LY∕T 2347-2014 刚竹属DNA扩散片段长度多态性（AFLP）分析方法

ICS6502020 B65 . . 中华人民共和国林业行业标准 LY/T23472014 刚竹属 DNA扩增片段长度多态性 AFLP ( ) 分析方法 MethodofDNAam lificationfra mentlenth olmorhism AFLP p g g p y p ( ) forPhyllostachysbamboo2014-08-21发布 2014-12-01实施 国 家 林 业 局 发 布 LY/T23472014 前 言 本标准按照 给出的规则起草 GB/T1.12009 。本标准的附录为规范性附录 。本标准由全国竹藤标准化技术委员会 提出并归口 (SAC/TC263) 。本标准起草单位 国际竹藤中心 北京林业大学 中国林业科学研究院亚热带林业研究所 : 、 、 。本标准主要起草人 李雪平 高志民 牟少华 陈敏 袁金玲 : 、 、 、 、 。 LY/T23472014 刚竹属 DNA扩增片段长度多态性 AFLP ( ) 分析方法1 范围 本标准规定了刚竹属 Phyllostachys 竹种的 提取 酶切 连接 扩增实验步骤及采用的仪器 ( ) DNA 、 、 、 设备 。 本标准适用于刚竹属竹种 多态性的分析 DNA 。2 试剂 21 所用化学试剂如没有特殊说明 均为分析纯 . , 。22 提取液 细胞裂解液 . DNA :1mol/LTris-HClpH8.2、 (1mol/LTris-HClpH7.5,0.25mol/LED- 氯化钠 与 按 混合 在使用前加入亚硫酸钠至终浓TApH8.0,5mol/L ,2% CTAB) 5% SLS 552 , 度为 0.02mol/L。23 三氯甲烷 异戊醇 . =241。24 异丙醇 . 。25 乙醇 无水乙醇加蒸馏水定容到 . 70% :70mL 100mL。26 氯化钠 称取 氯化钠 用蒸馏水溶解后定容到 . 5mol/L : 29.22g , 100mL。27 溴化乙锭 称取 溴化乙锭 用蒸馏水溶解后定容到 . 0.5mg/mL : 5mg , 10mL。28 变性缓冲液 去离子甲酰胺 二甲苯青 溴酚 . : 50mL,EDTA(0.5mol/L,pH=8.0)1mL, FF0.125g, 蓝 0.125g。29 硼酸 定容到 . 10TBE:Tris108.0g, 55.0g,0.5mol/LEDTA(pH8.0)40mL, 1000mL。210 丙烯酰胺溶液 甲叉双丙烯酰胺 丙烯酰胺混合加水定容到 . 40% :2.0g ,38.0g 100mL。211 过硫酸胺溶液 过硫酸胺加水定容到 . 10% :1.0g 10mL。3 仪器 31 仪 具有 功能 温度精度 . PCR ( touchdown , 0.2 )。32 移液器 . 。33 低温离心机 以上 . 4 (max14000r/min )。34 水浴锅 . 。35 电泳仪 可满足 测序 . ( DNA )。36 紫外分光光度计 . 。37 分析天平 . 。38 摇床 . 。4 试验步骤