性的产品和技术进行清洁验证。 可以用“最坏条件”的方法进行单独的验证试验，必须考虑验证的重要因素。 40 .为了证明方法得到验证，通常必须在三个连续批处理中使用该清洗规程，并通过检查。 41 .清洁验证不能采用“继续测试直到清洁”的方式。 42 .如果实际产品是有毒或有害物质，在清洁验证中，可以用物化特性类似的无害物质进行模拟。a、清洁验证的前提、现场、设备、公共系统(至少包括IQ/OQ )得到验证。 设备在运行确认过程中，通过核黄素试验、风险评价和其他方法确认了最难清扫的地方。 生产流程被确认了。 清洗规程已经

8、确定，明确了四个重要参数：清洗时间、清洗动作要求、清洗液浓度、清洗液温度。 有完美的使用说明书。 相关记录放在现场(操作记录、采样记录)。 分析方法和检查机器得到了验证。 (专业属性、灵敏度、精度、线性范围、检验回收率)抽样方法得到了验证。 抽样回收率。 对于容易溶于水的残留，例如作为洗涤剂的氢氧化钠，因为其溶解度远低于其溶解度，所以不需要研究回收率。 PDA TR49显示，清洁验证不要求研究生物负荷和内毒素回收率。 材料试剂通过了检查。 操作员受过训练，取得了相应的资质。 完成实验性的工作。 a、设备集团、设备集团可以筛选验证对象，减少不必要、没有价值的验证工作，使验证更加明确。 设备集团必

9、须考虑是否接触产品的活性成分、产品是否共用、设备是否重复使用、设备清洁方法(手动清洗、自动清洗)、设备材质、设备结构、设备规格。 必须基于设备在设计和清洁方面是“相同”或“相似”、“相同”或“相似”的理由，在验证方案中明确描述设备组的策略。 清洗成分，a，设备集团，例如直接接触产品的活性成分，多品种通用的设备。 验证的要点。 选择最不清洁的产品进行重点验证，其他产品很容易确认。 直接接触产品的活性成分、品种专用设备。 不接触产品活性成分的设备，如缓冲溶液、接触辅助材料的设备。一次性设备。 此类设备不需要清洗验证。 二次分组：根据设备的材质、设备的结构和清洗方法进行二次分组，对于材质、结构一致、

10、清洗方法相同的设备，可以选择规格最大和最小的设备进行验证，对其馀规格的设备也可以简单地进行确认。 a、根据设备分组、风险分析结果，结合设备选型设计的比较，对化学要素和物理要素进行分组比较，选择代表性的组合进行验证，在最差的条件下进行模拟。要清洗的成分、a、设备组、设备组验证策略相同的情况下，设计一个检验矩阵，每次检验提取几个设备，将这次所有项目的检验合计起来，至少三次验证完成，验证结束后，每个设备至少检查一个项目只要给与设备项目“相同”的充分理由，就没有必要验证该组内的各设备的项目。 为了便于管理，还可以提取其中的3台设备，分别进行完整的检查，其他设备各检查一次，只检查个别的项目。 对于“类似

11、”设备，选择最差的设备作为代表，或对设备进行分类。 例如，在容积相同但结构不同的罐中，选择结构更复杂的设备作为最坏的情况。 在结构相似但容积不同的油箱中，选择最大和最小(代表极端情况)进行正式的验证运转(除非容积被认为最差)。 选择执行确认(至少一个批次)组中的其他设备(非最坏)。 在要清洗的成分、a、要清洗的成分、清洗验证中，对所有要清洗的成分规定限度标准，一个一个地进行检查是不确定的，并不是必要的。 从一定的意义上说，洗涤的过程是溶解的过程，因此通常从各组中确定最难洗涤(溶解)的物质，以此作为参照物质，或者根据洗涤成分的共享特性选择一个指标来确认。 清洗的成分分为活性成分、工艺相关杂质、辅

12、助材料、洗涤剂、微生物(从材料、清洗过程、环境)。 活性成分中可能含有聚合物、分解物等产品相关的杂质。 根据生产阶段的不同，可能含有不同工艺相关的杂质。 例如发酵阶段包含工程菌和细胞片段等，精制阶段包含细菌内毒素、菌体蛋白质、外来DNA等。 洗涤剂最常用的是氢氧化钠溶液，可能有酸、表面活性剂等。a，例如要洗的成分，a，要洗的成分，最难的参照物的选择一液制品：成分=把参照物的原料药直接分成多种成分，一般原则上考虑到最难的参照物选择因素，洗净能力药物活性成分和辅助物水溶性残留的影响造成的风险功能分类毒性，例如最难洗净的物质不单一的物质，一起洗净最多a、允许限度、清洁验证方案中最重要的技术问题是如何

13、确定允许限度？ 生成物的残留、洗涤剂、微生物污染和其他工艺成分的选择限度，必须根据材料对生产工艺和产品安全性和纯度的影响进行逻辑决定。 容许限度通常由企业自己决定。 规定的容许限度应该具有“实用性、可用性、验证性”。 根据生产阶段的不同，容许限度也不同。 例如，前阶段，例如发酵、精制、后有精制工序，因此其清洗标准可以适度缓和。 计算设备内表面积不仅仅是单一的设备，考虑到产品生产过程中接触的设备链整体面积，高估设备表面积是保险的做法。 a，允许限度，活性物质限度洗涤剂限度微生物限度视觉清洗标准，a，允许限度，活性物质限度： 10ppm :前一批产品在设备上残留的物质都溶解在下一批产品中，浓度限度

14、不超过10ppm (百万分之十)。1 ppm=1mg/kg=1mg/l=110-6/1000 mintd :前一批产品在下一批产品中残留的活性成分不能超过最低日治疗量的千分之一。 a、容许限度、活性物质限度的纯化色谱具有选择性，其馀的活性蛋白质在工艺阶段逐渐难以传递。 残留的活性蛋白质也容易被洗涤剂分解。 因此，制剂生产阶段使用的MAC计算通常不适用于原液的生产。 可以参考PDA TR49指南的规定，使用部分限制区域的表面积计算残留量。 例如，使用最终精制工艺后的所有生产设备。 根据相关的清洗验证指南的推荐，在原液生产阶段，通常可以接收下游过程TOC 1-2ppm和上游过程TOC 5-10pp

15、m。 超滤膜、色谱等产品专用材料可以进一步提高. a、允许限度、MAC公式MAC :最大允许残留量。 MinTD :清洁产品活性物质的最小日治疗量。 MBS :同一设备生产的下一产品的活性物质的最小批量。 MaxDD :同一设备生产的下一产品的活性物质的最大日量。 PS :安全因子。 科幻SF=1000。 a、容许限度、TOC和蛋白值的关系通常采用TOC作为分析方法，TOC的定量限度约为100500ppb碳，与碳含量为50%的约2001000ppb蛋白质的数值等价(基于生物制品)，a、容许限度、洗涤剂限度：我们公司的洗涤剂成分为NaOH、NaCl 其中NaCl和水是人体的正常成分，毒性可以忽略

16、。 一般用电导率的值来设定间接的界限。 氢氧化钠的容许水平基于毒理学残留量的计算或工艺参数的效果。 因此，限度是基于注射用水的标准，或者比该标准稍高(例如5 S/cm )。 通过市场上销售的化学剂进行毒性计算是极端的。 这是因为氢氧化钠作为氢氧化钠不会被最终产品污染。 如果这些化学物质被高浓度完全污染，在过程检查中也发现了这种不匹配性。 因此，目标不符合注射用水的标准，要确认低洗涤剂的含量。 容许电导率的限度比注射用水的限度稍高，是因为注射用水的限度只适用于配管中的循环注射用水。 从循环管路中取出并通过清洗设备后(特别是通过淋浴装置可以从空气中吸入二氧化塔)，就不能期待满足WFI的电导率的极限

17、。 a、允许限度、洗涤剂限度：毒性学数据库(http: ，美国)，NaOH的LD50为40 mg/kg(mouse，ip.)，具有较高的安全阈值。 NaOH与人的LD50和小鼠一致，如果成人体重为60kg，为了达到一半致死量，需要注射2.4g NaOH。 检测洗涤剂残留的一般方法是电导率和pH。 根据测定结果，25s/cm(25)下的NaOH浓度约为5.5g/ml。 根据计算，pH为8(25)时，NaOH浓度为10-6mol/L (换算为0.04g/ml )。 电导率为25s/cm(25)或pH为8时，每种制剂产品的NaOH残留量最大为9.35g(rhG-CSF 480g/枝的安装量为1.7ml/枝)，远远低于半致死量的千分之一。 a、容许限度、微生物限度不要期待清洗过程会导致设备的无菌结果。 即使设备在线灭菌，或在下一产品生产前灭菌，通常也要评价微生物的负荷，以免以后的生产技术受到过度挑战。 只要达成一般的非无菌生产微生物限度标准(1-2CFU/cm2表面采样方法)就足够了。 对于清洗样品，一些公司使用典型的WFI值(10 CFU/100 )，而另一公司使用100cfu/100ml或1000 cfu/100 ml的值。 将限度设定得较高是因为之后设备会被灭菌。方法制定的产品原料和生产过程不增加微生物繁殖，微生物