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鼠伤寒沙门氏菌微粒体酶试验Ames test,原 理,鼠伤寒沙门氏菌野生型（原养型）,人工方法正向诱变,鼠伤寒沙门氏菌组氨酸缺陷型（异养型）,诱变物作用回复突变,Ames是检测遗传毒理学的体外试验，检测终点是基因突变,通过统计回复突变的菌落数判断受试物质的致突变性高低,S-9混合液的制备过程（使需要代谢激活的物质得以活化）,暴露肝脏，KCL灌注,断头处死大鼠、放血、去皮,取出肝脏，加入KCL剪碎,制成匀浆，9000g离心,取上清、分装、冻存,1 实验用菌液制备 平板菌落计数法，是种统计物品含菌数的有效方法。方法如下：将待测样品经适当稀释之后，其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液涂布到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞；统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品中的含菌数。2 菌株性状鉴定 （1）组氨酸营养缺陷型 （2）深粗糙突变测定 （3）R因子的鉴定 （4） 切除修复缺失鉴定 （5）自发回变量测定 （6）回变特性鉴定,实验步骤与方法,菌株特性鉴定,1、组氨酸需求特性,菌株特性鉴定,2、深粗糙（rfa）特性,菌株特性鉴定,3、紫外线敏感特性,菌株特性鉴定,4、抗氨卞青霉素（R因子）特性,菌株特性鉴定,5、自然回变特性,菌株特性鉴定,Ames试验菌株特性,6、回变特性鉴定,菌株特性鉴定,实验设计原则,Ames试验设计,Ames试验方法及结果评价,点样纸片周围长出一圈密集的His+回变菌落者，受试物即为阳性致突变物质。,背景菌生长良好受试物每皿回变菌落数增加一倍以上并有剂量-反应关系，试验结果具有重现性即可认为该受试物为诱变阳性。,结果与报告,1 实验结果判断与评价（1）点试法 凡在点样纸片周围长出一圈密集的his回变菌落者，该物质具有致突变性，即为阳性；如只出现少数散在菌落，则为阴性。（2） 掺入法 突变率=诱发回变his菌落数/自发回变his菌落数 确认待测物具有致突变作用，必须具有以下几点： 诱发突变His+菌落数为自发回变His+菌落数的2倍或2倍以上 回变菌落数随剂量增加而增加
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