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文档简介

实验二细菌革兰氏染色一、实验目的n 学习微生物制片、染色的基本技术n 掌握细菌革兰氏染色及无菌操作技术n 进一步观察细菌的基本形态C.Gram（ 革兰）于 1884年发明的一种鉴别不同类型细菌的染色方法。二、实验原理革兰氏染色1、用碱性染料结晶紫对菌液涂片进行 初染2、用碘溶液进行 媒染 ，其作用是提高染料和细胞间的相互作用从而使二者结合得更牢固。3、用乙醇或丙酮冲洗进行 脱色 。在经历脱色后仍将结晶紫保留在细胞内的为革兰氏阳性细菌，而革兰氏阴性细菌的结晶紫被洗掉，细胞呈无色。4、用一种与结晶紫具有不同颜色的碱性染料对涂片进行 复染 。例如沙黄，它使原来无色的革兰氏阴性细菌最后呈现桃红到红色，而革兰氏阳性细菌继续保持深紫色三、实验材料1、菌种：大肠杆菌（ E.C）、枯草杆菌（ B.S）2、染料：结晶紫、复红、碘液等3、材料： 95%酒精等n 涂片 风干 固定 初染 水洗 媒染 水洗 脱色 水洗 复染 水洗 干燥 镜检四、实验方法菌悬液菌悬液 涂片涂片 干燥干燥滴加无滴加无菌水菌水固定固定取菌苔取菌苔涂片涂片Smear preparation Heat fixingcrystal violet stain wash with water StainingCounterstain with Safranin 注意事项：（ 1）在涂片时不可过厚，否则在染色脱色时，都不易均匀，固定时，不可过热，以载玻片不烫手为宜。（ 2）严格掌握脱色程度，是革兰氏染色的关键步骤。如脱色时间太长，阳性菌会误为革兰氏阴性菌，时间不足，革兰氏阴性菌会误为革兰氏阳性菌。（ 3）在镜检时，以分散开的菌体的革兰氏染色反应为准。（ 4）设定阴性和阳性对照，确保实验的可靠性。五、思考题1、讲述革兰氏染色的原理并指出 E.C和 B.S分别属于革兰氏阳性或阴性？2、观察细菌为什么要染色？为什么细菌染色多采用碱性染料？3、做革兰氏染色涂片为什么不能过于浓厚？革兰氏染色成败的
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