肺炎支原体检测培养基培训资料ppt课件

肺炎型支原体药敏检测培养基,陕西瑞凯生物科技有限公司,研发单位：第四军医大学生 产 商：瑞凯生物科技,资质：,什么是支原体,支原体是一种介于细菌和病毒之间，无细胞壁的最小病原微生物。比细菌小，比病毒大，可通过滤菌器，显微镜下观察不到。支原体的大小为0.20.3um,无细胞壁，不能维持固定形态而呈多边形。没有细胞壁，因此对影响细胞壁合成的抗生素，如头孢类，青霉素类不敏感。对热抵抗力差，通常55摄氏度经15分钟处理可使之灭活，因此应严格控制培养温度在37摄氏度。繁殖所需物质特殊，所以许多培养基培养时间长。因此更适合支原体繁殖的物质及配合比例，就显得尤为重要，同时也是不同培养基的主要技术区别所在。,支原体的分类：,1.自然界目前已经发现的150多种；2.与人有关的（人类能感染的）： 人型支原体（MH）、解脲支原体（UU）、肺炎支原体（MP）、生殖支原体（MG）,显微镜下观察肺炎支原体,肺炎支原体传播途径及发病率,1.通过呼吸道飞沫传染；2.可散发流行；3.全年均可发病；4.易感染的人群儿童，青少年；5.发病率：由支原体引起的感冒占整个感冒20%-40%，支原体肺炎的发病率可占所有肺炎病例的30%-40%。,引起感冒的几种原因及检测与治疗,细菌感染，可通过检查血常规，测定白细胞，中性粒细胞高低来判断。小时出结果。头孢类，青霉素类抗生素。病毒感染，通过血常规，测定淋巴细胞高低来判断。小时出结果。无特效药，用解热镇痛来缓解，靠免疫力。肺炎支原体感染。大环内酯类抗生素（破坏细胞中蛋白质合成） 1 血清学检测，也称抗体检测，检测患者血液中是否存在支原体抗体。小时出结果。目前普遍采用。 2检测，依靠大型设备，手段繁琐，无临床价值，目前只做科研使用。传统培养法直接查病原体，所需时间长，但准确率高。,肺炎支原体几种检测方法对比,1：血清学检测（抗体检测），3小时出结果是指抗体产生后经3小时检验，但从人感染支原体到体内产生抗体需要5天，且治愈后抗体在体内衰退仍需月。所以说无论什么时间做抗体检测结果都不准确。：传统培养法，直接查患者体内病原体，准确率高，但所需时间长（小时）。：瑞凯培养法，准确率高，直接提取患者咽部分泌物查病原体，发病前2-3天就能查到，培养时间短小时报结果。,目前医院检查肺炎支原体常用手段及治疗,常用抗体检测，患者由于时间问题未产生抗体时，靠经验用药，天后，如无缓解再测抗体，产生后换药治疗。联合用药，增加患者负担，造成滥用抗生素。抽血检测患者痛苦，易造成交叉感染。操作时采样，血清离心繁杂费时费力。,瑞凯培养法检测的临床意义,直接查病原体，发病前天就可在呼吸道分泌物中发现肺炎支原体，实现早期发现，快速正确诊断，及时治疗。根据患者病情各异，指导正确用药。避免滥用抗生素，减少患者负担。无需采血，减少患者痛苦及恐怖心里。,肺炎型支原体药敏检测培养基的作用机理,pH为碱性,红色（营养物质+葡萄糖+酚红+抑菌剂）,肺炎支原体,pH为酸性,黄色,37培养,葡萄糖,分解,H,+,产品由培养基与药敏板组成,药敏板制备,药敏板内分别包备11种不同浓度的抗生素，为低浓度，为高浓度。两孔未包备。,肺炎支原体药敏检测培养基的使用步骤,常温下使培养基解冻，滴加50ul到药敏板12号A孔，再加50ul石蜡油封盖以防挥发。用无菌棉拭子（或咽拭子）在口腔咽部捻转数次取出棉拭子置于培养瓶内，搅动数次，对着瓶壁尽量挤压出其中液体，然后取出棉拭子弃之。移液器将接种后的培养基分别滴加到药敏实验板除阴性对照孔外的23个小孔内，每孔50ul，然后每孔再加50ul的液体石蜡。将药敏板连同培养瓶内剩余培养基放置37C恒温箱培养24小时。,结 果 判 断,阳性判断：A:培养瓶和药敏板的12号A孔培养基应保持原来的红色，如果变黄操作过程可能出现问题，建议放弃本次试验。B:培养瓶和药敏板的12号B孔保持原来的红色为阴性，变黄判定为阳性。药敏判断：标本判定阳性后再分别观察111号孔，如果A、B两孔均呈黄色说明肺炎支原体对该抗生素耐药。A孔呈黄色，B孔保持红色，则是中度敏感；如果A、B两孔均保持原来的红色则肺炎支原体对该抗生素敏感。,肺炎支原体,37培养,50ul/孔,50ul/孔,敏感,中敏,耐药,注 意 事 项,1：培养液-4C至-15C冷 冻保存，不能反复解冻。2：取样位置准确，取样 量足。3：取样后在10分钟 内接种到培养基。4：37C恒温。,解答大家关心比较多的问题：,1.采样部位：咽喉部位（舌腭弓、悬雍垂、扁桃体）,2.采样方法：A.棉拭子浸润生理盐水后并挤压出棉拭子液体采样更佳；B.捻转数次，粘取尽量多（没有具体量值）的分泌液； C.棉拭子压住舌根部，令患者咬住30秒左右取出。,3.采样后，咽拭子能放置多久？ 我们建议采样后立即将咽拭子放入培养 基内，据国外文献报道，MP离开宿主后 会很快死亡（15分钟以内）。另外这样也 避免了感染其他杂菌的可能。（门诊的使用）4.培养基能否快速解冻？ 可以。科室可以根据当天的大概用量，早上在恒温 箱里快速解冻。5.当天解冻了，没有用完的培养基，能再冻起来吗？ 不能反复冻融。但是您可以把它冷藏起来， 明天继续用。培养基在冷藏环境下至少可 以保存一周以上。,6.如果培养结果偶尔出现浑浊、 沉淀或者半红半黄的情况， 应该如何判断？ 出现这样的情况全部判断为 阴性。培养基内发生的这种 变化不是由于存在MP引起的，而是因为患者口腔 内的食物残留或者其他口腔杂菌引起的。培养基 特异性极强，只有MP能在其中快速生长繁殖，而 其他微生物的代谢和酸性物质不敏感，才会出 现以上情况。？,7.试剂的准确率如何？ 经临床对比验证，我们的 培养基检验结果的准确率 达到了98以上。菌株 试验100%准确。8、标本量是否对结果有影响？ 从之前各医院的使用结果上看，标本量对培 养时间有一定的影响，如果没有达到足够的 标本量（即采取的咽部分泌物量），就可 能无法在24小时内检出阳性，但24小时 后仍可能出现阳性。所以采集时尽可 能取足标本。,9. 口内微量的支原体是 否会导致结果阳性？ 不会！当咽部提取的 分泌物内支原体量没 有达到104106时 （也就是没有达到肺炎 支原体的发病基数）， 24小时内结果不会呈现阳性，但是由于本 试剂的敏感性达到10-8，延长培养时间也 可能出现阳性。,9. 关于临床效果对比？培养法本身就是微生物检验的金标准， 如果与其它检查抗体的检验方法对比， 是没有什么可比性的，因为这是两种 完全不同的检查方法，临床目的和意 义也是完全不一样，MP培养更适合用 于早期筛查和指导临床用药；如果比较应该在培养方法之间比较，也只有快速出 结果的培养才能真正实现早确诊、早治疗，对指导 临床用药意义更大； 真正具有意义的效果观察应该是根据试剂 检验结果，结合临床医生对患者的诊断以 及用抗MP药后结果来综合判断试剂的检 验效果。,10. 关于临床试用 由于肺炎支原体的发病率仅占肺炎患者的30%左右，如果仅仅观察10例20例，是不能真实反应检查效果的，也不能因此得出任何结论。所以也就不能真正观察出试剂的有效率。建议观察50100例之间，结合临床诊断及用抗MP药后效果作出判断，同时鼓励临床医生多送较典型的肺炎支原体患者标本进行试验对比，相对较有实际意义。,11、关于假阳性很多同类培养基假阳性率高的原因 试剂的抑菌剂失效； 试剂本身特异性不高（目前一般 试剂主要存在这个原因 ）； 由于产品存在出结果时间缺陷， 但又想在短时间内出结果，因此 在产品中故意少加抗菌剂或只加 抗菌谱小的抗菌剂，让其它细菌 快速繁殖导致阳性结果，从而达 到“表象”的快速。,12、关于假阴性,产生假阴性原因取样后没有及时进行培养；培养温度没有控制好，过低或过高；储存条件不足以及放置温度不符合要求致使试剂失效；取样部位不正确；取样量不足；取样前患者使用过抗MP药物。,13、关于特异性：,1、MP检测培养基的特异性是根据MP培养基的执行标准， 通过陕西省医疗器械检测中心实验室数据合格的有效结果 批复，是有合法临床依据的；2、MP的特异性检测依据主要是根据国家相关的检验标准规 定，检验组：加入MP阳性标准株检验结果为阳性；对照 组：加入呼吸道其它细菌检验结果为阴性。标准株组（检 验组）的阳性