凝集反应

,免疫学检验,1,第十三章 凝集反应,2,凝集反应概念、特点及类型。直接凝集反应原理、方法类型及临床应用。间接凝集反应原理、方法类型及临床应用。抗球蛋白试验原理、方法类型及临床应用。冷凝集试验的原理和临床应用。,本章要点,卫生检验与检疫技术专业,返回总目录,目录,4,早在1896年，Widal就利用伤寒病人的血清与伤寒杆菌发生特异性凝集的现象，有效地诊断伤寒病。 至1903年，Landsteiner在特异性血凝现象的基础上发现了人类ABO血型，并于1930年获得了诺贝尔医学奖。,概述,5,一、概念,细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后，在适当电解质存在下，形成肉眼可见的凝集现象。 颗粒性抗原还包括可溶性抗原（或抗体）与载体颗粒(O型人红细胞、绵羊红细胞、聚苯乙烯胶乳、炭粒等)结合成的致敏颗粒。,6,二、特点,1.抗原分子大，介质中成均匀的颗粒悬液。2.抗原抗体复合物以抗原为主。3.试验时稀释抗体。4.效价报告抗体的稀释度。,7,三、主要技术类型,8,第一节 直接凝集反应,细菌、红细胞等颗粒抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应（direct agglutination）。 凝集反应中的抗原称为凝集原（agglutinogen），抗体称为凝集素（agglutinin）。 常用的凝集试验有玻片法和试管法两种。,9,一、玻片凝集试验,10,临床应用:1.菌种鉴定2.血清学分型3.血型鉴定,方法评价:1.操作简单、快速2.敏感度低3.定性检测,11,二、试管凝集试验,在试管内颗粒性抗原直接与抗体结合，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。,12,为半定量试验方法，在微生物学检验中常用已知菌液与一系列稀释的受检血清混合，保温后观察每管内抗原凝集程度，通常以产生明显凝集现象的最高稀释倍数作为血清中抗体的效价，亦称为滴度。,卫生检验与检疫技术专业,临床应用：1.肥达试验Widal test2.外斐氏试验Weil-felix test3.交叉配血试验,方法评价：1.半定量试验2.操作简便、快速3.敏感度不高4.可有假阳性,14,第二节 间接凝集反应,将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体表面，然后与相应的抗体或抗原反应，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象。,卫生检验与检疫技术专业,一、载体,RBC 聚苯乙烯胶乳 载体的种类 离子交换树脂 活性炭 明胶颗粒,卫生检验与检疫技术专业,载体的条件：1.不溶于水，理化性质稳定且无化学和免疫学活性。2.大小均匀，密度与介质相近。3.能直接吸附和通过偶联剂牢固结合抗原抗体。,17,二、方法类型,根据致敏载体用的是抗原或抗体以及凝集反应的方式不同，间接凝集反应可分为4类: 1.正向间接凝集试验 2.反向间接凝集试验 3.间接凝集抑制试验 4.协同凝集试验,卫生检验与检疫技术专业,卫生检验与检疫技术专业,卫生检验与检疫技术专业,卫生检验与检疫技术专业,卫生检验与检疫技术专业,三、间接血凝试验,卫生检验与检疫技术专业,四、胶乳凝集试验,胶乳凝集试验也是间接凝集反应，因所用的载体颗粒为聚苯乙烯胶乳而得名。,卫生检验与检疫技术专业,胶乳凝集抑制试验检测HCG： 标本中加入相应量的HCG抗体，抗体与尿中HCG结合，再加入HCG胶乳抗原，本应凝集反应受到抑制，说明尿中含HCG，妊娠反应阳性。,25,第三节 抗球蛋白试验,抗球蛋白试验由Coombs于1945年建立，故又称为Coombs试验，是检测抗红细胞不完全抗体的经典方法。Coombs利用抗球蛋白抗体作为第二抗体，连接结合在红细胞表面抗原的不完全抗体，使红细胞凝集。常用试验方法有直接抗球蛋白试验和间接抗球蛋白试验。,26,一、直接抗球蛋白试验,卫生检验与检疫技术专业,直接抗球蛋白试验既可用玻片法定性测定，也可用试管法作半定量分析。常用于新生儿溶血症、自身免疫性溶血性贫血和医源性溶血性疾病等的检测。,28,二、间接抗球蛋白试验,卫生检验与检疫技术专业,此试验可用于检测母体Rh（D）抗体，以便及早发现和避免新生儿溶血症的出现。可用于对红细胞不相容输血所产生的血型抗体进行检测。还可对某些细菌、立克次体感染后产生的不完全抗体进行检测。,卫生检验与检疫技术专业,第四节 冷凝集试验,冷凝集试验是用于检测血清中冷凝集素的方法。 冷凝集素（cold agglutinin）是冷反应型抗红细胞抗体，具有较强的凝集红细胞的作用，属于IgM型抗体，可存在于正常人血清中，但是正常人血清抗红细胞抗原的lgM冷凝集素效价比较低。,31,冷凝集试验可协助诊断